廣藿香加入陳皮后提取工藝及測定條件的優(yōu)化研究*

齊樂輝，龍丹丹，田 園，許樹軍

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150040）

廣藿香味辛，微溫，尤其在治療胃腸道系統(tǒng)疾病方面有很好的療效。因?yàn)閺V藿香的揮發(fā)油性成分不易溶于水，非揮發(fā)性成分溶于水，且人們服用藥物時(shí)基本是用水進(jìn)行送服，因此，對(duì)于廣藿香中的非揮發(fā)性成分即水溶性成分的研究有很重要的實(shí)際意義。根據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)研究，廣藿香具有抗氧化、抗癌、抗炎、抗病原微生物、胃腸系統(tǒng)保護(hù)、抗呼吸道感染[1-3]等作用。

陳皮對(duì)于改善心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能[13,14]等方面具有很好的藥效活性。中醫(yī)臨床上經(jīng)常使用廣藿香和陳皮兩種藥材，陳皮和廣藿香都可用于治療惡心嘔吐，并且中醫(yī)臨床中二者的配伍應(yīng)用廣泛，對(duì)于加入陳皮后對(duì)廣藿香中某種化學(xué)成分的提取效率的影響的研究是有據(jù)可循的。藥物的藥理效應(yīng)基礎(chǔ)在于其化學(xué)成分，尤其是有效活性成分[4,5]?？梢越Y(jié)合運(yùn)用“藥對(duì)”的相關(guān)知識(shí)，探討陳皮對(duì)廣藿香中某些成分的提取效率是否有積極的影響，可對(duì)將來增強(qiáng)廣藿香的有效藥理活性或者降低廣藿香的某些不良反應(yīng)的相關(guān)研究提供切實(shí)可行的研究方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器及材料

LT502型電子天平（常熟市天量儀器有限責(zé)任公司）；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HR-20 1000g多功能粉碎機(jī)（上海哈瑞斯電器有限公司）；Ultimate 3000超快速液相色譜儀（賽默飛世爾科技（中國）有限公司）。

廣藿香藥材產(chǎn)于廣東肇慶；姜厚樸產(chǎn)于浙江；香草酸和原兒茶酸對(duì)照品購于上海源葉生物科技有限公司；甲醇（色譜純天津星馬克科技發(fā)展有限公司）；乙腈、H3PO4均為色譜純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；純凈水為娃哈哈集團(tuán)生產(chǎn)。

1.2 藥材的粉碎

使用LT502E電子天平分別稱取廣藿香藥材500g，陳皮藥材200g。使用HR-20多功能粉碎機(jī)粉碎廣藿香和陳皮藥材。粉碎結(jié)束后將藥材粉末密封，置于常溫干燥的地方保存。

1.3 提取方法的優(yōu)化

1.3.1 提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 為了使本實(shí)驗(yàn)最終提取所得到的非揮發(fā)性成分（原兒茶酸、香草酸）含量較高，使HPLC測定得到的色譜圖效果更佳，總結(jié)分析相關(guān)知識(shí)，最終討論決定了可行性較高的正交實(shí)驗(yàn)方法。使用L4（23）正交作用表，用每次提取時(shí)間（min），廣藿香-陳皮配料比和蒸餾水用量（mL）作為考察因素，用香草酸的峰面積（mAu·min）作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行試驗(yàn)得出提取效率最高的廣藿香提取條件。

表1 因素水平Tab.1 Factor levels

1.3.2 提取方法的選擇 電子天平稱取粉碎過后的廣藿香藥材粉末2.5g，用250mL具塞錐形瓶或圓底燒瓶盛裝。按表2中的實(shí)驗(yàn)過程進(jìn)行提取，到時(shí)間后停止加熱，減壓抽濾，留濾渣，放入原儀器中。再按照原實(shí)驗(yàn)流程重復(fù)提取2次，合并3次濾液。

1.4 色譜條件的優(yōu)化

為了在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)快速分離并得到最佳峰形，在正式試驗(yàn)開始之前，對(duì)流動(dòng)相、檢測波長和洗脫程序等色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，使最終經(jīng)HPLC測定得到的色譜峰能夠更好的分離開來。

對(duì)于流動(dòng)相的選擇，現(xiàn)用于HPLC檢測廣藿香水溶性成分的流動(dòng)相乙腈-0.1%磷酸水對(duì)廣藿香水提取液進(jìn)行過檢測。本實(shí)驗(yàn)分別使用了254nm作為檢測波長對(duì)廣藿香水提取物進(jìn)行了測定。采用的色譜條件及洗脫程序見表2。

表2 洗脫程序Tab.2 Elution procedure

2 結(jié)果與討論

2.1 提取方法的選擇

圖1為廣藿香及廣藿香－陳皮藥對(duì)的HPLC色譜圖。

圖1 廣藿香及廣藿香-陳皮藥對(duì)的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of Patchouli and Patchouli-Tangerine peel

由圖1可知，S2中的色譜峰數(shù)目比S1中的多，S2中的色譜峰較高，峰型比較對(duì)稱。因此，選用加熱回流提取作為本實(shí)驗(yàn)的提取方法。流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水時(shí)，廣藿香提取液經(jīng)HPLC測定，10min內(nèi)色譜峰數(shù)目最多，色譜峰的峰形與其他的色譜圖比較起來最好。并且H3PO4不僅可以作為色譜修飾劑，而且對(duì)某些化合物也有電離作用，因此，在流動(dòng)相中加入0.1%的H3PO4溶液有助于使提取溶劑中的化學(xué)成分快速分離并顯示出最佳峰形。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

從表3中可以發(fā)現(xiàn)，影響峰面積大小的因素主次順序?yàn)锽＞A＞C，廣藿香提取效率最優(yōu)的組合為A1B1C1。因此，可以確定A1B1C1為水加熱回流提取的最佳工藝，即：每次提取時(shí)間為30min，廣藿香-陳皮藥材配料比為1∶1，蒸餾水每次用量為50mL。

表3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Orthogonal experiment results

3 結(jié)論

采用蒸餾水為提取溶劑，加熱回流提取廣藿香中的水溶性成分效果最佳。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，影響香草酸的峰面積大小的因素主次順序?yàn)锽＞A＞C，即廣藿香-陳皮配料比＞每次提取時(shí)間＞蒸餾水用量；廣藿香提取效率最優(yōu)的組合為A1B1C1。因此，可以確定A1B1C1為水加熱回流提取的最佳工藝，即：每次提取時(shí)間為30min，廣藿香-陳皮藥材配料比為1∶1，蒸餾水每次用量為50mL。色譜條件優(yōu)化結(jié)果顯示，采用乙腈-0.1%磷酸為流動(dòng)相，254nm為檢測波長進(jìn)行梯度洗脫效果最佳。