羊布魯氏菌病的診斷與防治

朱應(yīng)平

（山東省濟(jì)南市鋼城區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，山東 濟(jì)南271104）

布魯氏菌是一種對環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)且對動物和人類侵害性大的致病菌，除了感染羊、牛、豬等家畜外，還可感染人類，在我國屬于二類動物疫病。致病菌可通過消化道、呼吸道、昆蟲叮咬和受損黏膜等渠道感染易感動物和人類[1]。

1 病原特點

羊布魯氏菌是一種短桿（球）狀的革蘭氏陰性嗜氧菌，無莢膜無芽孢，對環(huán)境的耐受力極強(qiáng)，在干燥或濕潤環(huán)境中均可存活數(shù)月。但對高溫、紫外線光照不耐受，當(dāng)環(huán)境溫度超過100℃且濕度較小時，8 min可將其殺滅，在80℃的濕熱環(huán)境中6 min可被殺滅。紫外線光照4 h也可殺滅此菌。同時，羊布魯氏菌對大多數(shù)消毒劑不耐受。

2 流行病學(xué)

2.1 傳染源

感染羊布魯氏菌的病羊和隱性帶菌羊。

2.2 易感動物

牛、羊、豬和人類均可感染，母畜發(fā)病率高于公畜，成年動物發(fā)病率高于幼齡動物，尤其是第一胎母畜更易感。

2.3 傳播途徑

母羊產(chǎn)道分泌物、糞尿、乳汁、羊水、胎衣和流產(chǎn)組織，種公羊的精液，病死羊的肉、組織臟器、羊皮、羊毛等均含有大量的羊布魯氏菌。該致病菌可通過消化道、呼吸道、結(jié)膜或交配傳播，也可通過吸血昆蟲機(jī)械傳播。

2.4 流行特點

一是無典型的流行季節(jié)。但夏季高溫潮濕有利于布魯氏菌滋生。二是呈地方性流行。在老疫區(qū)，母羊流產(chǎn)率低；在新疫區(qū)，主要危害妊娠母羊，導(dǎo)致流產(chǎn)率高。

3 臨床癥狀

3.1 羔羊癥狀

羊布魯氏菌對羔羊危害不大，許多羔羊感染后不會出現(xiàn)典型癥狀。

3.2 母羊癥狀

羊布魯氏菌對母羊尤其是妊娠母羊危害大，發(fā)病初期，母羊食欲不佳、精神不振、逐漸消瘦，陰道分泌物呈黃色。一般在妊娠后3～4個月開始出現(xiàn)子宮內(nèi)膜炎癥狀，陰道分泌物呈灰白色，突然流產(chǎn)，即使能夠分娩出胎兒也多為死胎，且產(chǎn)后胎衣不下的幾率非常高。未懷孕母羊感染后發(fā)情不規(guī)律，受胎率低。哺乳母羊感染后出現(xiàn)乳房炎，部分母羊還會出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎等癥狀。

3.3 公羊癥狀

發(fā)病初期食欲和精神不振、喜臥，隨著病情發(fā)展，公羊睪丸發(fā)熱、萎縮，出現(xiàn)睪丸炎甚至壞死，精液品質(zhì)明顯變差，甚至喪失種用功能。

4 病理解剖

4.1 母羊

妊娠母羊流產(chǎn)組織呈黃色，內(nèi)含大量膠樣浸潤物質(zhì)。流產(chǎn)胎兒有明顯的敗血癥狀，尤其是流產(chǎn)胎兒的皮下和肌肉組織出血明顯，胃腸黏膜充血。胎盤絨毛膜充血腫脹，并有許多出血點，部分組織呈糜爛狀。母羊肝臟有壞死灶，真胃黏膜出血明顯，脾臟淋巴結(jié)腫大。

4.2 公羊

公羊睪丸腫脹，陰囊皮膚上有少量出血點，病情嚴(yán)重的公羊睪丸上出現(xiàn)壞死灶。

5 診斷方法

5.1 顯微鏡診斷

無菌條件下采集病羊流產(chǎn)組織、胎衣、真胃內(nèi)容物等制成涂片，用專用的布氏桿菌染色液對涂片進(jìn)行染色，然后置于光學(xué)顯微鏡下觀察致病菌，若能發(fā)現(xiàn)短小桿菌且顏色呈紅色，即說明病料中含有布魯氏菌。

5.2 致病菌的分離培養(yǎng)

無菌條件下采集病羊血液，接種至血液增菌液中，混勻后37℃下培養(yǎng)3 d，若血增菌陽性報警則提示為陽性菌。可接種到巧克力瓊脂培養(yǎng)基上，置于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)37℃下培養(yǎng)24～48 h，再置于超凈臺上觀察，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基表面有光滑濕潤的灰白色針尖狀菌落，則初步判定為布魯氏菌。

5.3 血清學(xué)診斷

5.3.1 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）。ELISA實驗檢測儀器為酶標(biāo)儀，可杜絕人為判斷造成的誤差，具有靈敏度和準(zhǔn)確度高的特點，但是成本高。在96孔板中加入陰性、陽性和待檢血清，25℃孵育1 h后洗滌，加入酶標(biāo)抗體，25℃下孵育30 min后洗滌，加入TMB底物，避光孵育20 min后加入終止液，在酶標(biāo)儀上檢測450 nm處的吸光值，若S/P≥120%則為陽性。

5.3.2 虎紅平板凝集實驗 （RBPT）。RBPT實驗耗時短、操作簡便、成本低、靈敏度高，適用于羊群、牛群和生豬群體的普查。采集待檢羊血液樣本，離心收集血清，在玻璃板上加入虎紅平板凝集抗原（粉紅色）和等量待檢血清，用無菌牙簽混合后，4～5 min內(nèi)觀察反應(yīng)結(jié)果，若仍為粉紅色且無凝集則為陰性，若發(fā)現(xiàn)粉色變淡且出現(xiàn)凝集則為陽性。

5.3.3 補(bǔ)體結(jié)合試驗（CFT）。CFT實驗操作復(fù)雜，反應(yīng)成分較多，但特異性和靈敏度高，假陽性率低。準(zhǔn)備溶血素、抗原、補(bǔ)體、血清樣本（陰性、陽性和待檢血清）、2.5%紅細(xì)胞懸液這五種材料，若出現(xiàn)40%溶血即為陽性，若出現(xiàn)100%溶血則為陰性。

5.3.4 試管凝集實驗（SAT）。SAT實驗成本低、敏感性強(qiáng)，但操作復(fù)雜，容易受實驗人員主觀判斷的影響，因此不適于布魯氏菌的普查。

5.4 分子生物學(xué)診斷

熒光定量PCR方法具有靈敏度和特異性高的特點，且能定量，但是儀器設(shè)備成本高，對操作人員的技術(shù)水平有一定的要求，因此目前只局限于實驗室檢測。

6 防治措施

6.1 定期篩查、檢疫

每年對羊群進(jìn)行2～3次布魯氏菌血清學(xué)檢測，若發(fā)現(xiàn)陽性病羊需要及時隔離和進(jìn)行藥物治療，并對治療后的病羊進(jìn)行多次血清學(xué)檢測，若3次以上均為陽性則需淘汰[2]。

6.2 自繁自養(yǎng)，降低外源性風(fēng)險

養(yǎng)殖場最好采用自繁自養(yǎng)的飼養(yǎng)方式，這樣可以杜絕外源性病菌侵襲。若必須引種，則需要對引種區(qū)域的羊只做好流行病學(xué)調(diào)查，并核查產(chǎn)地檢疫證明。羊只到場后不能立即混群飼養(yǎng)，需要隔離30 d后進(jìn)行布魯氏菌病篩查，只有結(jié)果為陰性才能合群。隔離期間由養(yǎng)殖場派專門人員進(jìn)行飼養(yǎng)管理。

6.3 合理護(hù)理羔羊

若母羊妊娠后期感染布魯氏菌，則羔羊出生后體質(zhì)較弱，也可能攜帶致病菌，因此需要做好羔羊護(hù)理工作。即羔羊出生后與母羊隔離飼養(yǎng)，初乳和常乳可以是其他非感染的健康母羊的乳汁。羔羊至5月齡后采集其血液樣本進(jìn)行布魯氏菌篩查，若為陰性則繼續(xù)飼養(yǎng)；若為陽性則進(jìn)行隔離，并根據(jù)治療情況決定淘汰與否。

6.4 環(huán)境消毒

由于布魯氏菌對大多數(shù)消毒劑較為敏感，養(yǎng)殖戶可通過日常消毒有效殺滅土壤和環(huán)境中的致病菌。羊舍、用具等可用2%氫氧化鈉溶液或10%石灰乳噴灑消毒。及時更換墊草，保障羊舍和運(yùn)動場地面干燥無糞污。對病死羊及其污染物要做好無害化處理[3]。

6.5 人員防護(hù)

養(yǎng)殖場人員必須做好自身消毒，接觸羊群前后都需要用消毒液清洗衣物和手，并對衣物進(jìn)行紫外照射消毒。

7 結(jié)語

綜上所述，羊布魯氏菌病傳播途徑廣、侵襲性強(qiáng)，養(yǎng)殖戶必須樹立正確的防控意識，采取科學(xué)的防范措施。只有做好羊群凈化工作才能從根本上降低疾病發(fā)生率。針對高發(fā)區(qū)域，可定期給羊只接種布魯氏菌疫苗，以提高羊群整體免疫力。