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    牛病毒性腹瀉病例的血清學(xué)診斷

    2021-12-01 23:31:58連小麗
    中國畜禽種業(yè) 2021年6期
    關(guān)鍵詞:病畜牛群病毒性

    連小麗

    (甘肅省定西市安定區(qū)畜牧獸醫(yī)局高峰畜牧獸醫(yī)站 743000)

    牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)隸屬于黃病毒科,是瘟病毒屬成員之一,主要引發(fā)病毒性腹瀉-黏膜病,以致病牛免疫耐受能力降低、屢次出現(xiàn)感染、母牛流產(chǎn)風(fēng)險明顯增高、奶牛產(chǎn)奶量下降,對牛只健康生長造成嚴(yán)重影響。病畜分泌物、排泄物及血液等均可能成為本病的傳染源,既往調(diào)查發(fā)現(xiàn)[1],牛病毒性腹瀉在全國范圍中均可發(fā)生,有廣泛流行性特征,對牛養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)效益形成較明顯的影響。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 被檢血清

    2019 年在內(nèi)蒙古某奶牛場隨機(jī)選擇300 頭牛,采集尾靜脈血液,常規(guī)離心、分離血清后待檢。已知本牛場所有牛既往均沒有接種過BVDV 疫苗。

    1.1.2 檢測試劑

    牛病毒性腹瀉抗體(BVDV-Ab)、抗原(BVDV-Ag)檢測試劑盒。

    1.1.3 主要儀器設(shè)備

    高速臺式離心機(jī)(5810)、恒溫培養(yǎng)箱(INE 500)以及酶標(biāo)儀(Elx808IU)等。

    1.2 檢測方法

    采用酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)方法檢測BVDV-Ab、BVDVAg,嚴(yán)格依照試劑盒說明書上指示內(nèi)容進(jìn)行操作。

    (1)把試樣對應(yīng)的微孔按序編號,各板均要設(shè)置陰性、陽性對照孔,空白對照孔,其中空白對照孔不添加試樣于酶標(biāo)試劑,其他各步操作一致。

    (2)將50μl 陰性、陽性對照分別添加到陰、陽性對照孔,而后先把樣品稀釋液40μl 添加到待測樣品孔,而后再加入10μl 待測樣品。通過加樣把試樣添加到酶標(biāo)板孔底,盡量做到不觸碰孔壁,輕搖使其混合均勻。

    (3)采用封板膜進(jìn)行封板處理后,將其安放在37℃恒溫箱內(nèi),連續(xù)孵育30min。

    (4)小心撕掉封板膜,棄除液體,甩干,各孔加滿洗滌液,靜置30s 后棄除,以上操作反復(fù)進(jìn)行5 次,拍干。

    (5)朝各孔添加50μl 酶標(biāo)試劑(空白孔除外),孵育及洗滌反復(fù)同上。

    (6)每孔各添加50μl 顯色劑A,隨后添加50μl 顯色劑B,輕搖混勻,37℃避光條件顯色15min。

    (7)各孔均添加50μl 終止液,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立即轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色)。

    1.3 指標(biāo)觀察與判斷

    把空白孔調(diào)零,采用450nm 波長依次檢測各孔的吸光度(OD 值),檢測要在添加終止液15min 之內(nèi)進(jìn)行。

    試驗有效性判斷標(biāo)準(zhǔn)為:陽性、陰性對照平均值分別≥1.00、≤0.10[2]。

    臨界值(CUT OFF)=陰性對照孔均值=0.15,若試樣OD值≥臨界值(CUT OFF) 則被診斷為BVDV 陽性,否則為BVDV 陰性。

    2 結(jié)果

    2.1 統(tǒng)計牛病毒性腹瀉抗體/抗原感染情況

    300 份牛血樣均順利完成牛病毒性腹瀉抗體與抗原檢測,統(tǒng)計發(fā)現(xiàn),BVDV-Ab、BVDV-Ag 陽性率分別是7.00%(21/300)、0.67%(2/300)。表明該牛場中存在牛病毒性腹瀉感染情況,和全國既往報道的數(shù)據(jù)相比較,感染率相對較低。

    2.2 陽性牛群內(nèi)牛病毒性腹瀉抗體/抗原的轉(zhuǎn)換值

    參照試劑盒說明書,BVDV-Ab 轉(zhuǎn)換值≥0.300 與BVDVAg 轉(zhuǎn)換值>0.300 時分別被判斷為陽性。參照以上情況,進(jìn)一步分析BVDV-Ab、BVDV-Ag 顯陽性的試樣發(fā)現(xiàn),BVDV-Ab、BVDV-Ag 轉(zhuǎn)換值的平均值分別為0.900 與3.302,明顯高于判定陽性的臨界值,表明本牛場確實存在牛病毒性腹瀉感染情況。

    3 討論

    牛病毒性腹瀉是由BVDV 引起的一種牛群接觸性傳染疾病,其臨床癥狀多樣,且時常變化,如體溫升高、黏膜發(fā)炎、糜爛、壞死、腹瀉、流產(chǎn)等。本病在全國各地均有發(fā)生,感染對象以黃牛、水牛與牦牛等為主,冬末與春天是本病高發(fā)期,新發(fā)病牛只呈現(xiàn)出爆發(fā)流行,發(fā)病后能獲得較長期的強(qiáng)免疫,呈現(xiàn)出零星散發(fā)[3]?;疾∨Ec帶毒牛是本病主要傳染源,患病牛只的鼻汁、唾液、糞尿等分泌物與排泄物中均可含有大量BVDV,一般會通過消化道與呼吸道感染傳播本病。各年齡段的牛只均可能會感染本病,其中6~18 月齡的牛感染率相對較高,山羊與豬等可能會自然感染,形成抗體,但基本不會出現(xiàn)明顯的癥狀表現(xiàn),呈現(xiàn)出隱性感染,牛群內(nèi)存在較高的感染率。

    針對畜病的發(fā)病原因,可能是牛種引進(jìn)前沒有進(jìn)行嚴(yán)格的隔離、檢疫,以致帶進(jìn)BVDV;病牛自身攜帶病毒、處理不規(guī)范、消毒不徹底,飼養(yǎng)管理欠缺規(guī)范性等。針對本病癥的獸醫(yī)診斷要點(diǎn)有:幼齡牛與青年牛染病后體溫上升,達(dá)到41~42℃,持續(xù)高熱4~7d,食欲減退或廢食,反芻暫停,口周流涎,流眼淚,奶牛泌乳性能下降,口腔黏膜出現(xiàn)不同程度潰爛及消化道出血與潰瘍等,特別是食道黏膜腐爛,結(jié)合病畜以上癥狀表現(xiàn),通常能初步作出診斷。而若要作出最后診斷,需要病原學(xué)和血清學(xué)檢查。其中血清學(xué)診斷過程需要提取疑似病例的血液標(biāo)本,檢測時可供選擇的方法較多,如ELISA 方法、中和試驗等[4]。相關(guān)人員要認(rèn)真觀察試驗結(jié)果,采集病畜相應(yīng)情況,疾病一經(jīng)確診后應(yīng)立即采取對癥治療方法。在本次檢測中,采用ELISA 方法檢查300 份牛血樣,牛病毒性腹瀉抗體與抗原陽性率分別是7.00%、0.67%,表明該牛場中存在牛病毒性腹瀉感染情況。計算陽性牛群內(nèi)牛病毒性腹瀉抗體/抗原的轉(zhuǎn)換值,平均值分別是0.900 與3.302,明顯高于判定陽性臨界值,表明本牛場確實存在牛病毒性腹瀉感染情況。

    當(dāng)下,獸醫(yī)臨床上針對牛病毒性腹瀉尚沒有根治手段與免疫方法,針對患病牛只,只有在加強(qiáng)監(jiān)測、照護(hù)、飼養(yǎng)管理來增強(qiáng)牛只機(jī)體抵抗力,結(jié)合癥狀表現(xiàn)采用對癥治療手段。針對病情相對較嚴(yán)重的養(yǎng)牛場,可以應(yīng)用注射本病弱毒疫苗的方法,該種方法不適用于健康牛與妊娠牛只。通過加強(qiáng)各種規(guī)范化的飼養(yǎng)管理措施去增強(qiáng)牛的抵抗能力。養(yǎng)殖戶自覺樹立定期消毒意識,可以選擇過氧乙酸、3.0%火堿、聚維碘等對養(yǎng)殖環(huán)境進(jìn)行消毒處理。有報道指出[5],豬瘟弱毒疫苗在防治本病黏膜型病畜方面表現(xiàn)出良好的效能,具體在公牛配種前30d,母牛臨產(chǎn)前30d 各頭均肌肉注射10 頭份,而后每間隔10~12 個月注射1 次,小牛犢在1~3 月首免(3 頭份),6~8 月后再進(jìn)行免疫1 次。針對無病癥的養(yǎng)殖場,要定期采用血清學(xué)監(jiān)測方法進(jìn)行凈化,針對發(fā)病牛群及時進(jìn)行隔離治療,最好應(yīng)用撲殺方法,并且要予以無害化處置。在購置種牛、飼料過程中要加大檢查力度,尤其是跨區(qū)域、跨省運(yùn)調(diào)牛種,規(guī)避養(yǎng)殖區(qū)中出血病?;驇в蠦VDV 的牛。

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