中藥復方藥效物質基礎研究進展

易 歡，段龍強，耿 炤

(江西匯仁藥業(yè)股份有限公司，江西 南昌 330052)

中藥復方是在中醫(yī)藥理論指導下，由兩味或兩味以上藥味組成的方藥，其處方組成符合配伍規(guī)律，是中醫(yī)方劑的主體組成部分[1]。中藥復方療效確切、副作用小，是中醫(yī)臨床治療一些疑難雜癥、慢性病等疾病的主要藥物[2]。目前，中藥復方藥效物質基礎研究已成為中醫(yī)藥研發(fā)的熱點；但中藥復方的復雜性和多樣性是中藥現(xiàn)代化研究的難點。有學者[3]指出，中藥復方藥效物質基礎研究的難點在于：①中藥復方的有效成分可能是單味藥材中不存在的物質，但在復方煎煮的過程中通過多種成分相互作用而產生，也可能是藥物進入體內后的代謝成分；②復方中某些有效成分可能是通過間接途徑發(fā)揮作用，有些成分的作用可能迄今尚未明了；③很多功效較強而含量較低的成分很難全面檢測。目前，隨著各學科研究方法和技術手段的不斷創(chuàng)新，許多研究者采用先進的分析測試技術，基于多途徑、多學科交叉方法對中藥藥效物質基礎進行研究。本研究通過對中藥復方物質基礎的研究意義、方法和取得的代表性成果進行綜述，現(xiàn)報道如下。

1 中藥復方物質基礎的研究意義

中藥復方藥效物質基礎研究的目的在于以現(xiàn)代分析手段，結合化學、生物學、藥理學等學科，闡明中藥復方的有效部位和成分，進而揭示中藥復方配伍規(guī)律、優(yōu)化處方制劑、提高質量標準、開發(fā)創(chuàng)新藥物[4]。但是，關于中藥藥效物質基礎的概念本身尚沒有明確的定義，存在不同的理論和假說，如全成分論、有效成分論、代謝成分及多成分協(xié)同作用論等[5]。有學者[6]總結，中藥復方藥效物質基礎應是中藥復方進入人體后作用于多個靶點并產生整體功效的化學成分群，其化學成分群可能來源于藥材中的固有成分、制備過程中形成的產物或藥物進入體內后與人體相互作用產生的代謝產物等。由此說來，中藥復方藥效物質基礎既包括復方中發(fā)揮特定功能的有效成分組成的藥效物質，也包括復方與體內相互影響發(fā)揮作用的相關機制，如復方對體內信號通路的影響以及復方對體內代謝物和腸道菌的作用機制等；在中藥復方藥效物質基礎研究上具有代表性的藥物包括六味地黃丸、復方丹參滴丸等?？偟膩碚f，研究中藥復方藥效物質基礎對于闡明復方的功效，提高和保證中藥復方質量及臨床療效，研發(fā)新藥等都具有重要的意義[7]。

2 中藥復方物質基礎研究方法

2.1 化學組分研究

2.1.1 “組分結構”理論 賈曉斌等[8]提出“組分結構”理論，將中藥復方成分劃分為有效、功能和無用組分，前兩者構成中藥復方物質基礎；中藥復方物質基礎具有單體、組分和組分群“三個層次多維結構”，其中每個層次上物質及物質之間固定的量的關系稱為“結構”；中藥復方的整體作用依賴于“三個層次多維結構”的共同作用。基于該理論，對丹參滴注液進行了研究，結果表明：其3個組分為酚酸類、多糖類和其他類；酚酸組分內各成分的組成結構為丹參素(47%)、原兒茶醛(23%)、去丹參素丹酚酸 E1(4%)、去丹參素丹酚酸 E2(6%)、丹酚酸 D (4%)、迷迭香酸(4%)、丹酚酸 A(3%)、丹酚酸 C(1%)、咖啡酸(1%)和丹酚酸 B(7%)，糖組分由 9 個糖類化合物組成，所占比例>25.9%?；谠摻Y果，以酚酸和糖類多個指標成分對丹參滴注液進行質量控制，在保留丹參有效成分的同時截留去除制劑中的細菌、微粒、大分子物質以及熱原等，可顯著降低不良反應的發(fā)生率[9]。

2.1.2 基于“成分敲除/敲入”的中藥藥效物質辨識 成分敲除是指從方藥提取物中分離得到目標成分，并獲得不含目標成分的陰性樣品；成分敲入是指將經純化分離的目標成分以不同比例加入陰性樣品中制成多份僅目標成分含量存在差異的供試樣品[10]。肖小河等[11]提出“基于成分敲除/ 敲入的中藥藥效物質辨識與質量控制模式”的研究理論，將敲除/敲入前后得到的所有樣品的藥效進行等效性對比，可又快又準地辨識中藥藥效組分，控制中藥質量標準。基于此理論，將當歸補血湯中的毛蕊異黃酮敲除，得到的陰性樣品和該方提取物對MCF-7、 MG-63、HEK293T 細胞進行藥效學評價，結果發(fā)現(xiàn)與該方提取物相比，陰性樣品促進雌激素、血紅素生成及成骨能力顯著降低，單獨使用毛蕊異黃酮與原方提取物也有相似的藥效，提示毛蕊異黃酮是當歸補血湯發(fā)揮藥效的關鍵成分[12]。

2.1.3 “等效成分群”理論 “等效成分群”是針對中藥有效成分群的研究假說，即中藥中雖然含有眾多成分，但是針對特定的病證而言，并不是所有成分都起藥效，其中天然存在著一組成分組成清楚、含量比例明確，且能與原中藥發(fā)揮等同藥效的化學成分群[13]，可揭示藥效-成分內在關聯(lián)以及整體與局部的相互作用關系[14]。該理論已成功應用于復方丹參片的研究，從中發(fā)現(xiàn)了一個由 18 種成分組成的“等效成分群”，其含量為原方(丹參、三七、冰片)制劑的15.01%，并證實了該“等效成分群”在細胞模型和大鼠心肌梗死模型中，可以發(fā)揮原方抗心肌缺血的整體藥效[15]。通過這一發(fā)現(xiàn)，可優(yōu)化或簡化復方丹參片的處方工藝，以進一步提高其質量和藥效。

2.2 體內吸收代謝成分研究

中藥復方所含成分可通過被吸收入血的成分發(fā)揮作用，這些成分包括中藥原型成分及其代謝產物。分析復方中的“入血成分”可明確中藥復方中真正起作用的活性物質[16]。中藥復方口服后，其成分經過消化道直接吸收入血，或分解成次生代謝產物被吸收入血，或經肝臟代謝成有活性的代謝產物，這些成分在血中轉運到達作用部位后才發(fā)揮作用，即成為“血中移行成分”[17]。王喜軍等[18]鑒定出六味地黃丸中11個血中移行成分；發(fā)現(xiàn)5-HMFA、莫諾苷、璋牙菜苷、馬錢子苷和丹皮酚可以改善腎陰虛大鼠的癥狀，其中以莫諾苷、獐牙菜苷和馬錢子苷的作用最為明顯，確定其為六味地黃丸補腎的藥效物質基礎[19-20]；相關研究還確定了六味地黃丸的入血成分中 6-O-甲基梓醇、莫諾苷、丹皮酚原苷、毛蕊花糖苷、獐牙菜苷脫水的代謝產物為干預腦癱大鼠模型的潛在藥效物質基礎[21]。此外，在體外細胞水平上，六味地黃丸的入血成分可促進大鼠前脂肪細胞的增殖、抑制其分化過程中的脂肪積聚[22]，并發(fā)揮HSV-tk/GCV自殺基因治療系統(tǒng)對肝癌CBRH7919細胞的殺傷增效作用[23]。有研究發(fā)現(xiàn)在大鼠血清中檢測到復方丹參片的14個原型成分和8個代謝產物，并發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA和丹參酚酸B分別具有調節(jié)心肌缺血大鼠的鈣離子通道和抑制大鼠腎上腺素β受體的作用，提示丹參酮ⅡA和丹參酚酸B為其治療心肌缺血的物質基礎[24]。結合血清化學成分譜，考察不同工藝的復方丹參片在動物體內吸收代謝的過程，以丹參有效成分體外浸出量與體內吸收量的數(shù)據(jù)為依據(jù)進行相關性評價，從而可確定復方丹參片的最佳提取工藝方法[25]。依據(jù)“中藥復雜化學成分-血中移行成分-體內直接作用物質”的研究思路，可以鎖定中藥復方藥效物質基礎[26]，進而，通過對入血成分的研究，可確定中藥復方的藥效物質基礎，以此為指標通過HPLC、GC等手段，規(guī)范原料藥、生產工藝中間體、制劑成品的質量控制檢測標準，建立標準化的定性、定量方法，提高中藥復方的質量[27]。

2.3 代謝組學研究

代謝組學是利用現(xiàn)代分析技術如核磁共振、質譜等，定性定量測定機體內的內源性代謝產物，考察機體在不同狀態(tài)下代謝產物的變化，獲得相應的生物標記物，從而揭示機體在特定時間和環(huán)境下的整體功能狀態(tài)[28-29]。通過對體內生物樣品分析，經模式識別[30]處理，可以監(jiān)測中藥復方干預下的代謝通路變化過程，并篩選出與病證相關的生物標記物和代謝輪廓，通過分析代謝變化和差異，從而闡明中藥復方的作用機制和靶點[31]。代謝組學技術在中藥研究領域的應用于2003年開始[32]，其后呈上升趨勢?；诖x組學技術，張愛華等[33]篩選了32個腎氣丸入血的原型成分，發(fā)現(xiàn)腎氣丸可調節(jié)腎陽虛中的20個生物標記物；還通過關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)桂皮酸、異塔拉薩定、馬錢苷、新澤瀉醇A和土莫酸可能為腎氣丸干預腎陽虛證的藥效物質基礎。有學者[34-35]研究了六味地黃丸對大鼠生長發(fā)育過程中血液和尿液的代謝影響，發(fā)現(xiàn)六味地黃丸可調節(jié)尿液和血液的幾十個標記物，并最終確定其中8 個代謝物可通過影響中樞系統(tǒng)和腎臟系統(tǒng)的功能，達到促進生長發(fā)育的作用，提示六味地黃丸是通過調節(jié)這8個核心標記物來發(fā)揮促進生長發(fā)育的作用。復方丹參滴丸是治療心絞痛的知名復方，利用代謝組學技術分析該復方對急性心肌梗死大鼠心肌保護的作用機制，表明復方丹參滴丸能顯著調節(jié)硫酸對甲苯、馬尿酸、雌馬酚葡萄糖苷酸、溶血磷脂膽堿、膽酸、油酸酰胺、棕櫚酰胺和鞘脂8種標記物，提示復方丹參滴丸是通過調節(jié)苯丙氨酸代謝、甘油磷脂代謝、脂肪酸代謝、膽汁酸代謝及鞘脂代謝通路來發(fā)揮抗急性心肌梗死的作用[36]。

2.4 腸道菌群研究

口服中藥復方中的各種成分在進入腸道后不可避免會與腸道菌群發(fā)生相互作用，部分成分經相應菌群的作用發(fā)生代謝轉化后被吸收，部分則以原型成分直接被體內吸收，在肝臟降解后經膽汁排泄，與腸道菌群接觸發(fā)生結合、裂解等代謝轉化再次被吸收[37]。

2.4.1 腸道菌群對中藥復方活性成分的影響 吳萬豐等[38]研究發(fā)現(xiàn)缺血中風氣虛血瘀證大鼠與假手術組大鼠經補陽還五湯干預后，兩組間腸道菌群組成結構都存在顯著性差異，并發(fā)現(xiàn)補陽還五湯中7個藥物代謝產物與腸道菌群存在著顯著的相關性，缺血中風氣虛血瘀證大鼠腸道菌群會影響補陽還五湯在腸道的吸收，部分具有抗炎、抗氧化應激作用的藥物成分表達吸收增加，而具有促炎作用的物質表達吸收減少，從而起到腦保護的作用。李佳欣等[39-41]研究了花旗澤仁在大鼠腸道菌群中的代謝情況，并鑒定出腸道菌群對花旗澤仁中人參皂苷Rb1的代謝產物為人參皂苷Rd、人參皂苷F2、人參皂苷C-K和20(S)原人參二醇，澤瀉醇A-24-醋酸酯的代謝產物為澤瀉醇A；而且，CYP450酶參與了花旗澤仁主要活性成分在大鼠體內的代謝過程。

2.4.2 中藥復方對腸內菌種類數(shù)量、代謝物的作用 熊冉[42]發(fā)現(xiàn)參芪復方能升高Ⅱ型糖尿病患者腸道菌群中的降糖代謝產物短鏈脂肪酸、膽汁酸、吲哚的含量，從而改善糖尿病患者的臨床癥狀。黃飛等[43]發(fā)現(xiàn)糖腎湯可增加代謝綜合征患者的益菌屬乳酸桿菌、雙歧桿菌含量，減少致病菌屬腸桿菌、硫酸鹽還原菌含量。陳志敏等[44]發(fā)現(xiàn)二神丸可促進脾腎陽虛泄瀉動物有益菌的增殖、抑制有害菌，該方下調腎臟組織UCP2效果明顯與調節(jié)腸道菌群有關。

3 結語

目前，關于中藥復方藥效物質基礎的系統(tǒng)研究越來越深入，在研究思路和方法上，研究者們越來越注重藥效物質基礎與中醫(yī)藥理論的結合，重視中藥復方的方法和技術創(chuàng)新，有力促進了中藥產業(yè)的現(xiàn)代化。但當前中藥復方的藥效物質基礎研究技術和方法仍需要進一步提升，對于微量活性成分的研究需更多關注，其適宜研究方法和技術需進一步提升應用。同時，中藥復方有效成分進入體內消化吸收產生的變化，以及有效成分對病證的作用機制研究正不斷深入，但其研究思路和技術手段還需進一步推廣和創(chuàng)新。此外，中藥復方藥效物質基礎研究的方法仍需結合臨床實踐應用，才能進一步闡明復方的物質基礎，進行二次開發(fā)新藥和提高臨床療效和安全性。因而，今后在開展中藥復方藥效物質基礎研究的過程中，需要以中藥復方的質量標準、多種研究理論、體內外藥理藥效學模型和臨床實踐相結合的方式，對中藥復方進行更全面的研究，確保藥品的安全、穩(wěn)定、有效和均一。