抗致病性大腸桿菌敏感藥物的試驗(yàn)篩選

黃林鳳

福建省龍巖市農(nóng)業(yè)學(xué)校，福建龍巖364000

大腸桿菌病是獸醫(yī)臨床上常見的傳染病，該病的發(fā)生沒有明顯的季節(jié)性和地域性，不同種類的養(yǎng)殖場一年四季均有發(fā)病。隨著養(yǎng)殖集約化程度越來越高，該病的發(fā)生越來越嚴(yán)重，加之蛋雞產(chǎn)蛋期抗生素的禁用和飼料無抗政策的出臺，臨床上大腸桿菌的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢。臨床上盲目使用抗生素和盲目加大使用劑量，導(dǎo)致大腸桿菌耐藥性越來越強(qiáng)，臨床治療難度越來越大。臨床依托藥敏試驗(yàn)可以準(zhǔn)確選擇高敏感的藥物對大腸桿菌病進(jìn)行有效治療，大大提高了臨床治愈率。

1 流行癥狀

2020年10月至2020年12月，筆者在臨床診療中共計(jì)剖檢大腸桿菌病例12例，共同的典型癥狀均為零星死亡，病死雞爪干癟，脫水明顯，肛門處羽毛臟亂。剖檢癥狀包心包肝，腹膜炎，氣囊炎。均為典型的敗血型大腸桿菌。

2 治療效果

對上述病例筆者均進(jìn)行無菌采集病死雞肝臟、心臟等病料。通過實(shí)驗(yàn)室藥敏試驗(yàn)，選擇敏感藥物進(jìn)行投喂治療。通過3～5 d 的藥物治療，均已經(jīng)全部治愈。

3 大腸桿菌藥敏試驗(yàn)的操作方法

3.1 培養(yǎng)基的選擇

臨床上大腸桿菌的藥敏試驗(yàn)一般選擇普通瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基，大多數(shù)化學(xué)試劑商店均可以買到。買到成品培養(yǎng)基原料，首先要對培養(yǎng)皿進(jìn)行清洗、消毒、干燥。然后按照說明書進(jìn)行操作，稱取適量的原料，按要求加熱，融化后倒入培養(yǎng)皿中，冷卻后備用。麥康凱培養(yǎng)基是大腸桿菌的鑒別培養(yǎng)基，大腸桿菌在該培養(yǎng)基上生長為紅色菌落，其他菌在此培養(yǎng)基上無此現(xiàn)象。

3.2 藥敏片的準(zhǔn)備

準(zhǔn)備或購買實(shí)驗(yàn)室專用的定性濾紙，濾紙的量不能太少，盡量準(zhǔn)備一次夠用半年，將準(zhǔn)備好的定性濾紙用專用的打孔工具，打成圓形小紙片，直徑為6 mm。打完孔后仔細(xì)挑選，篩選出形狀不規(guī)則的紙片丟棄，保留形狀規(guī)則的圓形紙片。將挑選好的圓形濾紙片裝入事先準(zhǔn)備好的清潔干燥的小玻璃空瓶中，瓶口用牛皮紙包扎封好。將裝有紙片的玻璃瓶放入高壓鍋中，121.3 kPa 高壓20 min 消毒，高壓消毒后取出放入37 ℃溫箱或烘箱中烘干，使其完全干燥，備用。

選取需要試驗(yàn)篩選的商品藥，品種越多越好，品種越多臨床可選性越大。選好需要使用的藥品后，按照說明書的治療量配置藥液，也可略高于說明使用量進(jìn)行配置。藥液中的藥物要充分混勻，不能有沉淀。此稀釋液即為用于做藥敏試驗(yàn)的藥液。

用無菌鑷子將之前消毒烘干后的小圓紙片分別放入每個無菌的小玻璃瓶中，每個小玻璃瓶中加入一種藥液，藥液要將小圓紙片全部浸入其中。將小玻璃瓶用橡膠塞封好，轉(zhuǎn)動玻璃瓶，使小紙片在瓶內(nèi)充分翻轉(zhuǎn)，完全浸透藥液。翻動時注意動作幅度，使紙片不能被搗爛。在每個小玻璃瓶上用防水粘貼標(biāo)明藥物成分、商品名稱及配置時間。取出浸透藥液的小圓紙片，然后放入37 ℃恒溫箱內(nèi)烘干24 h，干燥后裝瓶密封備用，如條件允許可以真空干燥，效果更佳。保存時防止受潮，應(yīng)置干燥陰涼處存放，有效期最長6個月。

3.3 細(xì)菌的培養(yǎng)

無菌采集病死雞肝臟，將組織剪放在酒精燈火焰上消毒后，剪取小部分病料，將切面輕輕涂于培養(yǎng)基上，均勻涂滿后置于培養(yǎng)箱，37 ℃培養(yǎng)24 h。

培養(yǎng)24 h 后，培養(yǎng)基上長滿不規(guī)則小菌落，在無菌操作臺中，將接種環(huán)放在酒精燈火焰上進(jìn)行消毒，挑取培養(yǎng)基上的菌落，挑取量不能太多也不能太少，手持接種環(huán)以劃線的方式涂在普通瓊脂培養(yǎng)基上。

在無菌操作臺中，將鑷子放在酒精燈火焰上進(jìn)行消毒片刻，鑷子冷卻后夾取藥敏片，輕輕貼在培養(yǎng)基上，放上后用鑷子輕輕壓實(shí)，使藥敏片與培養(yǎng)基貼合緊密。藥敏片的位置要適中，每個培養(yǎng)基中放7個左右，擺放呈梅花形。在培養(yǎng)皿背面標(biāo)號，每個藥敏片都要相應(yīng)編號，對應(yīng)標(biāo)號記錄藥品名稱。將放完藥敏片的培養(yǎng)基置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，取出觀察，記錄相應(yīng)數(shù)據(jù)。

3.4 結(jié)果觀察

24 h 后，取出培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿倒置后，觀察藥敏片周圍的抑菌環(huán)大小，抑菌圈越大，說明藥物對該大腸桿菌的抑菌效果越好，抑菌圈越小，說明藥物抑菌效果越差。如果藥敏片周圍沒有抑菌圈，則說明該菌對此藥具有耐藥性。

3.5 結(jié)果判定

藥敏試驗(yàn)的結(jié)果判定，一般應(yīng)按抑菌圈的大小來作為判定藥物抑菌效果高低的標(biāo)準(zhǔn)。抑菌圈直徑20 mm 以上為極敏，15～20 mm 為高敏，10～14 mm為中敏，10 mm以下為低敏，沒有抑菌環(huán)為耐藥。

4 討 論

近年來，藥敏試驗(yàn)在臨床上被廣泛應(yīng)用，很好地指導(dǎo)了臨床用藥，減少了細(xì)菌的耐藥情況，為養(yǎng)殖業(yè)減少不必要的經(jīng)濟(jì)損失，為食品安全保駕護(hù)航。藥敏試驗(yàn)給臨床帶來便利的同時，也存在一些問題：一是藥敏試驗(yàn)需要一定的條件，如恒溫培養(yǎng)箱、無菌操作臺等，所以一些小型診療機(jī)構(gòu)和小型養(yǎng)殖場無法開展。二是藥敏試驗(yàn)屬于體外抑菌試驗(yàn)，所以試驗(yàn)結(jié)果受藥物的吸收率、給藥途徑等因素影響，臨床治療效果不能達(dá)到100%。三是試驗(yàn)中藥液的配制濃度不同，所以和臨床實(shí)際效果存在誤差。臨床中還有可能出現(xiàn)藥敏結(jié)果無高敏的情況，一般可以選擇2 種中敏或低敏感藥物聯(lián)合配伍使用，也會達(dá)到理想的治療效果，聯(lián)合用藥一般應(yīng)充分考慮是否有配伍禁忌。