草莓葉片植株再生技術(shù)

王禹

（黑龍江省農(nóng)科院園藝分院 黑龍江，哈爾濱150069）

優(yōu)質(zhì)種苗是草莓優(yōu)質(zhì)高效生產(chǎn)栽培的前提保障[1]。草莓種苗的繁育方式一般采用田間無(wú)性繁殖[2]，在繁殖過(guò)程中易造成病毒病的感染及傳播，導(dǎo)致草莓品種的種性退化，出現(xiàn)植株生長(zhǎng)勢(shì)變?nèi)?、結(jié)果能力下降及抗病性降低等問(wèn)題[3]，致使種苗質(zhì)量變劣，造成草莓生產(chǎn)產(chǎn)量降低[4]。張利英等試驗(yàn)研結(jié)果顯示采用植物組培手段進(jìn)行草莓種苗繁育具有顯著的提純復(fù)壯作用[5]，在實(shí)際生產(chǎn)中，除了利用組織培養(yǎng)技術(shù)保持或恢復(fù)物種特性外，還要探索易掌握的有效途徑，便于應(yīng)用及推廣。本文從材料選擇、不定芽誘導(dǎo)，植株培養(yǎng)、馴化及馴化管理等方面介紹了草莓葉片植株再生技術(shù)育苗，以期促進(jìn)組培種苗生產(chǎn)及應(yīng)用。

1 培養(yǎng)基的制備及工具準(zhǔn)備

所有培養(yǎng)基均采用MS+植物激素+7g/L 瓊脂+25～30g/L 白糖，PH5.4～6.0，0.103MPa，121℃，濕熱滅菌20min。無(wú)菌水、濾紙及接種工具，0.103MPa，121℃，濕熱滅菌30min[1]。

2 材料選擇

選擇展葉后生長(zhǎng)15～20 d且無(wú)病蟲(chóng)害的葉片。此時(shí)葉片生長(zhǎng)旺盛，且易消毒處理。

3 材料處理

采集的葉片在流水狀態(tài)下沖洗20min（水流要小，否則刮傷葉片），置于超凈工作臺(tái)中無(wú)菌水沖洗2次。酒精消毒 40s，無(wú)菌水沖洗 3 次，每次 1min 以上。Agcl2消毒5min，無(wú)菌水沖洗3次，每次1min以上。將葉片順著葉脈方向切成1cm×1cm 大小，葉基部不要切掉，此部位最易產(chǎn)生不定芽。

4 再生植株培養(yǎng)

4.1 不定芽誘導(dǎo)

將切好的葉片，接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。不定芽培養(yǎng)基采用MS+1mg/L TDZ+0.5mg/L 6-BA+0.3mg/L 2,4-D，暗培養(yǎng)20 d后，光照培養(yǎng)14 h/d、20 d；將葉片褐化部分切掉，帶已生出的不定芽或者愈傷組織繼續(xù)轉(zhuǎn)到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)40 d。

培養(yǎng)條件：白天溫度25℃±2℃，夜間不低于18℃；光照強(qiáng)度為2500lux～3000lux；相對(duì)空氣濕度40%～60%。

4.2 不定芽增殖

將不定芽從葉片切下，切成不超過(guò)0.5cm×0.5cm 大小的叢生團(tuán)，接種到增殖培養(yǎng)基上。增殖培養(yǎng)基采用MS+2 mg/L TDZ+0.1 mg/L 6-BA，30 d轉(zhuǎn)接一次。

培養(yǎng)條件：白天溫度25℃±2 ℃，夜間不低于18℃；光照強(qiáng)度為2500lux～3000lux，光照時(shí)間14 h/d，；相對(duì)空氣濕度40%～60%。

4.3 生根培養(yǎng)

將不定芽切成不超過(guò)0.5cm×0.5cm 大小的叢生團(tuán)，接種到MS+0.5 mg/L培養(yǎng)基上進(jìn)行生長(zhǎng)培養(yǎng)。

待植株長(zhǎng)至1 cm高時(shí)，將組培苗切成單株，接種到生根培養(yǎng)基上。生根培養(yǎng)基采用MS+0.2 mg/L IBA[6]。

培養(yǎng)條件：白天溫度25℃±2℃，夜間不低于18℃；光照強(qiáng)度為2500lux～3000lux，光照時(shí)間12 h/d，；相對(duì)空氣濕度40%～60%。

5 馴化

5.1 馴化前處理

當(dāng)組培苗株高2cm 時(shí)，將組培苗從培養(yǎng)室移至馴化室，讓組培苗提前適應(yīng)馴化環(huán)境。繼續(xù)生長(zhǎng)至株高4cm以上，根系長(zhǎng)2cm 以上時(shí)，進(jìn)行馴化。馴化前1d，把瓶蓋打開(kāi)，讓組培苗充分適應(yīng)馴化環(huán)境。

5.2 移栽基質(zhì)

栽基質(zhì)采用草炭土，拌入30%的百菌清（百菌清：土1:100），30%辛硫磷1000倍液，覆蓋塑料布10d。穴盤(pán)采用32穴，11cm深，此規(guī)格穴盤(pán)苗可直接田間定植，中間不用移苗。穴盤(pán)澆透水，放置1d，使用前打好孔。

5.3 組培苗栽植

將組培苗根部培養(yǎng)基用30%百菌清500倍溶液洗凈，栽入穴盤(pán)中，根部保持垂直，不卷曲，栽植原則按照“深不漏根，淺不埋心”。栽好后要把莖基部土壤輕輕壓實(shí)，澆透水。

5.4 移栽后管理

移栽后遮光率20%～40%、相對(duì)空氣濕度不高于60%、環(huán)境溫度20℃～28℃，緩苗前保持土壤濕潤(rùn)即可，15d后馴化成活率可達(dá)92%。

緩苗后，穴盤(pán)見(jiàn)干澆水即可。30d后根據(jù)環(huán)境情況預(yù)防紅蜘蛛及各種真菌、細(xì)菌性病害，紅蜘蛛可選用73%炔螨特乳油2000倍液或阿維菌素1000倍液；病害可采用甲基托布津1000倍液或使百克熏蒸。每15d 噴1 次0.2%～0.3%磷酸二氫鉀溶液，每30d 隨澆水追0.2%尿素一次。及時(shí)摘除抽生出的匍匐莖、花序、病葉及老葉，留3～5 片健壯葉片即可[7-10]。