動(dòng)物衣原體病疫苗研究技術(shù)及應(yīng)用進(jìn)展

王磊，王俊菊，史艷艷，康福忠，張浩

（天津市農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心天津 300402）

動(dòng)物衣原體病是指動(dòng)物由于感染動(dòng)物源性衣原體而導(dǎo)致的疾病。根據(jù)傳染對(duì)象可以分為禽類衣原體病和哺乳動(dòng)物衣原體病。研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物衣原體病可以導(dǎo)致人感染，屬于一種人畜共患病。如何阻斷或治療動(dòng)物感染的衣原體病是畜牧養(yǎng)殖業(yè)面臨的當(dāng)務(wù)之急的問題。

動(dòng)物衣原體寄生于細(xì)胞內(nèi)，它屬于的科只有一個(gè)屬，含有12個(gè)已知的種。流產(chǎn)衣原體流傳甚廣，在世界范圍內(nèi)都有分布，是危害畜牧業(yè)的一種嚴(yán)重疾病。流產(chǎn)衣原體能引起綿羊的流產(chǎn)，在世界上很多羊的飼養(yǎng)區(qū)，可以造成很大的資產(chǎn)損失。除了綿羊，還可能引起很多的動(dòng)物流產(chǎn)，例如牛、馬等。因?yàn)槌肆鳟a(chǎn)外流產(chǎn)衣原體其他病癥不是很顯著，這會(huì)造成對(duì)該病的忽略?，F(xiàn)在還沒有針對(duì)該病的商業(yè)化疫苗，所以說早期的鑒別和診斷能防控該疾病的流行。

迄今為止，關(guān)于動(dòng)物衣原體的案例并不少見，只是局限在血清流行病調(diào)查以及個(gè)別的動(dòng)物案例的報(bào)道，對(duì)區(qū)域范圍內(nèi)的研究和流行情況并不是很清楚，這種情況妨礙了國(guó)家對(duì)流產(chǎn)衣原體在家畜體中的具體情況的分析，進(jìn)一步妨礙了國(guó)家具體防治措施的制定。不同地區(qū)、不同物種在衣原體菌株的遺傳進(jìn)化方面存在一定的區(qū)別，這些差異會(huì)導(dǎo)致致病能力不同。

衣原體病多見抗生素治療的報(bào)道。但抗生素治療易產(chǎn)生抗生素殘留超標(biāo)且易產(chǎn)生耐藥性。針對(duì)衣原體類似于病毒的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，用于抵抗衣原體病的疫苗發(fā)展迅速。由于衣原體病疫苗具有抗生素?zé)o法替代的優(yōu)勢(shì)，越來越受到研究者的矚目。本文綜述了研究衣原體病各類疫苗的特點(diǎn)，以期為衣原體疫苗研究提供參考。

1 弱毒活疫苗

此種疫苗研究的原理為利用物理誘變獲得在35℃低培養(yǎng)溫度和39.5℃高培養(yǎng)溫度下的衣原體變異株，使這類變異衣原體的毒性減弱。對(duì)毒性減弱的衣原體變異株進(jìn)行培養(yǎng)，加入必要的保護(hù)措施制成疫苗。用弱毒活疫苗對(duì)懷孕山羊?qū)嶒?yàn)后發(fā)現(xiàn)：羊源衣原體弱毒疫苗對(duì)懷孕山羊的流產(chǎn)有很好的抑制效果。

2 滅活疫苗

滅活疫苗的制備是把衣原體分離出來后加入特定培養(yǎng)皿中，利用甲醛等物質(zhì)，對(duì)衣原體進(jìn)行滅活。選取一定的試驗(yàn)體進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，比較對(duì)照組和免疫組的感染效果。如果感染率或者致病率降低，那么滅活疫苗就具有免疫效果。俄羅斯的科學(xué)家用羊的胚胎細(xì)胞來培養(yǎng)病原體，研制了衣原體白油佐劑滅活疫苗。在該衣原體流行病發(fā)生地，通過接種制備滅活疫苗，統(tǒng)計(jì)牛、羊的免疫效果，發(fā)現(xiàn)這種滅活疫苗可以使接種過疫苗的90%以上的動(dòng)物免于流產(chǎn)。而且，跟蹤試驗(yàn)對(duì)象還發(fā)現(xiàn)這種疫苗的免疫期限是1 年。這說明滅活疫苗治療效果比較理想。

能夠引起反芻動(dòng)物流產(chǎn)，羊傳染性流產(chǎn)和該衣原體有很大的關(guān)系。這種衣原體造成羊流產(chǎn)的原因是會(huì)感染其胎盤，會(huì)給養(yǎng)殖戶帶來很大的經(jīng)濟(jì)損失。這種衣原體有時(shí)會(huì)感染給人類，造成孕婦流產(chǎn)。第一次感染這種微生物的羊流產(chǎn)率為35%～75%。

國(guó)外報(bào)道了從流產(chǎn)的母羊胎盤上分離得到衣原體，結(jié)合試驗(yàn)進(jìn)一步證明了該衣原體是流產(chǎn)嗜衣原體[1]，是導(dǎo)致牛、羊流產(chǎn)的原因之一。通過胎盤或雞胚黃囊膜培養(yǎng)致病支原體，之后用甲醛進(jìn)行滅活。用這種方法制成滅活疫苗后，對(duì)羊群進(jìn)行接種，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：免疫組發(fā)生流產(chǎn)的比例在10%以下，而未進(jìn)行疫苗接種的對(duì)照組50%以上都會(huì)發(fā)生流產(chǎn)。證明了這種滅活支原體病疫苗對(duì)造成牛羊流產(chǎn)有很好的免疫作用。

有科學(xué)家從豬的流產(chǎn)胎盤中分離出了衣原體菌株[2]，對(duì)致病菌株進(jìn)行培養(yǎng)，用甲醛滅活，制成滅活疫苗。該疫苗經(jīng)過一次注射3mL，可以有效的保護(hù)豬不流產(chǎn)。經(jīng)大面積推廣，使牛和羊的流產(chǎn)率大大降低，對(duì)牛羊的養(yǎng)殖起到了良好的促進(jìn)作用。

3 利用基因工程研制疫苗

隨著科技的發(fā)展，基因工程的應(yīng)用也越來越廣泛，運(yùn)用基因工程制成的疫苗具有安全性好、容易大批量生產(chǎn)等特點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外大量的研究和試驗(yàn)證明衣原體外膜蛋白是特異性抗原。研究人員的注意力主要在衣原體的外膜蛋白上，利用這一點(diǎn)，運(yùn)用基因工程表達(dá)rCps-MOMP 蛋白，制成疫苗后對(duì)預(yù)防各種哺乳動(dòng)物和肉禽類動(dòng)物的衣原體感染有很好的效果。

有學(xué)者運(yùn)用不同的抗原劑量接種授精25d 前的羊，試驗(yàn)表明抗原免疫劑量為0.5mg，注射后1 個(gè)月左右抗體在羊體內(nèi)含量會(huì)達(dá)到最高，兩個(gè)月后抗體含量基本不變?？贵w的作用會(huì)一直持續(xù)到羊分娩。

4 亞單位疫苗

亞單位疫苗是運(yùn)用衣原體主要保護(hù)免疫原組分制成的疫苗。這種疫苗會(huì)選用致病衣原體的特異性抗原蛋白包括外膜蛋白、多肽膜蛋白等作為合成對(duì)象。有學(xué)者用鸚鵡熱衣原體的表達(dá)產(chǎn)物，運(yùn)用基因工程做成亞單位疫苗。給4 萬余只肉雞注射該疫苗，保護(hù)率為95%左右，對(duì)照組為85%。該疫苗還有非常安全、保護(hù)效果好、沒有副作用的優(yōu)點(diǎn)，可以有效地保護(hù)肉雞免于鸚鵡熱衣原體的感染。

5 疫苗研究技術(shù)方向

5.1 利用DNA 技術(shù)制成的疫苗

利用DNA 技術(shù)制成的疫苗也叫核酸疫苗，這種疫苗是運(yùn)用DNA 重組技術(shù)，直接注射到體內(nèi)，機(jī)體會(huì)對(duì)被誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫。這種方式安全性高，效率也高。國(guó)外有報(bào)道，利用噬菌體為介質(zhì)的DNA疫苗，有效的免疫仔豬流產(chǎn)衣原體。

5.2 利用活載體的疫苗

可以利用基因工程這項(xiàng)比較高端的技術(shù)，操控病原的基因。通過感染把疫苗運(yùn)輸?shù)礁鱾€(gè)組織，誘使機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。

6 動(dòng)物衣原體病疫苗存在問題與展望

通過以上總結(jié)，滅活疫苗還存在生產(chǎn)周期長(zhǎng)，免疫的效果不理想，疫苗活性還不穩(wěn)定等缺陷。此外，由于衣原體是人類和動(dòng)物共同感染的疾病。所以滅活疫苗的使用也存在風(fēng)險(xiǎn)。隨著社會(huì)的發(fā)展，科技的進(jìn)步，基因工程越來越被用于衣原體疫苗的研發(fā)生產(chǎn)制造方面。運(yùn)用基因工程生產(chǎn)疫苗可以不用接觸衣原體，最大程度的保證了人的安全。國(guó)內(nèi)外都已經(jīng)允許運(yùn)用生物學(xué)技術(shù)生產(chǎn)和研發(fā)疫苗，市場(chǎng)上已經(jīng)可以見到大量的這種疫苗。DNA 疫苗和活載體疫苗的研究剛剛開始，技術(shù)有待于實(shí)踐的考驗(yàn)。

動(dòng)物衣原體病盛行，阻礙了動(dòng)物的繁殖，損害了養(yǎng)殖戶的利益。所以阻止動(dòng)物衣原體病的發(fā)生和流行勢(shì)在必行。養(yǎng)殖人員應(yīng)加強(qiáng)培訓(xùn)飼養(yǎng)和防護(hù)技術(shù)，讓其在養(yǎng)殖時(shí)避免感染衣原體。但由于這項(xiàng)工作需要專業(yè)的知識(shí)，在平時(shí)生產(chǎn)生活中難免出紕漏。所以完全遏制住衣原體病的發(fā)生傳染可能性非常小，疫苗就顯得的十分重要。各類疫苗各有特點(diǎn)，要謹(jǐn)慎地選擇用以上哪一種方法研究和制作疫苗。