鐵莧菜提取物鎮(zhèn)痛作用研究

劉 彬，梁生林，常 青

鐵莧菜提取物鎮(zhèn)痛作用研究

劉 彬1，*梁生林2，常 青2

（1.井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院，江西，吉安 343000；2.井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)部，江西，吉安 343009）

探討鐵莧菜提取物的抗炎鎮(zhèn)痛作用。應(yīng)用二甲苯刺激引起的小鼠耳廓腫脹炎癥模型，探討鐵莧菜提取物經(jīng)胃注藥對小鼠耳廓腫脹炎癥的減輕作用；應(yīng)用熱板刺激和將醋酸注入腹腔刺激腹膜引起小鼠扭體反應(yīng)的疼痛模型，探討鐵莧菜提取物經(jīng)胃注藥對疼痛的減輕作用。與生理鹽水組相比較，鐵莧菜水提物和醇提物低、高劑量（3.0、6.0 g生藥/kg）組對二甲苯刺激所引起的小鼠耳廓腫脹炎癥抑制作用顯著（< 0.01）。鐵莧菜水提物和醇提物低、高劑量（3.0、6.0 g生藥/kg）組給藥后對熱板刺激所引起的小鼠痛閾值延長顯著，與生理鹽水組和它本身給藥前痛閾值相比較具有極明顯的差異（< 0.01）；鐵莧菜水提物和醇提物低、高劑量（3.0、6.0 g生藥/kg）組對醋酸刺激所引起的小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)減少顯著，與生理鹽水組相比較具有極明顯的差異（< 0.01）。鐵莧菜水提物低、高劑量組給藥后與同等劑量的醇提物相比較，具有明顯差異 (< 0.05、< 0.01)。鐵莧菜提取物經(jīng)胃注藥均具有一定抗炎、鎮(zhèn)痛作用，且水提物抗炎鎮(zhèn)痛作用較醇提物強。

鐵莧菜；水提物；醇提物；灌胃；鎮(zhèn)痛

鐵覓菜（L.）為大戟科鐵覓菜屬鐵覓菜的干燥全草，性涼、味苦澀，具清熱解毒、消積、止血、止痢的功效[l-2]?，F(xiàn)代研究表明鐵莧菜具有抗腹瀉[3]、抗?jié)冃越Y(jié)腸炎[4-5]、抗菌[6-7]、抗病毒[8]、止血[9]、止咳祛痰[10]、平喘[11]等作用。有報道鐵莧菜含有槲皮素、蘆丁等豐富的黃酮類物質(zhì)[12]，而槲皮素、蘆丁等黃酮類成分大多具有抗炎鎮(zhèn)痛活性[13-14]，因此推測鐵莧菜也可能具有抗炎鎮(zhèn)痛活性。本研究應(yīng)用二甲苯刺激引起的小鼠耳廓腫脹炎癥模型，以及小鼠熱板刺激和將醋酸注入腹腔刺激腹膜引起的小鼠扭體反應(yīng)的疼痛模型，探討鐵莧菜水提物和醇提物經(jīng)胃注藥對炎癥和疼痛的減輕作用，其目的是為鐵莧菜在臨床上的使用和進一步研究開發(fā)提供一定的實驗基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 藥物與試劑

鐵莧菜2018年8月采于江西吉安，經(jīng)井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)教研室周秋貴副教授鑒定為大戟科鐵覓菜屬植物鐵覓菜（L.）；鹽酸嗎啡，東北制藥集團公司沈陽第一制藥廠，規(guī)格1 mL:10 mg，批號130806-2；阿司匹林腸溶片，石家莊康力藥業(yè)有限公司，規(guī)格25 mg，批號130525；冰醋酸，濟南鑫龍海工貿(mào)有限公司；二甲苯，南京化學(xué)試劑股份有限公司。

1.2 動物

昆明種小鼠，清潔級，體重20 g左右，雌雄兼有，216只，由南昌大學(xué)實驗動物部提供，許可證號：SCXK(贛)2018-0005。

1.3 儀器

YLS-25A電動耳腫打耳器，濟南益延科技發(fā)展有限公司；RB-200智能熱板儀，成都泰盟軟件有限公司；循環(huán)水式多用真空泵SHB-ⅢA，上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；JA2003N 電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司。

2 方法

2.1 鐵莧菜提取物的制備

2.1.1 水提物的制備

把適度粉碎重150 g的干燥鐵莧菜，用純凈水浸泡煎煮，先加12倍量純凈水浸泡鐵莧菜30 min后用文火煎煮60 min，過濾，濾渣第2、第3次各加10倍量純凈水用文火煎煮30 min。把3次煎出液合并在一起，放置去渣，旋蒸濃縮成膏狀，放冰箱貯存。

2.1.2 醇提物的制備

用回流提取法，將150 g干燥鐵莧菜適度粉碎，用濃度為80%乙醇浸泡1 d，然后在水浴鍋中加熱回流提取，次數(shù)為3次，第1次回流60 min，第2、3次各回流30 min。合并3次醇提液，旋蒸回收乙醇，減壓蒸干，得浸膏放冰箱貯存。

水提物和醇提物應(yīng)用時，用純凈水配制所需濃度。

2.2 鐵莧菜提取物的抗炎鎮(zhèn)痛實驗

2.2.1 二甲苯刺激引起耳廓腫脹法抗炎實驗[15-17]

昆明種小鼠72只，雌雄各半，根據(jù)隨機數(shù)字表法，將小鼠按體重及性別隨機均分為6組：生理鹽水陰性對照（10 mL /kg）組，阿司匹林陽性對照（0.5 g/kg）組，鐵莧菜水提物低、高劑量（3.0、6.0 g生藥/kg）組，鐵莧菜醇提物低、高劑量（3.0、6.0 g生藥/kg）組。鐵莧菜水提物和醇提物的給藥劑量是根據(jù)《中藥大辭典》中鐵莧菜成年人的用量30 g/d[2]，再根據(jù)小鼠與人體之間的折算系數(shù)，將人體的用量折算為小鼠的用量，約為每千克6.0 g，以此作為高劑量組。小鼠均經(jīng)胃注藥，每只小鼠的灌藥容量均是每千克10 mL，每日1次，連續(xù)灌藥5 d。最后一次灌藥后60 min，用二甲苯50 μL在每只小鼠右耳廓的兩面均勻涂抹刺激引起炎癥，左耳廓不涂抹作對照用。30 min后把小鼠頸椎拉斷處死小鼠，用剪刀把小鼠雙耳從耳根部剪下，再用電動耳腫打耳器在雙耳尖的同一部位沖下直徑為8 mm圓耳片，放在電子天平上稱其重，以（致炎的右耳片重－末致炎的左耳片重）作為耳廓的腫脹度，并計算小鼠耳廓腫脹的抑制率。

小鼠耳廓腫脹抑制率（%）＝（生理鹽水組耳廓腫脹度－給藥組耳廓腫脹度）/生理鹽水組耳廓腫脹度×100%

2.2.2 熱板引痛法鎮(zhèn)痛實驗[15-17]

將熱板溫度調(diào)至（55 ± 0.1）℃并加熱至，然后把小鼠放入熱板上，當(dāng)小鼠出現(xiàn)舔后跖時，記錄小鼠從放入熱板到出現(xiàn)舔后跖的時間（即為痛閾值），篩選出痛閾值為5 ～ 30 s的合格雌性小鼠72只。根據(jù)隨機數(shù)字表法，按體重將它們均分為6組，除陽性對照組改成鹽酸嗎啡（0.02 g/kg）外，其他各組與“2.2.1”項相同。給藥前先測定各小鼠的痛閾值二次，二次測定相距時間為10 min，取二次測得的平均數(shù)值作為正常的痛閾值。鹽酸嗎啡陽性對照組給藥為第4、第5 d皮下注射，其余各組給藥與“2.2.1”項相同。最后一次給藥后0.5、1、1.5、2 h測定各小鼠的痛閾值，若放入熱板1 min仍然不舔后跖，馬上把小鼠提出來，其痛閾值算1 min。

2.2.3 醋酸刺激致小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實驗[15-17]

小鼠分組及給藥與“2.2.1”項相同。最后一次給藥后60 min，每只小鼠均腹腔注射0.6%新鮮配制的醋酸0.2 mL。記錄腹腔注射醋酸后每只小鼠在15 min內(nèi)扭體反應(yīng)（腹部內(nèi)凹、腹前壁緊貼桌面、臀部歪扭和后肢伸張）的次數(shù)，并且計算其抑制率。

抑制率（%）=（生理鹽水組扭體反應(yīng)次數(shù)－給藥組扭體反應(yīng)次數(shù)）/生理鹽水組扭體反應(yīng)次數(shù)×100%

2.3 統(tǒng)計學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 對二甲苯刺激引起的小鼠耳廓腫脹的影響

與生理鹽水組相比較，鐵莧菜水提物和醇提物低、高劑量（3.0、6.0 g生藥/kg）組對二甲苯刺激所引起小鼠耳廓腫脹均有很明顯抑制作用（< 0.01），且對耳廓腫脹的抑制作用與所用劑量大小呈正相關(guān)；阿司匹林0.5 g/kg顯著抑制二甲苯刺激所引起的小鼠耳廓腫脹（< 0.01）。與醇提物比較，鐵莧菜水提物作用較強（< 0.05，< 0.01）。結(jié)果見表1。

表1 鐵莧菜提取物對二甲苯刺激引起的小鼠耳廓腫脹度的影響（, n=12）

注：與生理鹽水組比較，??< 0.01；與同等劑量醇提物組比較，@@< 0.01，@< 0.05

3.2 對熱板引痛法引起小鼠疼痛的影響

與生理鹽水組相比較，各組的痛閾值在沒有給藥前均無差別（> 0.05）；鐵莧菜水提物和醇提物低、高劑量（3.0、6.0 g生藥/kg）組，給藥后0.5、1、1.5、2 h對小鼠熱板引痛引起的痛閾值增加均顯著（< 0.01）；鹽酸嗎啡（0.02 g/kg）組給藥后0.5、1、1.5、2 h對熱板引痛引起的小鼠痛閾值增加也明顯（< 0.01）。

與自身給藥前的痛閾值比較，鐵莧菜水提物和醇提物低、高劑量（3.0、6.0 g生藥/kg）組和鹽酸嗎啡（0.02 g/ kg）組，給藥后0.5、1、1.5、2 h對熱板引痛引起的小鼠痛閾值也明顯增加（< 0.01）。

與醇提物比較，鐵莧菜水提物作用較強（< 0.01）。結(jié)果見表2。

表2 鐵莧菜提取物對熱板引痛法引起的小鼠疼痛的鎮(zhèn)痛作用（, n=12）

注：與生理鹽水組比較，??< 0.01；與自身給藥前痛閾比較，$$< 0.01；與同等劑量醇提物比較，@@< 0.01

3.3 對醋酸刺激所引起的小鼠扭體反應(yīng)的影響

與生理鹽水組相比較，鐵莧菜水提物和醇提物低、高劑量（3.0、6.0 g生藥/kg）組對醋酸刺激腹膜所引起的小鼠的扭體反應(yīng)數(shù)目減少均顯著（< 0.01）；阿司匹林0.5 g/kg給藥后對醋酸刺激腹膜所引起的小鼠的扭體反應(yīng)數(shù)目減少也顯著（< 0.01）。結(jié)果見表3。

表3 鐵莧菜提取物對醋酸刺激所引起的小鼠扭體反應(yīng)的影響（, n=12）

注：與生理鹽水組比較，??< 0.01

4 討論

本研究應(yīng)用二甲苯刺激所引起的小鼠耳廓腫脹炎癥模型和熱板引痛、醋酸刺激腹膜所引起小鼠腹痛的扭體反應(yīng)的疼痛模型來研究鐵莧菜提取物對炎癥及疼痛的減輕作用。

二甲苯是一種化學(xué)刺激劑，涂抹在小鼠耳廓兩面，會引起液體滲出為主的耳廓腫脹的急性炎癥表現(xiàn)[18]，結(jié)果表明鐵莧菜水提物和醇提物經(jīng)胃注藥對化學(xué)刺激劑二甲苯所引起的小鼠耳廓腫脹均明顯減輕，這結(jié)果意味著鐵莧菜水提物和醇提物經(jīng)胃注藥能顯著抑制急性炎癥反應(yīng)。

采用熱板刺激小鼠足跖部引起疼痛反應(yīng)是一種物理性致痛方法。常常以小鼠放入熱板至開始舔后跖的時間為測痛的指標，即痛閾值[19]，并以痛閾值大小來衡量藥物抗痛效果的強弱。熱板刺激所引起的疼痛反應(yīng)有中樞高位的參與[20]。醋酸是一種刺激性很強的化學(xué)試劑，注入小鼠腹腔，會刺激小鼠腹膜產(chǎn)生炎癥而引起腹痛，表現(xiàn)為腹部內(nèi)凹、腹前壁緊貼桌面、臀部歪扭和后肢伸展等扭體反應(yīng)[16]。醋酸刺激小鼠腹膜引起腹痛而引發(fā)的扭體反應(yīng)實驗是用于篩選鎮(zhèn)痛作用相對較弱的鎮(zhèn)痛藥的一種靈敏、操作簡單方便、重現(xiàn)性又好的實驗方法[20]。結(jié)果表明鐵莧菜水提物和醇提物經(jīng)胃注藥對熱板引痛法所引起的小鼠痛閾值延長明顯，對醋酸刺激腹膜所引起疼痛的小鼠扭體反應(yīng)數(shù)目減少顯著，這意味著鐵莧菜水提物和醇提物經(jīng)胃注藥均明顯減輕物理因素溫?zé)岽碳ず突瘜W(xué)因素醋酸刺激所引起的疼痛。

黃酮類物質(zhì)是許多植物藥中含有的成份，有研究表明：黃酮類物質(zhì)如蘆丁具有明顯鎮(zhèn)痛作用，其作用機制主要與鈣離子拮抗有關(guān)[13]；槲皮素具有明顯的抗炎作用，其抗炎作用主要與抑制炎癥細胞因子（IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α）和炎癥酶如一氧化氮合酶有關(guān)[14]。黃酮類物質(zhì)在鐵莧菜中含量較高[12]，鐵莧菜的黃酮類物質(zhì)主要有槲皮素、蘆丁、兒茶素、表兒茶素、沒食子兒茶素等，因而鐵莧菜對炎癥及疼痛的減輕也可能與它含有槲皮素、蘆丁等黃酮類物質(zhì)有關(guān)。但其真正減輕炎癥和疼痛的活性成份，以及如何發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛作用的機制等有待于下一步進行探討。

綜上，鐵莧菜經(jīng)胃注藥對二甲苯刺激所產(chǎn)生的急性炎癥具有明顯抑制作用，對溫度等物理刺激所引起的疼痛和醋酸刺激腹膜所引起的炎癥性疼痛也均具有良好的減輕作用，這為鐵莧菜在臨床上的使用和進一步研究開發(fā)提供了一定的參考依據(jù)。

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ANTI-INFLAMMATORY AND ANALGESIC EFFECT OFEXTRACT

LIU Bin1,*LIANG Sheng-lin2，CHANG Qing2

（1. The Affiliated Hospital of Jinggangshan University, Ji’an , Jiangxi 343000, China；2.School of Medicine, Jinggangshan University, Ji'an, Jiangxi 343009, China）

To investigate the relieving effect against inflammation and pain ofextract in mice.The models of auricle swelling in mice caused by xylene and the models of pain in mice caused by hot plate stimulation and acetic acid were used to investigate the anti-inflammatory and analgesic effect of low, high doses of A.extract, respectively.Compared with the normal saline group, the water extract and alcohol extract could evidently reduce auricle swelling in mice (< 0.01). Compared with the saline group and the pre administration, the pain threshold with hot plate stimulation treated with the water extract and alcohol extract was significantly prolonged (< 0.01). And the writhing times after extract administration was significantly reduced (< 0.01) than those in the normal saline group. However, there were significant differences between the water extract groups and the alcohol extract groups at the same concentrations (< 0.05,< 0.01).A.extract had the anti-inflammatory and analgesic effect, water extract had higher effect than alcohol extract.

;water extract; alcohol extract; intragastric administration; analgesic

R285.5

A

1674-8085（2021）05-0093-05

2021-01-22；

2021-04-17

10.3669/j.issn.1674-8085.2021.05.018

全國中藥資源普查項目(財社[2018]43號)；江西省高校教改課題項目(JXJG-14-9-14)；吉安市科技局指導(dǎo)性科技計劃項目(吉市科計字[2020]20號)

劉 彬(1985-)，男，河南南陽人，主治醫(yī)師，碩士，主要從事惡性腫瘤臨床研究(zdan10@163.com)；

*梁生林(1962-)，男，江西吉安縣人，教授，主要從事中草藥藥理及毒理研究(E-mail: slliang1962@163.com)；

常 青(1997-)，男，江西九江人，井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)專業(yè)2017級本科生(E-mail: 764641362@qq.com).