紫外分光光度法研究不同發(fā)汗加工方法對(duì)玄參中多糖含量的影響*

鄧 瑩，劉 杰，魏學(xué)軍，許義紅

(黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，貴州 都勻 558000)

玄參是玄參科植物玄參ScrophularianingpoensisHemsl的干燥根，具有清熱涼血、滋陰降火、解毒散結(jié)的功能，臨床常用于治療熱病熱入營血、溫毒發(fā)斑、熱病傷陰、舌絳煩渴、津傷便秘、骨蒸勞嗽、目赤、咽痛、白喉、瘰疬與癰腫瘡毒等癥候，主產(chǎn)浙江、貴州、四川與河北等省區(qū)[1]。現(xiàn)有研究資料表明，其所含的多糖類成分具有抗疲勞、降血糖、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等多種生物活性[2-4]，可作為評(píng)價(jià)玄參質(zhì)量的指標(biāo)性成分。

產(chǎn)地加工是影響中藥材品質(zhì)的重要因素，《藥典》(2020年版)記載玄參加工方法為“采挖后除去根莖、幼芽、須根及泥沙，曬或烘至半干，堆放3～6天，反復(fù)數(shù)次至干燥”，該方法實(shí)則為傳統(tǒng)的“發(fā)汗”加工，“發(fā)汗”可使藥材變色、變軟、增加香味或減少刺激性，是質(zhì)地堅(jiān)實(shí)、水分含量較多和含有刺激性成分的中藥材常用的產(chǎn)地加工方法。據(jù)文獻(xiàn)記載，目前對(duì)玄參的“發(fā)汗”加工方法，除了用《藥典》方法加工外，各地采用的加工方法各不相同[5]，從而導(dǎo)致玄參的質(zhì)量參差不齊。本研究以多糖含量為考察指標(biāo)，探討不同“發(fā)汗”加工方法對(duì)玄參中多糖含量的影響，以期為其建立科學(xué)的產(chǎn)地加工方法提供實(shí)驗(yàn)性理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材 料

試驗(yàn)用新鮮玄參購于貴州省遵義市道真縣玄參種植基地，經(jīng)黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校中藥教研室李香教授鑒定為玄參科植物ScrophularianingpoensisHemsl的根。葡萄糖對(duì)照品購自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司(批號(hào)：110833-201707)；余試劑均為分析純。

1.2 儀 器

Cary 100型雙光束紫外-可見分光光度計(jì)，北京Agilent公司；SG-4050C型數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海碩光公司；AE240型電子分析天平，瑞士MettLer公司；DHG-9240A型真空干燥箱，上海金山公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣本的確定

試驗(yàn)藥材經(jīng)高效液相色譜法測定玄參中哈巴苷和哈巴俄苷的總量符合2020版《中國藥典》規(guī)定(不少于0.45%)。

2.2 樣品的制備

2.2.1 傳統(tǒng)“發(fā)汗”品(A1)[1]

按《藥典》記載方法操作。將新鮮玄參洗凈后，曬至半干，于陰涼通風(fēng)處堆放3天，取出，曬1天后再堆放，反復(fù)5次即可干燥。

2.2.2 傳統(tǒng)“發(fā)汗”品(A2)[1]

按《藥典》記載方法操作。將新鮮玄參洗凈后，于60 ℃烘至半干，于陰涼通風(fēng)處堆放3天，取出，60 ℃烘30 min后再堆放，反復(fù)3次即可干燥。

2.2.3 蒸后“發(fā)汗”品(A3)[6]

將新鮮玄參洗凈后，于籠屜內(nèi)隔水蒸30 min(按“圓氣”后計(jì))后，取出，曬至半干，余步驟同“2.2.1”項(xiàng)。

2.2.4 蒸后“發(fā)汗”品(A4)

將新鮮玄參洗凈后，于籠屜內(nèi)隔水蒸30 min(按“圓氣”后計(jì))后，取出，于60 ℃烘至半干，余步驟同“2.2.2”項(xiàng)。

2.2.5 煮后“發(fā)汗”品(A5)[6]

將新鮮玄參洗凈后，于沸水中煮30 min后，撈出，曬至半干，余步驟同“2.2.1”項(xiàng)。

2.2.6 煮后“發(fā)汗”品(A6)

將新鮮玄參洗凈后，于沸水中煮30 min后，撈出，于60 ℃烘至半干，余步驟同“2.2.2”項(xiàng)。

2.3 多糖含量測定方法[7]

2.3.1 供試品溶液的制備

精密稱取A1～A6玄參樣品各10.0 g置于圓底燒瓶中，分別加入95%乙醇100 mL，于80 ℃回流2 h，重復(fù)提取2次，藥渣再加100 mL蒸餾水回流提取2h，趁熱抽濾，重復(fù)提取兩次，合并濾液濃縮至一定體積，加無水乙醇至含醇量80%，放置24 h，抽濾，沉淀依次用乙醇、丙酮、乙醚各10 mL洗滌，50 ℃干燥，稱重，得玄參樣品粗多糖。精密稱取A1～A6玄參樣品粗多糖各5.0 mg加蒸餾水定容至50 mL容量瓶中，各樣品均制備3份供試品溶液，冷藏備用。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖5.01 mg，置于50 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻制備得100.20 μg/mL的葡萄糖對(duì)照品溶液。

2.3.3 線性關(guān)系考察

精密吸取100.20 μg/mL的葡萄糖對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6 mL，分別置于50 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度并搖勻，配制成系列葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各2 mL于具塞試管中，分別移入1 mL 5%苯酚溶液，再迅速加入濃硫酸7 mL，搖勻，40 ℃水浴30 min，再放入冰水中冷卻至室溫。將顯色后的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液在200～700 nm間掃描，其在486 nm處有最大吸收，確定為檢測波長。以蒸餾水為空白對(duì)照，在486 nm處測定上述顯色葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，以葡萄糖溶液濃度為橫坐標(biāo)C(μg/mL)，吸光度為縱坐標(biāo)A進(jìn)行回歸，結(jié)果A=0.2308C+0.0043，r=0.9993，表明多糖在4～24 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.4 方法學(xué)考察

精密吸取A1樣品多糖供試液，按“2.3.3”項(xiàng)下方法連續(xù)測定吸光度6次，結(jié)果RSD=0.15%，說明儀器精密度良好。精密吸取多糖對(duì)照品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下方法分別在 0、10、20、30、60、90、120 min 測定吸光度，結(jié)果RSD=1.26%，結(jié)果表明多糖對(duì)照品溶液在120 min 內(nèi)穩(wěn)定性良好。精密稱取A1樣品粗多糖5.0 mg，5份，加蒸餾水溶解，定容于50 mL容量瓶中，搖勻，按“2.3.3”項(xiàng)下方法測定吸光度，多糖含量的RSD=2.0%，表明該方法重復(fù)性良好。精密稱取A1樣品粗多糖3.0 mg，6份，置于50 mL容量瓶中，分別精密加入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品適量，加蒸餾水溶解并定容，搖勻，按“2.3.3”項(xiàng)下方法測定，葡萄糖平均回收率為98.90%，RSD值為1.28%。

2.3.5 含量測定

精密稱取A1～A6玄參樣品粗多糖各5 mg，加蒸餾水溶解，定容于50 mL容量瓶中，搖勻，按“2.3.3”項(xiàng)下方法測定吸光度并計(jì)算多糖含量，結(jié)果見表1。

表1 不同“發(fā)汗”加工方法多糖含量比較Table 1 Comparison of the contents of polysaccharides in different “sweat”processing methods

3 結(jié) 論

表1結(jié)果顯示，不同“發(fā)汗”加工方法對(duì)玄參中多糖的含量有影響。采用煮后“發(fā)汗”制品(A5和A6)的含量較《藥典》記載的“發(fā)汗”制品(A1和A2)和蒸后“發(fā)汗”制品(A3和A4)高，且具顯著性差異，究其原因，可能與溫度和加工時(shí)間有關(guān)。藥材中植物細(xì)胞和某些物質(zhì)為維持自己的生物活性，需消耗一定的營養(yǎng)物質(zhì)(如多糖等)，煮的溫度較高，能使植物細(xì)胞和某些活性物質(zhì)在較短時(shí)間內(nèi)滅活，減少了對(duì)多糖的消耗，因而含量較高。而蒸的溫度更高，可能對(duì)多糖的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞，因而含量較煮后“發(fā)汗”制品低。同時(shí)，采用《藥典》“發(fā)汗”的兩種制品(A1和A2)含量上亦具有顯著性差異，采用烘至半干后再“發(fā)汗”的制品(A2)高，原因與適宜的烘干溫度快速除去部分水分，減少了多糖的水解有關(guān)。該結(jié)果提示，實(shí)際應(yīng)用中若以多糖的治療作用或藥理作用為主時(shí)，可對(duì)《藥典》記載的“發(fā)汗”加工方法進(jìn)行改進(jìn)，建議選用“煮后”發(fā)汗對(duì)玄參進(jìn)行產(chǎn)地加工。