加速溶劑萃取GC-MS分析黃虎掌菌提取物

高 偉，賈有春，段新勇，呂俊美，蔣艷瓊

(云南潤玉生物技術(shù)有限公司，云南 玉溪 653100)

黃鱗多孔菌(Ellis’s Polypore)，俗稱黃虎掌菌，系地花孔菌科真菌，學(xué)名大孢地花孔菌(Albatrellusellisii(Berk.)Pouzar(≡PolyporusellisiiBerk.))[1-3]，是中國100種名蘑之一[4]。目前對黃虎掌菌研究較少，僅見于對黃虎掌多糖提取及抗氧化活性研究[5]，對營養(yǎng)成分分析評價(jià)[6]等。文獻(xiàn)報(bào)道地花菌類含有一些生物活性物質(zhì)[7-9]，為進(jìn)一步深入研究黃虎掌菌的活性成分，本實(shí)驗(yàn)嘗試使用加速溶劑萃取儀提取黃虎掌菌中有機(jī)提取物，并利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)進(jìn)行分析，以便為黃虎掌菌的開發(fā)利用提供技術(shù)支持。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 材料與試劑

黃虎掌菌干品購于昆明市野生菌交易市場，經(jīng)有關(guān)專家鑒定為黃虎掌菌。干燥樣品經(jīng)旋風(fēng)磨粉碎后過40目篩備用。

甲醇、乙腈：色譜純，美國fisher公司。

1.2 儀 器

Agilent 7890B-5975C型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國Agilent公司；Buchi Speed Exactor E916型加速溶劑萃取儀，瑞士Buchi公司；Buchi Multivapor P-6型平行濃縮儀，瑞士Buchi公司。

1.3 樣品處理

稱取3 g樣品粉末(精確至0.01 g)于小燒杯中，加入3 g無水硫酸鈉、3 g石英砂，混合均勻后裝入樣品池，加入15 mL甲醇-乙腈(v/v=1:1)加壓萃取。萃取溫度：120 ℃；萃取壓強(qiáng)：12 MPa；萃取時間：4 min，循環(huán)3次；氮?dú)獯祾? min。提取結(jié)束后將接收液在平行濃縮儀上濃縮，定容至2 m。

1.4 分析條件

色譜條件：色譜柱：Agilent DB-5MS毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；載氣：高純氦；流速：1 mL/min；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；進(jìn)樣量：2 μL，分流比：15；程序升溫：初溫50 ℃，保持2 min；以5 ℃/min升至200 ℃，保持5 min；以5 ℃/min升至250 ℃，保持6 min。

質(zhì)譜條件：EI源；掃描范圍：35～450 Da；傳輸線溫度：200 ℃；離子源溫度：150 ℃。

2 結(jié)果與討論

黃虎掌菌樣品經(jīng)加速溶劑萃取，萃取液經(jīng)濃縮后，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析，總離子流色譜圖見圖1，成分較為復(fù)雜。利用NIST(2011版)和WILEY(8th版)譜庫檢索分析，結(jié)合自動質(zhì)譜解卷積系統(tǒng)，最終鑒定出29種化學(xué)成分，結(jié)果如表1所示。29種成分中有5種酮、3種醇、2種醛、6種酯、9種酸、2種甾醇、2種其它類化合物。

圖1 黃虎掌萃取物GC-MS分析的總離子流色譜圖Fig.1 TIC chromatogram of Ellis’s Polypore exactive

根據(jù)文獻(xiàn)[10-11]星魚甾醇(stellasterol)是生物活性物質(zhì)；奇果菌素(grifolin)是地花菌特有的生物活性物質(zhì)，具有抗菌、抗氧化、抑制抗腫瘤細(xì)胞活性[12-15]；脂肪酸是要用真菌常見的化學(xué)成分，從多孔真菌分離的脂肪酸有豆蔻酸、棕櫚酸、油酸、亞油酸、硬脂酸[16]等，本實(shí)驗(yàn)也檢測出豆蔻酸、棕櫚酸、亞油酸、硬脂酸及相應(yīng)的酯類；檢出的甘露醇與文獻(xiàn)[7]一致。

3 結(jié) 論

加速溶劑萃取是在加壓加溫的條件下提取，相比振蕩提取、超聲提取更為快速，提取更為充分。本文利用加速溶劑萃取可快速高效地提取云南野生黃虎掌菌的有機(jī)物質(zhì)，含量較高的有29種，主要是酮、醇、醛、酯、酸和甾醇等，其中一些是文獻(xiàn)報(bào)道的活性成分，可為野生黃虎掌菌的開發(fā)利用提供技術(shù)基礎(chǔ)。

表1 黃虎掌菌加速溶劑萃取物的化學(xué)成分Table 1 Chemical components of extractivefrom Ellis’s Polypore