水楊酸軟膏的體外釋放研究

欽富華，談 增

(浙江醫(yī)藥高等專科學(xué)校，浙江 寧波 315100)

水楊酸軟膏是臨床常用的皮膚科外用藥，主要由水楊酸與凡士林及其他油脂性基質(zhì)成分組成的半固體制劑，具有抗菌、止癢、軟化角質(zhì)等作用。水楊酸軟膏的作用與水楊酸的濃度有關(guān)，臨床主要用于脂溢性皮炎、銀屑病、淺部真菌病及局部角質(zhì)增生。目前市售的產(chǎn)品均為混懸型軟膏，是將水楊酸粉碎后直接與凡士林混勻制得，該制劑在生產(chǎn)操作及質(zhì)量控制均存在一定的缺陷：粉碎操作時(shí)粉塵飛揚(yáng)，水楊酸具有黏膜刺激性，不利于勞動(dòng)保護(hù)[1]；產(chǎn)品涂布時(shí)有明顯的顆粒感，且在放置過(guò)程中存在長(zhǎng)晶現(xiàn)象，導(dǎo)致粒度超標(biāo)問(wèn)題[2]。為此，本研究一種新型的水楊酸軟膏，其中水楊酸以溶解狀態(tài)存在于油脂性基質(zhì)中，解決了其涂布的不適感和長(zhǎng)晶問(wèn)題。

體外釋放是評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，對(duì)于外用半固體制劑而言，藥物的從基質(zhì)中釋放是其發(fā)揮作用的前提條件。CDE發(fā)布的《皮膚外用化學(xué)仿制藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》中建議半固體制劑的體外釋放試驗(yàn)參考FDA的相關(guān)指導(dǎo)原則進(jìn)行。根據(jù)FDA頒布的SUPAC-SS指導(dǎo)原則及相關(guān)的指南建議，半固體制劑的釋放可以用人工膜，也可以用人工細(xì)胞層，兩種方法結(jié)果相似，在方法的選擇上，F(xiàn)DA推薦采用Franz擴(kuò)散池法[3-4]。本研究采用改良的Franz擴(kuò)散池法，以人工膜替代人體離體皮膚進(jìn)行水楊酸軟膏的釋放度考察，為制劑的進(jìn)步一優(yōu)化及后期的質(zhì)量研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 試劑與材料

水楊酸對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究院(批號(hào)：100106-201104，含量為99.9%)；水楊酸軟膏，自制(濃度分別為2%和3%，批號(hào)20201231)；市售水楊酸軟膏，上海運(yùn)佳黃埔制藥(批號(hào)201002)；水為超純水；甲醇為色譜純；其它藥品、試劑均為分析純。

人工膜為0.45 μm 聚醚砜濾膜(PES膜)，0.45 μm的混合纖維素濾膜(CN-CA膜)，0.45 μm的有機(jī)系尼龍膜，均購(gòu)自海寧市鹽官創(chuàng)為過(guò)濾器材廠。

1.2 儀 器

Agilent 1260高效液相色譜儀，美國(guó)安捷倫；METTLER TOLEDO電子分析天平，梅特勒-托利多；RYJ-6B型透皮擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)儀，黃海藥檢；Millipore超純水機(jī)，美國(guó)密理博；pHS-3G pH計(jì)，上海儀電科學(xué)儀器有限公司；BX43-FL正置熒光顯微鏡，日本奧林巴斯。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 水楊酸HPLC檢測(cè)方法學(xué)[5]

2.1.1 色譜條件

色譜柱為Agilene Eclipse XDB C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為2%冰醋酸溶液:甲醇(55:45)，流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取20.0 mg水楊酸對(duì)照品，置50 mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解并定容至刻度，得400 μg·mL-1的貯備液。再用溶出介質(zhì)將貯備液稀釋成濃度為20、40、80、160、240、320 μg·mL-1的水楊酸對(duì)照品溶液。按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

2.1.3 精密度實(shí)驗(yàn)

將貯備液用溶出介質(zhì)稀釋成濃度為20、80、320 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣5次，記錄峰面積并計(jì)算其濃度，連續(xù)測(cè)定5d，計(jì)算日內(nèi)、日間精密度。

2.1.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取溶出樣品，于室溫放置0、1、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算RSD。

2.2 水楊酸軟膏的顯微觀察

取軟膏適量，置載玻片上，涂成薄層，薄層面積相當(dāng)于蓋玻片面積，置顯微鏡下，放大適當(dāng)倍數(shù)觀察。

2.3 不同人工膜對(duì)釋放的影響[6]

采用改進(jìn)的Franz擴(kuò)散池進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別將不同的人工膜固定于接收池和給藥池之間，釋放面積為3.14 cm2，接收池體積為19 mL。用pH 7.4的磷酸鹽緩沖液配制質(zhì)量濃度為400 μg·mL-1的水楊酸溶液，于給藥池中加入1 mL該溶液，接收池中加入經(jīng)脫氣處理的磷酸鹽緩沖液作為接收介質(zhì)，于32 ℃恒溫水浴恒速攪拌，攪拌速度為300 rpm。分別于20、40、60、120分鐘取樣1 mL，同時(shí)補(bǔ)充等量同溫度的空白接收介質(zhì)。樣品經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾后，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定水楊酸濃度，計(jì)算藥物溶液累積釋放百分率，以累積釋放百分率(Q)對(duì)時(shí)間(t)作圖。

2.4 水楊酸軟膏釋放度的測(cè)定

采用“2.2”項(xiàng)下的方法和條件，將選定的CN-CA膜固定于接收池和給藥池之間，取0.3 g自制和市售的的水楊酸軟膏分別均勻涂布于給藥池一側(cè)，接收池中加入經(jīng)脫氣處理的pH 7.4的磷酸鹽緩沖液，分別于0.5、1、2、4、6、8、12 h取樣1 mL，同時(shí)補(bǔ)充等量同溫度的空白接收介質(zhì)。樣品經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾后，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定水楊酸濃度，計(jì)算單位面積累積釋放量(Q)。以Q對(duì)t作圖。以Q對(duì)t的平方根進(jìn)行線性擬合，計(jì)算其斜率得釋放速率。

3 結(jié)果與討論

3.1 水楊酸HPLC檢測(cè)方法學(xué)

在“2.1.1”項(xiàng)色譜條件下，水楊酸的色譜峰形良好，出峰時(shí)間適宜，結(jié)果見(jiàn)圖1。以峰面積(A)對(duì)濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A=15.825C +4.1044(r=0.9999)，表明水楊酸在20～320 μg·mL-1范圍內(nèi)峰面積與濃度線性關(guān)系良好。低、中、高濃度的日內(nèi)RSD分別為0.54%，0.37%和0.66%，日間RSD分別為0.98%，0.81%和1.19%，均符合要求。釋放樣品峰面積的RSD為0.51%。表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

圖1 水楊酸高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatography of salicylic acid

3.2 水楊酸軟膏的顯微觀察

5%濃度的市售軟膏及自制水楊酸軟膏的顯微結(jié)果分別見(jiàn)如圖2 A和B，市售產(chǎn)品中水楊酸以顆粒狀態(tài)存在，涂布時(shí)有明顯的粗糙感，而自制軟膏質(zhì)地均勻細(xì)膩，藥物呈溶解狀態(tài)分散在基質(zhì)中，顯微鏡下未觀察到水楊酸結(jié)晶。

圖2 市售軟膏及自制軟膏的顯微照片(×200倍)Fig 2 Micrographs of commercial and self-made ointments

3.3 不同人工膜對(duì)釋放的影響

相比于離體皮膚，人工膜具有良好的批間均勻性、穩(wěn)定性，使用方便，易于獲得，目前已被廣泛應(yīng)用于局部制劑的體外釋放試驗(yàn)過(guò)程中。但在選擇人工膜時(shí)，首先要考察膜對(duì)藥物的釋放是否有阻滯作用，從而選擇合適的人工膜[7]。本研究選擇了三種規(guī)格均為0.45 μm的不同膜進(jìn)行了考察，結(jié)果見(jiàn)圖3。三種膜之中，混合纖維素濾膜(CN-CA膜)對(duì)水楊酸釋放的阻滯效果最小，40 min時(shí)藥物累積釋放達(dá)到90%以上，說(shuō)明藥物與膜無(wú)相互作用也無(wú)滯留作用，可將其作為后續(xù)體外釋放用隔離膜。

圖3 不同人工膜水楊酸的累積釋放曲線Fig.3 The accumulated release amount of salisylic acid from drug solution through deferent synthetic membranes

3.4 水楊酸軟膏釋放度的測(cè)定

圖4 不同水楊酸軟膏的體外釋放曲線Fig.4 In vitro release of salisylic acid from different Ointments

以混合纖維素膜為人工膜對(duì)不同水楊酸軟膏進(jìn)行體外釋放試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)圖4和表1。半固體局部用制劑的累積釋放量與時(shí)間的平方根應(yīng)成線性關(guān)系，本研究中自制軟膏和市售軟膏的線性回歸系數(shù)均接近1，表明線性關(guān)系良好，符合Higuchi釋藥模型，結(jié)果與相關(guān)研究報(bào)道一致[7]。從釋放曲線和釋放速率可明顯看出，自制水楊酸軟膏的釋放顯著快于市售產(chǎn)品，主要原因是藥物在基質(zhì)中存在的狀態(tài)不同，結(jié)晶狀的藥物要釋放透過(guò)人工膜需要溶解過(guò)程，導(dǎo)致市售產(chǎn)品釋放速度慢，釋放量少，可能影響藥物作用的發(fā)揮。自制軟膏中，隨著藥物濃度的增加，釋放速率相應(yīng)增加，表明藥物在基質(zhì)中的釋放主要以擴(kuò)散為主，與藥物的濃度成正比。從體外釋放結(jié)果看，自制軟膏可增加藥物在皮膚局部的濃度從而增強(qiáng)藥效，或可通過(guò)降低自制軟膏的濃度來(lái)達(dá)到與市售制劑相當(dāng)?shù)尼屗幮Ч?，從而降低用藥劑量，減小不良反應(yīng)，相關(guān)的結(jié)果還需要通過(guò)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步證實(shí)。

表1 不同軟膏的線性擬合結(jié)果Table 1 The drug release rate and correlation coefficient of different Ointments

4 結(jié) 論

本研究為解決目前市售水楊酸軟膏質(zhì)地粗糙，長(zhǎng)期放置粒度超標(biāo)等問(wèn)題，開(kāi)發(fā)了溶解態(tài)的水楊酸油脂性基質(zhì)軟膏，并對(duì)其體外釋放行為進(jìn)行了考察。研究結(jié)果顯示自制軟膏相比于市售軟膏釋放速度明顯加快(4.96倍)，釋放過(guò)程符合Higuchi釋藥模型，藥物在基質(zhì)中的釋放主要以擴(kuò)散為主，為水楊酸外用制劑的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)奠定了一定的基礎(chǔ)。