高效液相色譜法同時測定果醬中6種合成著色劑

陳秀英

摘 要：目的：建立果醬中6種合成著色劑的高效液相色譜測定方法。方法：樣品經(jīng)70 ℃的熱水浸泡、提取后，加入一定濃度的氫氧化鈉和硫酸鋅溶液沉淀，定容后離心，最后取上清液過膜上機。以乙酸銨（0.02 mol/L）-甲醇作為流動相進行梯度洗脫，紫外分光光度計檢測，外標法定量。結果：6種合成著色劑在3個濃度的添加水平下，回收率為88%～102%，相對標準偏差為1.0%～3.7%，在0.1～50.0 μg/mL的濃度范圍下呈現(xiàn)良好的線性關系，R2≥0.999。亮藍檢出限為1.0 mg/kg，檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃和誘惑紅的檢出限均為0.5 mg/kg。

關鍵詞：著色劑;果醬;高效液相色譜法

天然著色劑安全、成本高，而合成著色劑價格便宜且效果明顯，所以更多商家選擇使用合成著色劑。但合成著色劑不僅沒有營養(yǎng)價值，過多使用還會對人體健康造成一定的威脅[1-2]，所以我國對其在食品中的使用作了明確的規(guī)定[3]。目前，國家標準規(guī)定的合成著色劑檢測方法主要是高效液相色譜法[4]和紙色譜法[5]，但是這兩種方法的前處理過程不一樣，檢測條件不同，步驟煩瑣。國家標準沒有針對果醬制品提出具體的前處理方法，而且對果醬中合成著色劑的研究也暫未見報道，所以針對果醬中常用著色劑，非常有必要研究一種操作簡便又能夠滿足于檢驗機構日常檢測任務的前處理方法，提高工作效率。

1 材料與方法

1.1 試劑

甲醇（CH3OH）：色譜純;乙酸銨（CH3COONH4）：分析純;氫氧化鈉（NaOH）：分析純;硫酸鋅（ZnSO4）：分析純;實驗用水：超純水。

檸檬黃（CAS：1934-21-0）、莧菜紅（CAS：915-67-3）、胭脂紅（CAS：2611-82-7）、日落黃（CAS：2783-94-0）、誘惑紅（CAS：25956-17-6）、亮藍（CAS：3844-45-9）、購自中國計量科學研究院，濃度均為0.500 mg/mL。

1.2 儀器和設備

LC-2010AHT高效液相色譜儀配紫外檢測器（日本島津公司）;AR224CN型天平（奧豪斯儀器（常州）有限公司）：感量為0.000 1 g;HH-2型恒溫水浴鍋（常州澳華）;KQ-500E型超聲清洗器（昆山超聲）。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品前處理

稱取約5 g（精確至0.000 1 g）經(jīng)粉碎均勻的樣品，放入80 mL的小燒杯中，加水20 mL，用玻璃棒攪拌后放入70 ℃的水浴鍋中加熱溶解30 min（不溶解的樣品可以適當延長時間或提升溫度至全部溶解），取出，冷卻至室溫后轉移到50 mL帶刻度的容量瓶中，加入1 mol/L的NaoH溶液5 mL，1 mol/L的硫酸鋅溶液5 mL，定容50 mL。然后劇烈振搖10 s后，離心，取上清液過0.45 μm微孔濾膜，進高效液相色譜儀分析。將樣品提取液和合成著色劑標準使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時間定性，峰面積大小進行外標法定量。

1.3.2 標準溶液配制

（1）合成著色劑標準混合儲備液（100 μg/mL）：各吸取0.5 mg/mL的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、亮藍和誘惑紅標準原液2.0 mL，用超純水定容至10.0 mL。

（2）合成著色劑標準使用液：吸取100 μg/mL標準混合儲備液0.01 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL和5.0 mL用超純水定容至10.0 mL，配成每毫升相當0.1 μg、1.0 μg、2.0 μg、5.0 μg、10.0 μg、20.0 μg和50.0 μg的合成著色劑，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾上機。

（3）乙酸銨溶液（0.02 mol/L）：稱取1.54 g乙酸銨，加水至1 000 mL，溶解，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，超聲脫氣。氫氧化鈉溶液（1 mol/L）：稱取40 g氫氧化鈉，加水至1 000 mL，溶解混勻。硫酸鋅溶液（1 mol/L）：稱取161 g硫酸鋅，加水至1 000 mL，溶解混勻。

1.3.3 上機條件

色譜柱：C18柱，4.6 mm×250 mm×5 μm（島津Ankylo C18）;流速：1.0 mL/min;檢測波長：254 nm;柱溫：30 ℃;進樣量：10 μL;采用梯度洗脫，以乙酸銨（0.02 mol/L）-甲醇作為流動相，具體條件如表1。

1.3.4 結果計算

試樣中著色劑含量的計算公式：

式中：X-試樣中著色劑的含量，單位為g/kg;c-標準物質的濃度，單位為μg/mL，m-試樣的質量，單位為mg;v-試樣稀釋總體積，單位為mL;1 000-換算系數(shù)。

2 結果與分析

2.1 線性方程及檢出限

按照國家標準要求將標準物質配成0.1 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL和50.0 μg/mL的系列濃度，以峰面積為縱坐標Y，著色劑的含量（μg/mL）為橫坐標X繪制標準曲線，進行線性回歸分析，回歸方程如表1所示。在空白樣品中添加適量混合標準中間溶液，按1.3.1的樣品前處理步驟操作，以S/N=3，即以3倍信噪比計算檢測限，結果見表2。

2.2 回收率及精密度

精密稱取已知不含6大合成著色劑的果醬6份，每份約5 g，以2份為1組，每組分別精密加入標準原液0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL，按1.3.1中的方法進行平行測定，計算加樣回收率，6種合成著色劑的回收率為88%～102%，RSD為1.0%～3.7%，表明該方法準確度良好。

2.3 驗證試驗

抽取客戶委托送樣的10個批次樣品作為代表，采取上述方法進行處理，結果如表4。

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值均低于算術平均值10%，符合標準要求。10批次樣品中，只有1批次（第10批）的樣品因為誤用了不得添加的誘惑紅導致不合格，其余9批次均合格，與初測結果基本一致。

3 結論

本實驗通過改變樣品的前處理方法來同時測定6種合成著色劑，免去了吸附、洗脫、濃縮等煩瑣的操作步驟，操作簡單、試劑用量少，符合環(huán)保的原則;而且3 h就可以出結果，可實現(xiàn)批量化檢測、快速高效?；厥章试?8%～102%，相對標準偏差為1.0%～3.7%，標準曲線呈現(xiàn)良好的線性關系，檢出限也能達到國標要求，此法快速、準確、高效，可廣泛應用于合成著色劑的檢測。

參考文獻

[1]丁成翔，代漢慧，陳冬東.六種著色劑毒性研究進展[J].檢驗檢疫學刊，2009，19（2）：70-73.

[2]宋環(huán).食品添加劑應用現(xiàn)狀分析[J].科學教育，2010（5）：73-75.

[3]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品添加劑使用標準：GB 2760—2014[S].北京：中國標準出版社，2014.

[4]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定：GB 5009.35—2016[S].北京：中國標準出版社，2016.

[5]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品中誘惑紅的測定：GB 5009.141—2016[S].北京：中國標準出版社，2016.