高效液相色譜法同時測定果醬中6種合成著色劑

陳秀英

摘 要：目的：建立果醬中6種合成著色劑的高效液相色譜測定方法。方法：樣品經(jīng)70 ℃的熱水浸泡、提取后，加入一定濃度的氫氧化鈉和硫酸鋅溶液沉淀，定容后離心，最后取上清液過膜上機。以乙酸銨（0.02 mol/L）-甲醇作為流動相進行梯度洗脫，紫外分光光度計檢測，外標法定量。結(jié)果：6種合成著色劑在3個濃度的添加水平下，回收率為88%～102%，相對標準偏差為1.0%～3.7%，在0.1～50.0 μg/mL的濃度范圍下呈現(xiàn)良好的線性關系，R2≥0.999。亮藍檢出限為1.0 mg/kg，檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃和誘惑紅的檢出限均為0.5 mg/kg。

關鍵詞：著色劑;果醬;高效液相色譜法

天然著色劑安全、成本高，而合成著色劑價格便宜且效果明顯，所以更多商家選擇使用合成著色劑。但合成著色劑不僅沒有營養(yǎng)價值，過多使用還會對人體健康造成一定的威脅[1-2]，所以我國對其在食品中的使用作了明確的規(guī)定[3]。目前，國家標準規(guī)定的合成著色劑檢測方法主要是高效液相色譜法[4]和紙色譜法[5]，但是這兩種方法的前處理過程不一樣，檢測條件不同，步驟煩瑣。國家標準沒有針對果醬制品提出具體的前處理方法，而且對果醬中合成著色劑的研究也暫未見報道，所以針對果醬中常用著色劑，非常有必要研究一種操作簡便又能夠滿足于檢驗機構(gòu)日常檢測任務的前處理方法，提高工作效率。

1 材料與方法

1.1 試劑

甲醇（CH3OH）：色譜純;乙酸銨（CH3COONH4）：分析純;氫氧化鈉（NaOH）：分析純;硫酸鋅（ZnSO4）：分析純;實驗用水：超純水。

檸檬黃（CAS：1934-21-0）、莧菜紅（CAS：915-67-3）、胭脂紅（CAS：2611-82-7）、日落黃（CAS：2783-94-0）、誘惑紅（CAS：25956-17-6）、亮藍（CAS：3844-45-9）、購自中國計量科學研究院，濃度均為0.500 mg/mL。

1.2 儀器和設備

LC-2010AHT高效液相色譜儀配紫外檢測器（日本島津公司）;AR224CN型天平（奧豪斯儀器（常州）有限公司）：感量為0.000 1 g;HH-2型恒溫水浴鍋（常州澳華）;KQ-500E型超聲清洗器（昆山超聲）。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品前處理

稱取約5 g（精確至0.000 1 g）經(jīng)粉碎均勻的樣品，放入80 mL的小燒杯中，加水20 mL，用玻璃棒攪拌后放入70 ℃的水浴鍋中加熱溶解30 min（不溶解的樣品可以適當延長時間或提升溫度至全部溶解），取出，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移到50 mL帶刻度的容量瓶中，加入1 mol/L的NaoH溶液5 mL，1 mol/L的硫酸鋅溶液5 mL，定容50 mL。然后劇烈振搖10 s后，離心，取上清液過0.45 μm微孔濾膜，進高效液相色譜儀分析。將樣品提取液和合成著色劑標準使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時間定性，峰面積大小進行外標法定量。

1.3.2 標準溶液配制

（1）合成著色劑標準混合儲備液（100 μg/mL）：各吸取0.5 mg/mL的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、亮藍和誘惑紅標準原液2.0 mL，用超純水定容至10.0 mL。

（2）合成著色劑標準使用液：吸取100 μg/mL標準混合儲備液0.01 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL和5.0 mL用超純水定容至10.0 mL，配成每毫升相當0.1 μg、1.0 μg、2.0 μg、5.0 μg、10.0 μg、20.0 μg和50.0 μg的合成著色劑，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾上機。

（3）乙酸銨溶液（0.02 mol/L）：稱取1.54 g乙酸銨，加水至1 000 mL，溶解，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，超聲脫氣。氫氧化鈉溶液（1 mol/L）：稱取40 g氫氧化鈉，加水至1 000 mL，溶解混勻。硫酸鋅溶液（1 mol/L）：稱取161 g硫酸鋅，加水至1 000 mL，溶解混勻。

1.3.3 上機條件

色譜柱：C18柱，4.6 mm×250 mm×5 μm（島津Ankylo C18）;流速：1.0 mL/min;檢測波長：254 nm;柱溫：30 ℃;進樣量：10 μL;采用梯度洗脫，以乙酸銨（0.02 mol/L）-甲醇作為流動相，具體條件如表1。

1.3.4 結(jié)果計算

試樣中著色劑含量的計算公式：

式中：X-試樣中著色劑的含量，單位為g/kg;c-標準物質(zhì)的濃度，單位為μg/mL，m-試樣的質(zhì)量，單位為mg;v-試樣稀釋總體積，單位為mL;1 000-換算系數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性方程及檢出限

按照國家標準要求將標準物質(zhì)配成0.1 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL和50.0 μg/mL的系列濃度，以峰面積為縱坐標Y，著色劑的含量（μg/mL）為橫坐標X繪制標準曲線，進行線性回歸分析，回歸方程如表1所示。在空白樣品中添加適量混合標準中間溶液，按1.3.1的樣品前處理步驟操作，以S/N=3，即以3倍信噪比計算檢測限，結(jié)果見表2。

2.2 回收率及精密度

精密稱取已知不含6大合成著色劑的果醬6份，每份約5 g，以2份為1組，每組分別精密加入標準原液0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL，按1.3.1中的方法進行平行測定，計算加樣回收率，6種合成著色劑的回收率為88%～102%，RSD為1.0%～3.7%，表明該方法準確度良好。

2.3 驗證試驗

抽取客戶委托送樣的10個批次樣品作為代表，采取上述方法進行處理，結(jié)果如表4。

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值均低于算術平均值10%，符合標準要求。10批次樣品中，只有1批次（第10批）的樣品因為誤用了不得添加的誘惑紅導致不合格，其余9批次均合格，與初測結(jié)果基本一致。

3 結(jié)論

本實驗通過改變樣品的前處理方法來同時測定6種合成著色劑，免去了吸附、洗脫、濃縮等煩瑣的操作步驟，操作簡單、試劑用量少，符合環(huán)保的原則;而且3 h就可以出結(jié)果，可實現(xiàn)批量化檢測、快速高效?；厥章试?8%～102%，相對標準偏差為1.0%～3.7%，標準曲線呈現(xiàn)良好的線性關系，檢出限也能達到國標要求，此法快速、準確、高效，可廣泛應用于合成著色劑的檢測。

參考文獻

[1]丁成翔，代漢慧，陳冬東.六種著色劑毒性研究進展[J].檢驗檢疫學刊，2009，19（2）：70-73.

[2]宋環(huán).食品添加劑應用現(xiàn)狀分析[J].科學教育，2010（5）：73-75.

[3]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品添加劑使用標準：GB 2760—2014[S].北京：中國標準出版社，2014.

[4]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定：GB 5009.35—2016[S].北京：中國標準出版社，2016.

[5]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品中誘惑紅的測定：GB 5009.141—2016[S].北京：中國標準出版社，2016.