血清IgE 在犬過(guò)敏性胃腸炎診斷中的應(yīng)用

俞向前，程曼玲，文德亮，徐偉峰，郭志波，徐 蕾，孫福華，朱建國(guó)，葉承榮

（1.上海市浦東新區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201299；2.上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院，上海 200240；3.上海市浦東新區(qū)合慶鎮(zhèn)集體資產(chǎn)管理，上海 201201；4.上海市浦東新區(qū)川沙新鎮(zhèn)集體資產(chǎn)管理事務(wù)中心，上海 201202）

動(dòng)物過(guò)敏性胃腸炎是過(guò)敏性(變態(tài)反應(yīng)性)胃腸炎，即變應(yīng)原與免疫球蛋白E(IgE)在胃腸道發(fā)生反應(yīng)，患病動(dòng)物可出現(xiàn)一系列胃腸道反應(yīng)，如腹瀉、嘔吐、甚至便血等。過(guò)敏性胃腸炎發(fā)生原因很復(fù)雜，隨著生活方式改變、生態(tài)環(huán)境及社會(huì)的變化，包括人類(lèi)在內(nèi)的動(dòng)物過(guò)敏性胃腸炎發(fā)生呈上升趨勢(shì)，日益引起醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。但與人的過(guò)敏性胃腸炎相比，犬過(guò)敏性胃腸炎遠(yuǎn)沒(méi)有引起足夠重視。筆者經(jīng)過(guò)多年對(duì)浦東地區(qū)寵物診所臨床病例回顧性調(diào)查，并結(jié)合文獻(xiàn)檢索分析發(fā)現(xiàn)，臨床上犬的胃腸炎很多，但診斷為過(guò)敏性的胃腸炎很少，很多臨床胃腸炎都沒(méi)有取得良好的治療效果。社會(huì)的發(fā)展，特別是城市化進(jìn)程加快，人類(lèi)與寵物的生活環(huán)境甚至飲食結(jié)構(gòu)都出現(xiàn)了趨同化，使得人們有理由相信，與人類(lèi)一樣，犬過(guò)敏性胃腸炎也應(yīng)該是危害嚴(yán)重的疾病。過(guò)敏性胃腸炎缺乏癥狀特異性，在臨床上尚未明確地提出診斷標(biāo)準(zhǔn)，目前主要根據(jù)患者胃腸道癥狀，同時(shí)結(jié)合食物過(guò)敏病史及癥狀，食物回避和激發(fā)試驗(yàn)來(lái)診斷。因此，對(duì)犬過(guò)敏性胃腸炎進(jìn)行系統(tǒng)研究，調(diào)查分析其發(fā)病原因，檢測(cè)發(fā)病犬血清IgE，對(duì)過(guò)敏性胃腸炎的明確診斷和治療具有重要意義。

1 材料

1.1 樣品來(lái)源

樣品為2019~2020年度于上海浦東多家寵物診所采集的有胃腸炎癥狀的犬的血清樣品40份，于-20℃保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

犬（Canine）免疫球蛋白E（IgE）檢測(cè)ELISA檢測(cè)試劑盒（購(gòu)自上海少辛生物有限公司）、酶標(biāo)儀（Thermo Scientific）、離心機(jī)（Thermo Scientific）

2 實(shí)驗(yàn)方法

按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，檢測(cè)樣品中IgE含量。操作步驟如下：

2.1 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條。

2.2 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。

2.3 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

2.4 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

2.5 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

2.6 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

2.7 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。結(jié)果判斷繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)，按曲線(xiàn)方程計(jì)算各樣本濃度值。

3 結(jié)果

40例疑似過(guò)敏性胃腸炎犬的臨床表現(xiàn)主要為腹瀉、嘔吐、便血、局部皮膚疹塊等，根據(jù)初步臨床診斷判斷的誘因及針對(duì)性初步采取處理措施后，大多數(shù)的癥狀都有改善和緩解，因此診斷為過(guò)敏性胃腸炎。血清IgE濃度檢測(cè)結(jié)果分顯示，40例疑似過(guò)敏胃腸炎樣品中，IgE濃度顯著增加2例，升高33例,IgE過(guò)敏原檢測(cè)分級(jí)評(píng)估（表1），具體的結(jié)果分析（表2），IgE分布情況顯示（圖1），出現(xiàn)過(guò)敏性胃腸炎的犬只，82.5%（33/40）的IgE檢測(cè)值評(píng)估為高。

圖1 IgE檢測(cè)值分布圖

表1 IgE過(guò)敏原檢測(cè)分級(jí)評(píng)估

表2 疑似犬過(guò)敏性胃腸炎臨床樣品檢測(cè)結(jié)果

4 討論

食物過(guò)敏是過(guò)敏性胃腸炎的首要原因，已成為一個(gè)日益嚴(yán)重的問(wèn)題。因?qū)δ承┦澄锎嬖诟呙魻顟B(tài)，包括人在內(nèi)的動(dòng)物易出現(xiàn)過(guò)敏性胃腸病，幼齡動(dòng)物最常見(jiàn)，全球估計(jì)有6%～8%的幼齡動(dòng)物受到食物過(guò)敏的影響。常見(jiàn)的食物變態(tài)反應(yīng)原除了乳蛋白外，還有小麥、雞蛋、黃豆和花生，隨著年齡的增長(zhǎng)，對(duì)有些食物的過(guò)敏可逐漸消失。藥物過(guò)敏也是一個(gè)常見(jiàn)因素。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，一內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素(青霉素、頭孢菌素)、氨基糖甙類(lèi)、磺胺、解熱止痛(水楊酸類(lèi))藥均可導(dǎo)致人的急性過(guò)敏性胃腸炎。

過(guò)敏性疾病可以同時(shí)發(fā)生在不同的部位，雖然有著不同的臨床表現(xiàn)，但它們同根共源，都是因?yàn)樽儜B(tài)反應(yīng)引起。過(guò)敏原是過(guò)敏性疾病的誘發(fā)因素.因此，詳細(xì)詢(xún)問(wèn)寵物近期攝入的食（藥）物，且改變食（藥）物后癥狀是否緩解非常重要。雖然遺傳因素是過(guò)敏性疾病發(fā)生的內(nèi)在因素，但環(huán)境因素可能直接觸發(fā)疾病的發(fā)生，所以遠(yuǎn)離過(guò)敏原和環(huán)境因素同樣至關(guān)重要。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，過(guò)敏主要是由免疫機(jī)制介導(dǎo)的某種食物或藥物等引起腸道內(nèi)或全身的變態(tài)反應(yīng)，大多是由免疫球蛋E（IgE）介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。人類(lèi)嬰幼兒過(guò)敏性胃腸炎患兒均有不同程度的高蛋白食物接觸史，根據(jù)臨床表現(xiàn)的不同，目前尚無(wú)特異性診斷方法，所以容易導(dǎo)致病情遷延，出現(xiàn)誤診或漏診，影響嬰幼兒的生長(zhǎng)發(fā)育和健康。

目前，過(guò)敏性胃腸炎的的診斷主要依靠：（1）首先是疑似臨床癥狀和病史。過(guò)敏性疾病患者均為特應(yīng)性體質(zhì)，遺傳因素是過(guò)敏性疾病的內(nèi)在因素。因此，詳細(xì)詢(xún)問(wèn)個(gè)人和父母的過(guò)敏史均很重要。本文40例疑似過(guò)敏性胃腸炎犬的臨床表現(xiàn)主要為腹瀉（34例）、便血（14例）、嘔吐（18例）、局部皮膚疹塊（4例）、尿血（1例）這都符合過(guò)敏性疾病的臨床癥狀指標(biāo)。（2）血清IgE抗體，血清特異性IgE抗體測(cè)定，目前國(guó)內(nèi)人醫(yī)應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)方法，當(dāng)IgE>0.35 U／mL時(shí)，可認(rèn)為結(jié)果陽(yáng)性，此法可檢測(cè)數(shù)百種食物過(guò)敏原，有較高的敏感性和特異性。本研究對(duì)采自浦東新區(qū)部分寵物診所的臨床疑似樣品進(jìn)行檢測(cè)，血清IgE濃度檢測(cè)結(jié)果分析顯示，40例疑似過(guò)敏胃腸炎樣品中，IgE濃度升高且達(dá)到3級(jí)以上的為34例,占85%；（3）食物回避試驗(yàn)，首先告知病人記錄基本癥狀和食譜2周，如果飲食回避2周后癥狀改善，這是診斷食物過(guò)敏的金標(biāo)準(zhǔn)。從本文表1中所列可以看出，根據(jù)癥狀懷疑誘因（攝入食物和藥物）后，終止這些誘因后，過(guò)敏癥狀都得到不同程度的緩解；（4）病理組織學(xué)診斷：查外周酸性粒細(xì)胞。外周血、腸粘膜活檢以及腹水等作為樣品。人類(lèi)過(guò)敏性胃腸炎的的組織學(xué)診斷已經(jīng)很完善，無(wú)疑也是寵物診斷過(guò)敏性胃腸炎的一個(gè)發(fā)展趨勢(shì)，這有待于今后進(jìn)行進(jìn)一步的數(shù)據(jù)積累，形成標(biāo)準(zhǔn)。

本文主要從癥狀觀察、過(guò)敏原追蹤及回避以及血清IgE檢測(cè)三個(gè)方面對(duì)采自浦東新區(qū)幾個(gè)寵物診所的臨床疑似樣品進(jìn)行了檢測(cè)，通過(guò)確定臨床癥狀、過(guò)敏原及免疫學(xué)檢測(cè)指標(biāo)，綜合進(jìn)行分析，明確了IgE檢測(cè)在犬過(guò)敏性胃腸炎診斷中具有重要價(jià)值，為建立準(zhǔn)確可靠的犬、貓過(guò)敏性胃腸炎診斷技術(shù)積累數(shù)據(jù)，進(jìn)一步通過(guò)構(gòu)建完整系統(tǒng)的疾病流行病學(xué)資料，為寵物診所制定過(guò)敏性胃腸炎診斷、防治規(guī)程及推廣應(yīng)用，研制科學(xué)有效的防治技術(shù)提供理論依據(jù)。