益腎消結(jié)方對阿霉素腎病綜合征大鼠的藥效學(xué)研究

文皚巍 歐源術(shù) 鄧延莉

【摘要】目的：討論益腎消結(jié)方對阿霉素腎病綜合征大鼠的尿蛋白、血清白蛋白、血? 脂、血肌酐等藥效學(xué)指標的影響。方法：將 60 只雄性 SD 大鼠隨機分為激素組、激素加卡托普利組、中藥加激素加卡托普利、模型組、空白對照組。除空白對照組外，其余各組建立阿霉素腎病綜合征模型。各組大鼠于造模后 29 天起開始灌胃對應(yīng)藥物，連續(xù) 4 周。計算各組單位體重 24 小時尿蛋白排出量。測定治療結(jié)束后各組大鼠血清總蛋白、血清白蛋白、尿素氮、血清肌酐、總膽固醇等指標。結(jié)果：治療結(jié)束后中藥加激素加卡托普利組單位體重 24 小時尿蛋白排出量、血清總蛋白、血清白蛋白、總膽固醇均顯著優(yōu)于其余各組。結(jié)論：益腎消結(jié)方能有效控制蛋白尿及低蛋白血癥，調(diào)節(jié)脂代謝紊亂，改善腎病綜合征預(yù)后。

【關(guān)鍵詞】腎病綜合征;益腎消結(jié)方;尿蛋白;血清白蛋白;血脂

【中圖分類號】R285.5 【文獻標識碼】A 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.11.002

腎病綜合征（nephrotic syndrome，NS）是腎小球疾病中最常見的一組臨床表現(xiàn)綜合征癥候群，以大量蛋白尿、低蛋白血癥、高度水腫、高脂血癥為表現(xiàn)，以腎小球基膜通透性增加為特征，蛋白尿是其最基本病理生理機制。目前治療以激素或激素聯(lián)合免疫抑制劑為主，不良反應(yīng)較大。尋求清除蛋白尿，并有保護腎功能作用的中醫(yī)藥療法，成為了國內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的熱點。加強中西醫(yī)結(jié)合防治腎病綜合征的研究，具有十分重要的意義。

益腎消結(jié)方由三棱、莪術(shù)、白芥子、瓦楞子、王不留行、水蛭組成，該藥作為四川省第二中醫(yī)醫(yī)院腎病科科室協(xié)定處方，治療腎病綜合征已有30 年時間，臨床累計使用上萬病例數(shù)。本研究采用尾靜脈注射阿霉素建模方法建立阿霉素腎病模型，觀察益腎消結(jié)方對阿霉素腎病大鼠尿蛋白、血清白蛋白、血脂、血肌酐等藥效學(xué)指標的影響。

1? 實驗材料

1.1 實驗動物及環(huán)境條件

雄性 SD 大鼠，體重 200g-240g，SPF 級合格動物。室內(nèi)通過自動空調(diào)控制室溫在 20～ 24℃，相對濕度控制在 40～70%，分籠飼養(yǎng)，自由飲水，常規(guī)全價飼料，定時定量喂養(yǎng)。

1.2實驗藥物

益腎消結(jié)方（三棱、莪術(shù)、王不留行、白芥子、瓦楞子、水蛭，方中各種藥物等量）， 中藥均由四川新綠色藥業(yè)提供，將中藥方劑制成免煎劑備用。醋酸潑尼松片，規(guī)格：5mg; 卡托普利片，規(guī)格：25mg;造模藥物：鹽酸多柔比星（阿霉素）。

1.3 實驗試劑及儀器

總蛋白定量測試盒（BCA 法）;白蛋白測試盒;高密度脂蛋白膽固醇（HDL）試劑盒;低密度脂蛋白膽固醇（LDL）試劑盒;總膽固醇（TC）試劑盒;甘油三酯（TG）試劑盒;肌酐（Crea）試劑盒;尿素（Urea）試劑盒。日立 7020 型全自動生化分析儀，Varioskan Flash全波長掃描式多功能讀數(shù)儀。

2? 實驗方法

2.1 造模、分組

取體重 200g～240g 的雄性 SD 大鼠 60 只放入清潔代謝籠中，收集 24h 尿液，檢測尿蛋白含量和 24h 尿蛋白排出量，所得測量值即為每只大鼠造模前尿蛋白排出量。一次性尾靜脈注射劑量為 6.5mg/kg 劑量的阿霉素，造模 28 天后用代謝籠接取 24h 尿液測定尿蛋白，每100g 體重 24h 尿蛋白排出量超過造模前測量值 1.5 倍即認為腎病模型成立。選取造模成功大鼠隨機分為 A、B、C、D 四組，即激素組、激素+卡托普利組、激素+卡托普利+中藥組、模型對照組。另外取 12 只正常大鼠作為正常對照組。

2.2給藥方法

按上述方法造模成功后，各給藥組大鼠于造模 29 天起開始灌胃（ig），按 70kg 成年人每日給藥量，通過《藥理實驗方法學(xué)》附錄四“人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值” 計算得到大鼠每日藥物灌胃量。其中 A 組灌胃強的松 10mg/kg，B 組灌胃強的松 10mg/kg 及卡托普利片 20mg/kg，C 組灌胃強的松 10mg/kg、卡托普利片 20mg/kg 及益腎散結(jié)方免煎顆粒 8.1g/kg（等效于成年人益腎消結(jié)方每種藥物給藥 15g，成方合計 90g），D 組 ig 蒸餾水10ml/kg，每組連續(xù)灌胃 4 周。正常對照組 ig 給予給藥組等體積蒸餾水。

2.3觀察指標

于治療后第 4 周，收集 24h 尿液，測定 24h尿量及尿蛋白濃度，計算 24h 尿蛋白定量（mg/24h）及 100g 單位體重 24h 尿蛋白定量（mg/100g）。通過腹主動脈取血，檢測血清總蛋白（TP）、血清白蛋白（Alb）、尿素氮（BUN）、血清肌酐（Cr）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL）。

2.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計

所有數(shù)據(jù)均用x±s表示，采用 SPSS 11.0 統(tǒng)計軟件進行組間單因素方差分析，各組均數(shù)間的兩兩比較采用 LSD-t 檢驗，P<0.05 具有顯著性差異。

3? 結(jié)果

3.1對各組大鼠體重的影響

個別動物在給藥期間死亡。各組動物體重增長情況見表 1。

3.2 對各組大鼠尿蛋白排出量的影響

各給藥組給藥 4 周后，尿蛋白排出量均較模型組有一定減少，C 組與模型組比較有顯著性差異（P<0.01），C 組尿蛋白排出量較大幅度低于B 組，提示益腎消結(jié)方對腎病綜合征模型大鼠有一定改善作用。尿蛋白排出量情況見表 2。

3.3 對各組大鼠血清蛋白指標、腎功指標、血脂指標的影響

給藥期結(jié)束，發(fā)現(xiàn)模型組動物血清總蛋白（TP）和白蛋白（Alb）較對照組均有不同程度下降，血清白蛋白下降更明顯（P<0.05）。各給藥組給藥后與模型組比較血清 TP、Alb 值均有增長，TC 值均有下降，C 組血清 TP、Alb、TC 值與模型組比較有顯著性差異（P<0.05）。各組動物血清蛋白指標、腎功指標、血脂指標情況見表 3。

4? 討論

腎病綜合征屬中醫(yī)“水腫”范疇，病位在肺脾腎三臟。其病機虛實錯雜，多致本虛標實。每當腎病反復(fù)發(fā)作，濕熱內(nèi)停日久不化，凝聚成痰。治療過程中反復(fù)使用激素和利尿劑，激素為“壯陽之品”，內(nèi)熱灼液，利尿傷陰，陰液稠積成痰瘀，形成了腎病綜合征的難治性、復(fù)雜性[1]。痰瘀一方面作為病理產(chǎn)物貫穿疾病始終，另一方面也可以是致病因素， 加重病勢，是阻礙病情轉(zhuǎn)歸的重要因素，該病雖為本虛標實、虛實夾雜，然痰瘀為可化之物，正如張景岳所謂： “但化得其正，則形體強，營衛(wèi)充; 若化失其正，則臟腑病” [2]。

益腎消結(jié)方由三棱、莪術(shù)、白芥子、瓦楞子、王不留行、水蛭組成。其中水蛭破血通經(jīng)為君藥，三棱、莪術(shù)破血逐瘀，行氣散結(jié)，為臣藥;白芥子散結(jié)通絡(luò)，瓦楞子消痰化瘀為佐藥，王不留行活血行氣消腫為使藥，組方中佐以“溫藥及行氣之品”，體現(xiàn)出“陰邪者得溫則散” 之理，痰瘀皆屬陰邪之致病因素，得溫則氣血行。全方共奏消痰軟堅，破血逐瘀，行氣散結(jié)之功效。君藥水蛭型平，味苦、咸，有小毒，經(jīng)炮制后入藥，歸肝經(jīng)，能破血通經(jīng)，逐瘀消癥，兼利水道。水蛭可能通過降低 PI3K/Akt/mTORmRNA 的表達，抑制各種炎性細胞因子的表達，減輕腎小球系膜細胞的增生，增加腎小球系膜細胞調(diào)亡，進而減輕腎臟纖維化[3]。臣藥莪術(shù)性辛、苦、溫，歸肝、脾經(jīng)，具有行氣破血，消積止痛之功。莪術(shù)醇能夠抑制細胞外基質(zhì)中膠原的分泌，抑制血管內(nèi)皮生長因子基因表達，能通過抑制 IRE1 磷酸化介導(dǎo)下游TRAF2 蛋白表達，干預(yù) IRE1-XBP1 信號通路活化，阻止腎小管上皮細胞凋亡，減緩腎間質(zhì)纖維化[4]。三棱性辛、苦、平，歸肝、脾經(jīng)，具有破血行氣，消積止痛之功。研究顯示三棱可抑制腎囊腫上皮細胞的增殖，從而延緩多囊腎病的發(fā)生與發(fā)展[5]。由“三棱、莪術(shù)”等藥物組成的“安腎膠囊”，能有效降低膜性腎病大鼠蛋白尿，減輕血尿，改善基底膜損傷程度[6]。

該實驗顯示，在三組治療組中，相比于純西藥治療，中西醫(yī)結(jié)合治療后大鼠 24 小時尿蛋白定量、單位體重尿蛋白定量、血總蛋白、白蛋白、膽固醇改善幅度均更為明顯。這顯示了益腎消結(jié)方治療腎病綜合征的有效性，在改善蛋白尿及低蛋白血癥、調(diào)節(jié)脂代謝紊亂均有很大的潛力。為進一步開展益腎消結(jié)方治療腎病綜合征腎組織病理學(xué)研究，以及其作用靶點、信號通路、代謝消除等機制研究打下了基礎(chǔ)。對探討中西醫(yī)結(jié)合治療腎病綜合征的機制具有重要的意義。

參考文獻：

[1]魏連波.腎病綜合征高凝狀態(tài)形成機制與中醫(yī)治療[J].中華腎病研究電子雜志志，2017，6（4）： 169-172.

[2]甘洪橋，吳巍.吳康衡教授從痰瘀論治腎性水腫經(jīng)驗[J].四川中醫(yī)，2016，34（6）：1-3.

[3]曹響，謝麗萍，趙潔，江志雄，徐霜霜.基于 PI3K/Akt/mTOR 通路探討水蛭對IgA 腎病的作用機制[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2020，16（02）：181-184.

[4]張翠，張思琪，王丹楓，張騰嬌，孫博.莪術(shù)醇對梗阻性腎病大鼠 IRE1 調(diào)控 TRAF2、XBP1 抑制細胞凋亡的影響[J].中國藥學(xué)雜志，2018，53（18）：1557-1563.

[5]柳紅芳，張向偉，胡濟源， 等.中醫(yī)分期辨治多發(fā)性腎囊腫經(jīng)驗[J].環(huán)球中醫(yī)藥，2018，11（3）：395-397.

[6]王先鋒，許勇強，李陳雪， 等.中醫(yī)藥治療腎病綜合征的研究進展[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報，2018，24（11）： 100-103，116.

基金項目：

四川省科技廳科研院所基本科研項目（編號：2019-4-537）。

*通訊作者：歐源術(shù)，四川省第二中醫(yī)醫(yī)院。