廣州市環(huán)境禽流感病毒污染與職業(yè)暴露人群感染情況分析

陳昌明 陸劍云 劉艷慧 馬鈺 李魁彪

【摘要】目的：分析廣州市環(huán)境禽流感病毒污染與職業(yè)暴露人員感染情況。方法：于2019年3月-2020年12月，將廣州市內(nèi)中心城區(qū)、城鄉(xiāng)城區(qū)作為本次研究社區(qū)，并選擇經(jīng)常前往肉菜市場(chǎng)、幾乎不去肉菜市場(chǎng)的人群作為納入人群，以熒光定量RT-PCR檢測(cè)800份外環(huán)境標(biāo)本的A型流感病毒核酸，并進(jìn)行H5、H7、H9亞型的檢測(cè);以血凝抑制試驗(yàn)法，對(duì)其120名暴露人群血清中的H5N6、H7N9、H9N2血凝素抗體進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：800份標(biāo)本中，A型陽性共68份，占比8.50%，H5陽性檢出率為0.50%、H7陽性檢出率為1.50%、H9陽性檢出率為4.38%、H5/H7陽性檢出率為0.13%、H9/H7陽性檢出率為0.38%。120名職業(yè)暴露人員中，未檢出H5N6、H7N9抗體陽性，共檢出H9N2抗體陽性標(biāo)本4分，陽性率為3.33%;共33份被檢出抗體，但不足以將其判定為陽性。結(jié)論：廣州市環(huán)境中具有H5、H7、H9亞型病毒污染情況，并且有部分職業(yè)暴露人員也具有感染病毒的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)加強(qiáng)預(yù)防與禽流感病毒監(jiān)測(cè)工作，避免疫情的發(fā)生。

【關(guān)鍵詞】禽流感病毒;職業(yè)暴露人群;血清

【中圖分類號(hào)】R511.7 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.13.220

禽流感主要是由A型流感病毒所引起的一種禽類傳染病，若出現(xiàn)高致病性的禽流感，則會(huì)導(dǎo)致大量禽類死亡，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)帶來極大的危害[1-2]。此外，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，若病毒在野生鳥類、野生鳥類與家禽間進(jìn)行傳播期間，極易導(dǎo)致出現(xiàn)病毒基因重組的情況，從而獲得感染人體的能力，出現(xiàn)人感染禽流感疾病的現(xiàn)象，對(duì)相關(guān)職業(yè)暴露人群的身體健康與生命安全造成極大威脅[3-4]。因此，及時(shí)對(duì)此種環(huán)境相關(guān)問題進(jìn)行分析，以掌握禽流感污染情況、職業(yè)暴露人員的感染情況，為下一步制定防范及相關(guān)處理措施提供依據(jù)，具有顯著的研究意義?；诖?，本文作者于廣州市中心城區(qū)、城鄉(xiāng)城區(qū)相關(guān)人群中，隨機(jī)抽取800份樣本及120名職業(yè)暴露人員，展開以下分析。

1 材料與方法

1.1樣本采集

（1）于2019年3月-2020年12月，將廣州市內(nèi)中心城區(qū)、城鄉(xiāng)城區(qū)的各2個(gè)社區(qū)作為本次研究社區(qū)，并選擇經(jīng)常前往肉菜市場(chǎng)（暴露組）、幾乎不去肉菜市場(chǎng)的人群（非暴露組）作為納入人群。由本院開展流調(diào)并采集其咽拭子標(biāo)本、血清標(biāo)本。所選擇的納入人群需每半年、進(jìn)行一次血清標(biāo)本的采集。咽拭子標(biāo)本共800份;職業(yè)暴露人群共120名，其中男性75名、女性45名，年齡40-56歲，平均（48.00±2.12）歲。

社區(qū)納入標(biāo)準(zhǔn)：人口相對(duì)比較穩(wěn)定、流動(dòng)人口比例比較低;社區(qū)內(nèi)只有一個(gè)肉菜市場(chǎng)、且市場(chǎng)內(nèi)有活禽交易;社區(qū)內(nèi)醫(yī)療機(jī)構(gòu)具有完善的診療體系，可進(jìn)行相關(guān)咽拭子、血清標(biāo)本的采集;社區(qū)內(nèi)可招募滿足研究設(shè)計(jì)的人群隊(duì)列;所納入人群均知情此研究且簽署同意書。

（2）標(biāo)本采樣方法：采樣點(diǎn)距離地面1.5m，于每個(gè)采樣點(diǎn)，采樣虛擬濃縮器、Biosampler液體沖擊式采樣器聯(lián)合的方式，對(duì)流感病毒氣溶膠樣品進(jìn)行采集，虛擬濃縮器主流量保持在每小時(shí)8升，將虛擬濃縮器與Biosampler采樣器進(jìn)行連接，持續(xù)采樣45分鐘，于Biosampler采樣瓶內(nèi)，放置20ml的采樣吸收液，采樣后將其放置于4℃的環(huán)境中進(jìn)行保存，采樣結(jié)束后，保證4小時(shí)之內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，行離心濃縮富集至1ml，以待檢測(cè)。

（3）外環(huán)境檢測(cè)：若同一種類貨源相同的禽類選擇3只。環(huán)境中涂抹拭主要按照籠具、飲水槽、飼料槽、糞便、地面、污水、宰殺工具、脫毛機(jī)、污物桶等部位進(jìn)行采集;標(biāo)本采集后進(jìn)行流感A型通用引物核酸檢測(cè)，并進(jìn)行H5、H7、H9的分型。標(biāo)本收集時(shí)，應(yīng)同時(shí)記錄活禽市場(chǎng)、檔口的基本情況、消殺記錄、進(jìn)發(fā)貨記錄、每天氣溫、氣壓、濕度等情況。將所采集的咽拭子、環(huán)境涂抹拭子等，應(yīng)用病毒保存液進(jìn)行保存，放置于溫度為0-4℃的環(huán)境下，送檢。采集的人群血清標(biāo)本進(jìn)行離心處理，選取血清保存，以待檢測(cè)。

1.2血凝抑制試驗(yàn)

采集血液樣本，以10000r/min、8cm的離心半徑進(jìn)行離心處理，持續(xù)2分鐘，選擇上層血清，進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)（HI）。對(duì)于A型禽流感病毒陽性標(biāo)本，再進(jìn)行H5、H7、H9亞型分析。

結(jié)果判定：人血清對(duì)H5N6抗原、H7N9抗原、H9N2抗原的抑制效價(jià)≥1：80，為陽性;介于20-80之間不足以診斷為陽性[5-6]。

1.3熒光定量PT-PCR檢測(cè)

將所采集的外環(huán)境標(biāo)本凍融后，放置于振蕩器進(jìn)行充分震蕩，按照說明書操作步驟，對(duì)其進(jìn)行核酸RNA的提取，應(yīng)用熒光定量RT-PCR方法，進(jìn)行病毒的核酸檢測(cè)。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS22.0分析數(shù)據(jù)，以[n（%）]表示定性資料，以（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示定量資料，P<0.05表示數(shù)據(jù)差異顯著。

2 結(jié)果

2.1血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

800份標(biāo)本中，A型陽性共68份，占比8.50%，H5陽性檢出率為0.50%、H7陽性檢出率為1.50%、H9陽性檢出率為4.38%、H5/H7陽性檢出率為0.13%、H9/H7陽性檢出率為0.38%。詳見表1：

2.2禽流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果

120名職業(yè)暴露人員中，未檢出H5N6、H7N9抗體陽性，共檢出H9N2抗體陽性標(biāo)本4分，陽性率為3.33%;共33份被檢出抗體，但不足以將其判定為陽性。詳見表2：

3 討論

種屬屏障的存在，禽流感多不會(huì)出現(xiàn)感染人的情況，但并不完全排除人感染禽流感，目前，臨床上已發(fā)現(xiàn)有人類感染H5N1、H7N7、H9N2等多個(gè)亞型禽流感病毒，引起了廣泛的關(guān)注[7-8]。相關(guān)報(bào)道提出，H7N9為一種新型的禽流感，其病毒基因主要來自于野鳥、雞群的基因重配，針對(duì)此種情況，及時(shí)對(duì)其禽流感病毒外環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測(cè)具有必要性，可了解相應(yīng)環(huán)境中病毒分布情況，并有效的掌握病毒來源、病毒傳播途徑等，從而可采取有效措施防控禽流感疫情[9-10]。市場(chǎng)外環(huán)境監(jiān)測(cè)是一項(xiàng)重要的評(píng)估手段，可有效降低人感染禽流感的風(fēng)險(xiǎn)，此系統(tǒng)主要覆蓋農(nóng)業(yè)系統(tǒng)、林業(yè)系統(tǒng)、衛(wèi)生系統(tǒng)等，其實(shí)施的具體內(nèi)容則主要包括設(shè)計(jì)、采樣、監(jiān)測(cè)、數(shù)據(jù)分析等較多個(gè)環(huán)節(jié)，對(duì)于評(píng)估禽流感病毒污染情況具有顯著價(jià)值[11-12]。本文研究發(fā)現(xiàn)，800份標(biāo)本中，A型陽性共68份，占比8.50%，H5陽性檢出率為0.50%、H7陽性檢出率為1.50%、H9陽性檢出率為4.38%、H5/H7陽性檢出率為0.13%、H9/H7陽性檢出率為0.38%。數(shù)據(jù)可表明城鄉(xiāng)社區(qū)活禽市場(chǎng)A型的流感病毒中，以H7、H9最為常見，較其他類型場(chǎng)所明顯較高;這可能是由于城鄉(xiāng)活禽市場(chǎng)中，具有較為特殊的環(huán)境，對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測(cè)過程中，市場(chǎng)環(huán)境中存在來源不同的活禽混合存放、對(duì)于活禽交易區(qū)的環(huán)境清洗、消毒不徹底、活禽存籠發(fā)生過夜等情況，此類情況極易導(dǎo)致出現(xiàn)禽流感病毒污染的情況[13-14]。此外，多項(xiàng)研究表明，活禽市場(chǎng)的暴露極易導(dǎo)致人感染H7N9禽流感[15]。本文研究數(shù)據(jù)顯示，120名職業(yè)暴露人員中，未檢出H5N6、H7N9抗體陽性，共檢出H9N2抗體陽性標(biāo)本4分，陽性率為3.33%;共33份被檢出抗體，但不足以將其判定為陽性。數(shù)據(jù)可進(jìn)一步證實(shí)，職業(yè)暴露人群感染H7N9禽流感的風(fēng)險(xiǎn)較高，根據(jù)此結(jié)果可見，應(yīng)加強(qiáng)城鄉(xiāng)社區(qū)活禽市場(chǎng)的相關(guān)管理工作，并提供職業(yè)暴露人群的個(gè)人防護(hù)意識(shí)，增強(qiáng)健康意識(shí)，以預(yù)防出現(xiàn)感染禽流感病毒的情況。

綜上所述，廣州市環(huán)境中具有H5、H7、H9亞型病毒污染情況，并且有部分職業(yè)暴露人員也具有感染病毒的風(fēng)險(xiǎn)，其中感染H7N9的風(fēng)險(xiǎn)最大，應(yīng)加強(qiáng)預(yù)防與禽流感病毒監(jiān)測(cè)工作，提升職業(yè)暴露人群的防護(hù)意識(shí)，避免疫情的發(fā)生。

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基金項(xiàng)目：廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目——基于空氣中禽流感病毒載量動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)的社區(qū)人群感染隊(duì)列研究（編號(hào)：201707010451）

*通訊作者：劉艷慧，廣州市白云區(qū)疾病預(yù)防控制中心。