一種改善廣西百色地區(qū)煙葉品質(zhì)的混合微生物發(fā)酵技術(shù)

龍章德，蘇贊，李季剛，薛云，劉啟斌，寧振興，毛多斌，魏濤

1.廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司 技術(shù)中心，廣西 南寧 530001；2.鄭州輕工業(yè)大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院，河南 鄭州 450001

0 引言

廣西百色地區(qū)具有土壤礦質(zhì)營養(yǎng)含量高、日照充足、全年無霜期等煙草種植優(yōu)勢，是廣西煙草最適宜的種植區(qū)之一，近年來也成為廣西最大的烤煙種植區(qū)，但是廣西百色B3F煙葉因香氣量不足、雜氣重、感官品質(zhì)差等特點(diǎn)限制了其在卷煙配方中的應(yīng)用.

目前，利用微生物處理低等次煙葉以提高其感官品質(zhì)，已成為改善煙葉品質(zhì)的一種重要方式. 如C.F.English等[1]從煙葉表面分離得到芽孢桿菌屬的嗜熱芽孢桿菌屬，純培養(yǎng)或混合培養(yǎng)后接種煙葉，抽吸時(shí)可以產(chǎn)生令人愉悅的香氣；黃曉春[2]分離得到降堿增香的菌株，研究表明，經(jīng)過菌劑處理的煙葉，其香氣質(zhì)和香氣量都得到提升，煙堿含量降低，煙葉品質(zhì)得到改善，可用性得以提高；趙銘欽[3]在煙葉表面篩選出巨大芽孢桿菌BCK，對其進(jìn)行誘變處理得到對淀粉和蛋白質(zhì)降解活性較高的菌株B8，利用該菌株發(fā)酵煙葉后，苯甲醛、苯乙醛、苯乙醇、茄酮、β-大馬酮、巨豆三烯酮的3種異構(gòu)體、西柏三烯-4-醇等的含量增加明顯；庹有朋等[4]在發(fā)酵了1～2 a的煙葉上篩選出22株優(yōu)勢菌株，經(jīng)7個(gè)月煙葉發(fā)酵，達(dá)到了現(xiàn)有技術(shù)發(fā)酵3 a的效果，增香提質(zhì)作用明顯.

近年來，研究人員還發(fā)現(xiàn)，利用混合菌種發(fā)酵煙葉的品質(zhì)明顯強(qiáng)于單一菌種發(fā)酵. 混合微生物處理技術(shù)能有效降解煙葉中淀粉、蛋白質(zhì)、木質(zhì)素、果膠等大分子物質(zhì)，從而明顯改善煙葉品質(zhì)[5-8]. J.C.Dai等[9]從烤煙煙葉上篩選到嗜熱枯草芽孢桿菌ZIM3和工程菌株ZIM1，煙葉經(jīng)發(fā)酵后，淀粉和纖維素的生物降解效率提高了30%～48%，整體感官品質(zhì)得到提升；鞏效偉等[10]分別用產(chǎn)香微生物CXJ-3枯草芽孢桿菌、CXJ-7西姆芽孢桿菌和CXJ-12短小芽孢桿菌及其復(fù)合菌劑處理梗絲，發(fā)現(xiàn)，處理后梗絲的總糖、還原糖和揮發(fā)性香氣成分含量均顯著提升，其中以復(fù)合菌劑處理效果最好. 帥瑤[11]使用解淀粉芽孢桿菌GUHP86與GZU03復(fù)配菌種對大理紅大CL314煙葉進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)現(xiàn)芳樟醇、β-大馬酮、β-紫羅蘭酮等香味物質(zhì)的相對含量增加，且復(fù)合菌發(fā)酵比單菌發(fā)酵和自然發(fā)酵對煙葉品質(zhì)提升作用更明顯.

本實(shí)驗(yàn)室前期已經(jīng)建立成熟的釀酒酵母發(fā)酵煙葉技術(shù)，并分離得到一株嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌，該菌可以將煙葉中2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇類物質(zhì)轉(zhuǎn)化為香味物質(zhì)，進(jìn)而有效改善煙葉品質(zhì)[12-14]. 在前期實(shí)驗(yàn)中，采用釀酒酵母和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌分別發(fā)酵廣西百色B3F煙葉，煙葉品質(zhì)雖有一定改善但是效果并不明顯. 鑒于此，本文擬利用釀酒酵母和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌對廣西百色B3F煙葉進(jìn)行混合微生物發(fā)酵處理，確定嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的最佳發(fā)酵條件；分析混合微生物發(fā)酵前后煙葉常規(guī)化學(xué)成分、致香成分的變化，并研究發(fā)酵后煙葉感官評吸品質(zhì)的提升效果，以期提高百色B3F煙葉的利用率.

1 材料與方法

1.1 材料

煙葉：廣西百色B3F煙葉(廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心提供)，將煙葉粉碎后過40 mm的分樣篩，制成實(shí)驗(yàn)樣品備用.

菌株：釀酒酵母SaccharomycescerevisiaeULI3[12]，嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌Stenotrophomonasmaltophilia(中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心提供，其保藏編號為CGMCC No：13905).[13]

1.2 主要儀器與設(shè)備

主要儀器設(shè)備：SW-CJ-IF型單人雙面凈化工作臺，蘇州凈化設(shè)備有限公司產(chǎn)；LDZX-50KBS型立體壓力蒸汽滅菌器，上海申安醫(yī)療器械廠產(chǎn)；同時(shí)蒸餾萃取裝置，鄭州科技玻璃儀器廠產(chǎn)；DLSB-1020低溫冷卻循環(huán)泵，鄭州國瑞儀器有限公司產(chǎn)；DHP-9162恒溫培養(yǎng)箱，太倉市科教器材廠產(chǎn)；7890C GC-MS色譜聯(lián)用儀，美國Agilent公司產(chǎn).

1.3 培養(yǎng)基配制

釀酒酵母培養(yǎng)基(M1)[12,14]：K2HPO41 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，KCl 0.5 g/L，NaNO33 g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01 g/L，蔗糖30 g/L.

嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌培養(yǎng)基(M2)[13]：KNO31.0 g/L，KH2PO40.5 g/L，NaCl 0.5 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01 g/L，麥芽糖 1 g/L.

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 菌株培養(yǎng)從-80 ℃冰箱中取出釀酒酵母，轉(zhuǎn)接固體培養(yǎng)基(M1培養(yǎng)基，另加入20 g/L瓊脂)，在28 ℃培養(yǎng)箱里培養(yǎng)24 h. 挑選較大的菌落，接入30 mL的M1液體培養(yǎng)基中，在28 ℃、180 r/min條件下培養(yǎng)24 h，獲得種子液. 以體積分?jǐn)?shù)為2%的接種量接種于300 mL M1液體培養(yǎng)基中，在相同條件下培養(yǎng)24 h. 將菌液以8000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，去除上清液，將沉淀溶于30 mL無菌水中，重復(fù)兩次，備用.

從-80 ℃冰箱中取出嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌，轉(zhuǎn)接M2固體培養(yǎng)基，在30 ℃培養(yǎng)箱里培養(yǎng)12 h. 挑選較大的菌落，接入30 mL的M2液體培養(yǎng)基中，在30 ℃、180 r/min條件下培養(yǎng)12 h，獲得種子液. 以體積分?jǐn)?shù)為2%的接種量接種于300 mL M2液體培養(yǎng)基中，在相同條件下培養(yǎng)12～16 h. 將菌液以8000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，棄上清液，將沉淀溶于30 mL無菌水中，重復(fù)兩次，備用.

1.4.2 釀酒酵母發(fā)酵預(yù)處理根據(jù)文獻(xiàn)[14]的方法對廣西百色B3F煙葉進(jìn)行發(fā)酵預(yù)處理：取10 mL釀酒酵母菌懸液，均勻噴灑在50 g廣西百色B3F煙葉上，在溫度30 ℃，濕度70%的恒溫恒濕箱中用密封袋密封培養(yǎng)48 h.

1.4.3 嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌發(fā)酵條件單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)使用嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌將經(jīng)釀酒酵母發(fā)酵預(yù)處理后的廣西百色B3F煙葉進(jìn)行進(jìn)一步發(fā)酵. 由于煙葉石油醚提取物包括揮發(fā)油、樹脂、油脂、脂肪酸、蠟質(zhì)、類脂物和色素，常常被作為衡量煙葉品質(zhì)和香氣的重要指標(biāo). 因此，本文以50 g預(yù)處理廣西百色B3F煙葉為研究對象，以石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為指標(biāo)，優(yōu)化嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的發(fā)酵條件[15].

1)接種量：分別取2 mL、4 mL、6 mL、8 mL和10 mL嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌懸液均勻噴灑在預(yù)處理煙葉上，補(bǔ)充水分至濕度為70%，在28 ℃條件下發(fā)酵24 h，發(fā)酵結(jié)束后測定石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù).

2)發(fā)酵溫度：取5 mL嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌懸液均勻噴灑在預(yù)處理廣西百色B3F煙葉上，補(bǔ)充水分至濕度70%，分別在22 ℃、24 ℃、26 ℃、28 ℃、30 ℃、32 ℃、34 ℃和36 ℃條件下發(fā)酵24 h，發(fā)酵結(jié)束后測定石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù).

3)發(fā)酵時(shí)間：取5 mL嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌懸液均勻噴灑在預(yù)處理廣西百色B3F煙葉上，補(bǔ)充水分至濕度為70%，在28 ℃條件下分別發(fā)酵12 h、24 h、36 h、48 h、60 h和72 h，發(fā)酵結(jié)束后測定石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù).

4)發(fā)酵濕度：取5 mL嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌懸液均勻噴灑在預(yù)處理廣西百色B3F煙葉上，補(bǔ)充水分至濕度分別為30%、40%、50%、60%和70%，在28 ℃條件下發(fā)酵24 h，發(fā)酵結(jié)束后測定石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù).

1.4.4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)以石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為指標(biāo)，選取發(fā)酵接種量(A)、發(fā)酵溫度(B)、發(fā)酵時(shí)間(C)、和發(fā)酵濕度(D)進(jìn)行四因素三水平正交試驗(yàn)，以確定嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌最佳發(fā)酵條件. 正交試驗(yàn)各因素水平見表1.

表1 正交試驗(yàn)各因素水平表Table 1 The Table of various factors levels of orthogonal test

1.4.5 煙葉品質(zhì)提升效果分析用嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌懸液在最佳條件下對預(yù)處理廣西百色B3F煙葉進(jìn)行發(fā)酵；用等量的無菌水，均勻噴灑在預(yù)處理廣西百色B3F煙葉上，在同樣的溫濕度下密封培養(yǎng)同樣的時(shí)間，作為對照組；以未用菌株發(fā)酵的廣西百色B3F煙葉為空白組. 對比分析發(fā)酵前后煙葉常規(guī)化學(xué)成分和致香成分的變化，研究發(fā)酵前后該煙葉感官評吸品質(zhì)的提升水平，以確定發(fā)酵后煙葉總體品質(zhì)的提升情況.

1)常規(guī)化學(xué)成分的測定.參照文獻(xiàn)[16-19]中的方法測定煙葉中總植物堿、總氮、鉀、氯的含量；參照文獻(xiàn)[20]中的方法測定煙葉中總糖、還原糖和淀粉的含量.

2)煙葉致香成分的提取.稱取30 g過40 mm分樣篩的煙末，置于1000 mL圓底燒瓶中，再加入100 g的無水硫酸鈉和400 mL純凈水，振蕩搖勻后，放入同時(shí)蒸餾萃取裝置一端的電熱套加熱，在裝置的另一邊水浴鍋中連接一個(gè)裝有100 mL二氯甲烷的250 mL圓底燒瓶，兩邊同時(shí)進(jìn)行60 ℃水浴加熱，從第一次的加熱回流開始計(jì)時(shí)，2.5 h后得到含有100 mL二氯甲烷的萃取液. 對萃取液進(jìn)行萃取分離，得到中性萃取液，在中性萃取液中加入一定量的無水硫酸鈉進(jìn)行冷藏干燥，靜置過夜后將樣品蒸餾濃縮至1 mL左右，用GC-MS進(jìn)行定量分析.

GC測試條件：HP-5 MS毛細(xì)管柱(60 m×250 μm×0.25 μm)；進(jìn)樣口溫度為240 ℃；載氣為He(純度為99.999%)，流速為1.0 mL/min；分流模式為不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量為1.0 μL. 升溫程序:設(shè)置50 ℃(4 min)后以3 ℃/min的速度升溫到70 ℃(5 min)，再以2 ℃/min的速度升溫到100 ℃(17 min )，然后以2 ℃/min的速度升溫到120 ℃(10 min)，最后以6 ℃/min的速度升溫到280 ℃.

MS測試條件：傳輸線溫度280 ℃；離子源溫度280 ℃；四級桿溫度150 ℃；電子倍增器電壓2.28 kV；電離方式為電子轟擊(EI)，電子能量70 eV；溶劑延遲10 min；全掃描檢測，掃描質(zhì)量范圍(m/z)35～500 amu.

3)煙葉感官評吸方法.邀請13位專業(yè)評吸人員，每位評吸人員在上午的同一時(shí)間段分別對單料煙進(jìn)行評吸，每次抽吸6支卷煙，對每種單料煙進(jìn)行3次評吸. 要求所有的專業(yè)評吸人員在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)完成評吸，否則評吸結(jié)果作廢. 打分時(shí)按照單料煙九分制相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[21]，從煙葉的香氣質(zhì)、香氣量、濃度、刺激性、雜氣、勁頭、余味7項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行感官評吸.

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2016對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，利用SPSS 17.0進(jìn)行顯著性差異分析.

2 結(jié)果與分析

2.1 嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌發(fā)酵條件單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 接種量接種量對石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響如圖1所示. 由圖1可知，石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)先隨著嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌接種量的增加而升高，當(dāng)接種量為6 mL時(shí)，石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到最大，之后隨著接種量的增加呈降低趨勢. 這可能是因?yàn)榻臃N量過大，菌體生長期細(xì)胞數(shù)量過多，影響了煙葉表面原有微生物的種群和代謝，造成石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的降低. 因此，選取嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌發(fā)酵適宜接種量為6 mL.

圖1 接種量對石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.1 Effect of inoculation amount on mass fraction of petroleum ether extract

2.1.2 發(fā)酵溫度發(fā)酵溫度對石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響如圖2所示. 由圖2可知，隨著發(fā)酵溫度的增加，石油醚提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)先增加，當(dāng)發(fā)酵溫度為32 ℃時(shí)，石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)最大. 隨著發(fā)酵溫度的進(jìn)一步增加，石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)開始降低，可能是溫度過高抑制了嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的生長和代謝. 因此，選取嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌適宜發(fā)酵溫度為32 ℃.

圖2 發(fā)酵溫度對石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.2 The influence of fermentation temperature on the mass fraction of petroleum ether extract

2.1.3 發(fā)酵時(shí)間發(fā)酵時(shí)間對石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響如圖3所示. 由圖3可知，在前48 h內(nèi)，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長，石油醚提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)逐漸增大，當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為48 h時(shí)，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到最大，之后隨著時(shí)間的延長，石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)緩慢降低. 因此，選取嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌適宜發(fā)酵時(shí)間為48 h.

圖3 發(fā)酵時(shí)間對石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.3 The influence of fermentation time on the mass fraction of petroleum ether extract

2.1.4 發(fā)酵濕度發(fā)酵濕度對石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響如圖4所示. 由圖4可知，隨著濕度的增加，石油醚提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈先 升高后降低的趨勢.當(dāng)發(fā)酵濕度為60%時(shí)，石油醚提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到最大，這是由于發(fā)酵濕度較低時(shí)，不能達(dá)到酶的活性和滿足嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌生長繁殖的條件，隨著濕度的增加，逐漸達(dá)到微生物生長的最佳條件；但發(fā)酵濕度過高時(shí)，煙葉易結(jié)塊，影響其散熱，有可能產(chǎn)生霉變，影響嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的生長和代謝. 因此，選取嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌適宜發(fā)酵濕度為60%.

圖4 發(fā)酵濕度對石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.4 The influence of fermentation humidity on the mass fraction of petroleum ether extract

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

正交試驗(yàn)結(jié)果見表2，正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析見表3. 由極差結(jié)果可知，影響石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的因素大小依次為RA>RB>RC>RD，即接種量>發(fā)酵溫度>發(fā)酵時(shí)間>發(fā)酵濕度；由方差分析結(jié)果可知，接種量對石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)影響極顯著，發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間和發(fā)酵濕度對其影響不顯著，正交試驗(yàn)結(jié)果最優(yōu)組合是A3B2C1D3. 因此，最佳發(fā)酵條件是接種量8 mL，發(fā)酵溫度32 ℃，發(fā)酵時(shí)間36 h，發(fā)酵濕度70%. 在此發(fā)酵條件下，石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16.50%.

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Orthogonal test results

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析Table 3 Orthogonal test results of variance analysis

2.3 發(fā)酵前后煙葉常規(guī)化學(xué)成分分析

混合微生物發(fā)酵前后B3F煙葉常規(guī)化學(xué)成分質(zhì)量濃度如表4所示. 由表4可知，在嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的最佳發(fā)酵條件下，微生物不僅分解淀粉等生物大分子，使煙葉的總糖和還原糖質(zhì)量濃度明顯增加，還可降低該類大分子物質(zhì)對吸食品質(zhì)的影響；煙堿、鉀、氯和總氮的變化不明顯，糖堿比和鉀氯比的升高有利于提高煙葉的燃燒性. 煙葉常規(guī)化學(xué)成分比例的變化使其內(nèi)部趨于協(xié)調(diào)，整體更為和諧，改善了卷煙的吸味品質(zhì)，從而提高了煙葉的感官品質(zhì).

表4 混合微生物發(fā)酵前后B3F煙葉常規(guī)化學(xué)成分質(zhì)量濃度Table 4 Mass concentration of conventional chemical components in B3F tobacco leaves before and after mixed microbial fermentation

2.4 發(fā)酵前后煙葉致香成分分析

混合微生物發(fā)酵前后煙葉中致香成分對比分析如表5所示. 由表5可知，經(jīng)釀酒酵母和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌混合微生物發(fā)酵處理的廣西B3F煙葉總致香成分質(zhì)量濃度增加64.21 μg/mL，總體變化不明顯，但巨豆三烯酮、大馬酮、茄酮、二氫大馬酮、香葉基丙酮和二氫獼猴桃內(nèi)酯這6種重要致香成分總量變化較大，質(zhì)量濃度由2 455.68 μg/mL提高到2 619.01 μg/mL，增加了6.65%. 煙葉的化學(xué)組成中，羰基化合物(酮類)和類脂類物質(zhì)對煙氣香味具有重要影響.利用酵母菌固態(tài)發(fā)酵煙葉，可以有效增加煙葉中羰基化合物(酮類)和類脂類化學(xué)物質(zhì)，進(jìn)而改善煙葉的品質(zhì)，已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道.胡志忠等[22]利用產(chǎn)香酵母對貴州煙葉進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵，發(fā)現(xiàn)在最佳發(fā)酵條件下，煙葉新增多種重要致香物質(zhì),其中包括糠醇、金合歡醇、β-環(huán)檸檬醛等. 陳篤建[23]用產(chǎn)香酵母處理低等級煙葉，處理前后煙葉成分和煙氣成分差異不大，但香味物質(zhì)巨豆三烯酮、正十六酸、香葉基丙酮、香葉醇等相對百分含量發(fā)生變化，改善了煙葉吸食品質(zhì).這與本文的研究結(jié)果一致.

表5 混合微生物發(fā)酵前后煙葉中致香成分對比分析Table 5 Comparative analysis of aroma components in tobacco leaves before and after mixed microbial treatment μg/mL

2.5 感官評吸結(jié)果分析

混合微生物發(fā)酵前后B3F煙葉的感官評吸結(jié)果如表6所示. 由表6可知，與空白組和對照組相比，試驗(yàn)組的香氣質(zhì)和余味均有所增加，刺激性和雜氣減輕，煙氣更加醇和細(xì)膩，卷煙余味舒適度增加，感官品質(zhì)提高；試驗(yàn)組評吸分?jǐn)?shù)為44.0，相比對照組有1.0分的提高，表明混合微生物發(fā)酵改善了煙葉的吸味品質(zhì).

表6 混合微生物發(fā)酵前后B3F煙葉的感官評吸結(jié)果Table 6 Sensory evaluation results of B3F tobacco leaves before and after mixed microbial fermentation 分

3 結(jié)論

本文以廣西百色B3F煙葉為研究對象，在釀酒酵母對廣西百色地區(qū)B3F煙葉進(jìn)行發(fā)酵預(yù)處理的基礎(chǔ)上，采用嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌對該煙葉進(jìn)一步發(fā)酵，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)確定最佳發(fā)酵條件，建立了混合微生物發(fā)酵廣西百色地區(qū)B3F煙葉技術(shù)；對比分析了混合微生物發(fā)酵前后廣西百色地區(qū)B3F煙葉常規(guī)化學(xué)成分和致香成分的變化，并研究發(fā)酵后該煙葉感官評吸品質(zhì)的提升水平. 結(jié)果表明：嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌發(fā)酵最佳工藝條件，接種量為8 mL，發(fā)酵溫度為34 ℃，發(fā)酵時(shí)間為60 h，濕度為70%，在該條件下石油醚提取物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16.50%；混合微生物發(fā)酵后煙葉常規(guī)化學(xué)成分中總糖和還原糖含量均有所增加，煙葉糖堿比由6.77提高到7.55，煙葉中巨豆三烯酮、大馬酮、茄酮、二氫大馬酮、香葉基丙酮和二氫獼猴桃內(nèi)酯6種重要致香成分質(zhì)量濃度增加了6.65%，這在一定程度上有效改善了煙葉的吸味品質(zhì)；發(fā)酵后煙葉香氣質(zhì)有所增加，刺激性和雜氣減輕，煙葉內(nèi)化學(xué)成分間更趨于協(xié)調(diào)，卷煙余味舒適度增加. 本文所建立的釀酒酵母和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌混合微生物發(fā)酵技術(shù)，可有效提高廣西百色B3F煙葉的品質(zhì)，今后需進(jìn)一步完善該混合微生物發(fā)酵的中試放大工藝條件，以加快其在不適用煙葉提質(zhì)增香中的推廣應(yīng)用.