不同相對分子質(zhì)量的黑根霉胞外多糖的生物活性

李 璋，許 晅，孟 迎，馬群飛，Huma Farooque Hashmi，張鵬英，陳靠山，

山東大學1生命科學學院，2國家糖工程技術(shù)研究中心，山東 青島266237

本實驗室前期從黑根霉（Rhizopus nigricans）的發(fā)酵液中分離得到胞外多糖，對其生物活性和結(jié)構(gòu)表征進行了深入研究［1,2］。黑根霉胞外多糖可以誘導HCT-116、CT26、BGC-823等多種腫瘤細胞凋亡［3］，增強正常小鼠和免疫低下小鼠的免疫活性［4］，抑制氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸鈉（AOM/DSS）誘導的小鼠結(jié)腸癌［5］，抑制甲基硝基亞硝基胍（MNNG）誘導的小鼠慢性萎縮性胃炎［6］。

目前，黑根霉胞外多糖的研究集中在其藥理活性，Song等［5］通過胃癌、結(jié)腸癌、肝癌等多種腫瘤模型研究了黑根霉胞外多糖的抗腫瘤活性，并對其發(fā)揮抗腫瘤活性的分子機制進行了深入研究，但是相對分子質(zhì)量對黑根霉胞外多糖生物活性的影響尚無文獻報道。分子結(jié)構(gòu)是多糖發(fā)揮其生物活性的基礎(chǔ)，研究不同結(jié)構(gòu)的黑根霉胞外多糖對提高其生物活性至關(guān)重要。多糖的相對分子質(zhì)量是影響其生物活性的重要參數(shù)，高相對分子質(zhì)量多糖的分子體積較大，不利于跨膜進入生物體內(nèi)發(fā)揮生物學活性［7］；低相對分子質(zhì)量多糖更容易結(jié)合活性位點，但無法形成復雜的空間結(jié)構(gòu)［8］。因此，通過研究不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖的生物活性可以找出活性較好的相對分子質(zhì)量范圍，對將來進一步研究黑根霉胞外多糖的構(gòu)效關(guān)系和藥理活性的開發(fā)具有重大意義。

分離不同相對分子質(zhì)量多糖的方法有物理法、化學法和酶解法，均存在工藝復雜、實驗周期長等缺點，分級醇沉法工藝簡單且實驗周期較短，因此本研究采用分級醇沉法分離不同相對分子質(zhì)量的多糖。多糖隨著相對分子質(zhì)量的增大，極性逐漸減小，結(jié)合水分子的能力減弱，利用不同濃度的乙醇改變?nèi)芤旱臉O性，可以使不同相對分子質(zhì)量的多糖組分得到沉淀［7］。本研究通過分級醇沉從黑根霉的發(fā)酵液中得到不同相對分子質(zhì)量的多糖，通過測定不同相對分子質(zhì)量多糖對DPPH自由基、ABTS自由基和羥自由基的清除活性來尋找具有高抗氧化活性組分對應(yīng)的相對分子質(zhì)量范圍，測定其對MFC和A549細胞增殖的抑制活性和誘導凋亡活性來尋找具有顯著抗腫瘤活性的多糖組分所對應(yīng)的相對分子質(zhì)量范圍，檢測其對RAW 264.7細胞增殖和一氧化氮釋放量的影響來篩選具有顯著免疫調(diào)節(jié)活性的多糖組分。本研究為黑根霉胞外多糖的藥效學研究提供了理論依據(jù)，為進一步將黑根霉胞外多糖開發(fā)為抗腫瘤藥物提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

黑根霉菌種保存于山東大學微生物技術(shù)國家重點實驗室，MFC細胞、A549細胞和RAW 264.7細胞（中國科學院細胞庫），實驗用水為去離子水，三氯甲烷、正丁醇、無水乙醇（國藥集團化學試劑有限公司），D301-R大孔吸附樹脂（北京索萊寶科技有限公司），葡聚糖標準品（色譜純）（Sigma-Aldrich），抗壞血酸、1,1-二苯基-2-苦肼基（DPPH自由基）、透析袋（上海源葉生物科技有限公司），胎牛血清、高糖型DMEM培養(yǎng)基（Gibco），ABTS自由基測試試劑盒、羥自由基測試試劑盒（南京建成生物研究所），CCK-8、一氧化氮檢測試劑盒、Annexin VFITC細胞凋亡試劑盒（碧云天生物技術(shù)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 黑根霉的培養(yǎng)與發(fā)酵 黑根霉（Rhizopus

nigricans）接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基中，置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，進行二次活化，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。挑取邊緣菌絲接入裝有500 mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基的1000 mL錐形瓶中，在28 ℃、120 r/min的搖床中培養(yǎng)5 d進行發(fā)酵。搖瓶發(fā)酵后的發(fā)酵產(chǎn)物與馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基以1∶20的比例裝入100 L發(fā)酵罐，總體積不超過70 L，發(fā)酵時間為3 d。設(shè)定發(fā)酵溫度28±1 ℃，通氣量50 m3/h，攪拌轉(zhuǎn)速設(shè)定為150 r/min，罐壓維持0.03～0.05 Mpa。

1.2.2 黑根霉胞外多糖的制備 8層紗布過濾后收集發(fā)酵液，將發(fā)酵液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至原體積的1/3，使用木瓜蛋白酶聯(lián)合Sevage（氯仿：正丁醇=3∶1）脫蛋白，減壓濃縮去除有機試劑后，上清液經(jīng)D301-R大孔吸附樹脂進行脫色，收集洗脫液并減壓濃縮至適當體積。分次加入一定體積無水乙醇使乙醇終濃度分別為60%、70%和80%，并分別在4 ℃冰箱靜置過夜，收集3種乙醇濃度下的沉淀，復溶后8000 r/min離心20 min后收集沉淀，加蒸餾水充分溶解，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至100 mL［9］。將溶液分別置于截留相對分子質(zhì)量為1000 D的透析袋中在4 ℃冰箱中透析48 h，冷凍干燥3 d得到RPS-1、RPS-2和RPS-3。

1.2.3 黑根霉胞外多糖相對分子質(zhì)量的測定 高效凝膠過濾色譜（HPSEC）檢測多糖的相對分子質(zhì)量和多分散指數(shù)。色譜條件如下：色譜柱：TSKgel G3000PWXL，以超純水為流動相，流動相流速為0.6 mL/min，柱溫控制在30 ℃，每次進樣量為20 μL，檢測器為示差折光檢測器（RID）。以已知相對分子質(zhì)量的葡聚糖標準品［重均相對分子質(zhì)量（Mw）分別為1000，2500，5000，7500，10 000，50 000 D］作lgMw-RT 校正曲線：y=-0.224x+13.402，R2=0.9922。精密稱取樣品和標準品，樣品配制成5 mg/mL溶液，12 000 r/min離心10 min，上清液用0.22μm的微孔濾膜過濾，然后將樣品轉(zhuǎn)置于1.8 mL進樣小瓶中。

1.2.4 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對DPPH自由基清除能力的測定 本實驗參考Zhang［10］的方法并進行改進，精密稱定10 mg DPPH置于100 mL容量瓶中，用75%乙醇定容至100 mL刻度線后避光保存?zhèn)溆?。取不同質(zhì)量濃度的黑根霉胞外多糖溶液250 μL于試管中，分別加入DPPH溶液1.25 mL。振蕩混勻后避光放置30 min，在515 nm波長處測定吸光值。以Vc為陽性對照，以等體積超純水代替多糖樣品溶液測定空白對照組吸光值，以等體積75%乙醇代替DPPH溶液測定樣品本底吸光度值（A）。DPPH自由基清除率（%）=1-［(As-A0）/Ac］×100，As為樣品組吸光值，A0為樣品本底吸光值，Ac為空白對照組吸光值。

1.2.5 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對ABTS自由基的清除能力測定 2.45 mmol/L過硫酸鉀溶液與

7 mmol/L ABTS溶液，按1∶1比例混合，室溫避光靜置反應(yīng)16 h，無水乙醇稀釋ABTS儲備液使其在734 nm處的吸光值為0.7±0.05，作為ABTS工作液。取1 mL樣品和6 mL ABTS工作溶液，室溫條件下充分混合反應(yīng)6 min［11］，于734 nm 波長下測吸光度，記為As。1 mL蒸餾水代替樣品溶液測得的吸光值為Ac，6 mL蒸餾水代替ABTS工作液，其吸光值記為A0。Vc作陽性對照。ABTS自由基清除率（%）=1-［(As-A0）/Ac］×100。

1.2.6 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對羥基自由基的清除能力測定 本實驗采用南京建成生物研究所的羥基自由基檢測試劑盒測定黑根霉胞外多糖對羥基自由基的清除活力，樣品溶液配制同1.3.5。以等體積超純水代替樣品溶液測定空白對照組吸光值，以等體積超純水代替工作液測定樣品本底吸光值。羥基自由基清除率（%）=1-［(As-A0）/Ac］×100%，As為樣品組吸光值，A0樣品本底吸光值，Ac為空白對照組吸光值。

1.2.7 黑根霉胞外多糖對小鼠前胃癌MFC細胞和人非小細胞肺癌A549細胞增殖的影響 取對數(shù)生長期MFC細胞和A549細胞接種于96孔板中，每孔6000個細胞，培養(yǎng)24 h后加藥，每組設(shè)6個復孔。加藥培養(yǎng)48 h后，棄去原培養(yǎng)基，每孔加入100 μL培養(yǎng)基和10 μL CCK-8試劑，2 h后在450 nm波長處測定吸光值，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示。細胞存活率=（A實驗組-A空白組）/（A對照組-A空白組）×100%。

1.2.8 黑根霉胞外多糖對小鼠巨噬細胞RAW 264.7增殖的影響 取對數(shù)生長期RAW 264.7細胞接種于96孔板中，每孔3000個細胞，在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h，在顯微鏡下觀察細胞貼壁后加藥，每組設(shè)6個復孔。加藥培養(yǎng)24 h后，棄去原培養(yǎng)基，每孔加入100 μL培養(yǎng)基和10 μL CCK-8試劑，2 h后測定吸光值A(chǔ)450nm，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示。細胞存活率=（A實驗組-A空白組）/（A對照組-A空白組）×100%。

1.2.9 黑根霉胞外多糖對小鼠巨噬細胞RAW 264.7一氧化氮釋放量的影響 取對數(shù)生長期RAW 264.7細胞，5000/孔接種于96孔板中，在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h，在顯微鏡下觀察細胞貼壁后加藥，將細胞分為對照組、脂多糖（LPS）組（1 μg/mL）和RPS-1、RPS-2、RPS-3給藥組（0.8 mg/mL），每組設(shè)6個復孔，加藥后放置在5%二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育24 h。根據(jù)NO檢測試劑盒說明書對細胞上清液中的NO含量進行檢測，另取一塊96孔板，小心吸取細胞上清液50 μL置于其中，每孔依次加入Griess I試劑和GriessⅡ試劑50 μL并混勻。室溫放置15 min后，在540 nm波長處測定吸光值，根據(jù)標準曲線計算NO含量［12］。

1.2.10 黑根霉胞外多糖對人非小細胞肺癌細胞A549凋亡的影響 取對數(shù)生長期A549細胞接種于6孔培養(yǎng)板中，24 h后吸棄培養(yǎng)基，其中3個孔各加2 mL完全培養(yǎng)基作為對照組，其余3個孔作為給藥組。給藥組每孔各加入2 mL 300 μg/mL的RPS-1、RPS-2和RPS-3。24 h后使用不含EDTA胰酶消化，用PBS洗滌后在給藥組中加入5μL Annexin V-FITC和10μL碘化丙啶（PI）染色液［13］。將對照組細胞等分為4份，分為空白管、Annexin V-FITC單染管、PI單染管和Annexin V-FITC/PI雙染管。室溫避光孵育20 min，過細胞篩后立即用流式細胞儀檢測，使用FlowJo軟件分析早期凋亡率和晚期凋亡率。

1.2.11 統(tǒng)計學方法 數(shù)值資料均以均數(shù)±標準差表示，采用GraphPad Prism 7.0軟件進行統(tǒng)計學分析。采用單因素方差分析或雙因素方差分析（ANOVA）比較各組間的統(tǒng)計學差異。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 黑根霉胞外多糖相對分子質(zhì)量測定

利用高效凝膠過濾色譜（HPSEC）檢測RPS-1、RPS-2和RPS-3的相對分子質(zhì)量和相對分子質(zhì)量分布（圖1），RPS-1、RPS-2 和RPS-3 的保留時間分別為8.750、8.762 和8.437 min，重均相對分子質(zhì)量分別為43693、85471和14197 Da。RPS-2 在10.90 min 處存在雜峰，15.25 min處為溶劑峰。由峰面積大小可知，RPS-2含量相對較低。RPS-1、RPS-2和RPS-3的多分散指數(shù)分別為1.30、1.34和1.29。

圖1 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖HPSEC色譜圖Fig.1 High pressure size exclusion chromatography of polysaccharides with different molecular masses from Rhizopus nigricans.

2.2 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對DPPH自由基的清除能力

黑根霉胞外多糖對DPPH自由基具有一定的清除活性。RPS-1、RPS-2和RPS-3在4.0 mg/mL時對DPPH自由基清除率分別為48.36%、29.55%和24.24%，并且在實驗濃度范圍內(nèi)DPPH自由基清除率呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。在給藥濃度為1.0～4.0 mg/mL時，RPS-1對DPPH自由基的清除活性顯著高于RPS-2和RPS-3（P<0.05）（圖2A）。

2.3 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對ABTS自由基的清除能力

3種不同相對分子質(zhì)量多糖具有較好的ABTS自由基清除活性，當給藥濃度為0.125～1.0 mg/mL時，RPS-3對ABTS自由基的清除活性顯著高于RPS-1和RPS-2（P<0.05），當給藥濃度為2.0 mg/mL和4.0 mg/mL時，RPS-1對ABTS自由基的清除活性顯著高于RPS-2和RPS-3（P<0.05）。RPS-1、RPS-2和RPS-3在4.0 mg/ml時對DPPH 自由基清除率分別為67.14%、54.70%和62.48%（圖2B）。

2.4 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對羥基自由基的清除能力

RPS-1、RPS-2和RPS-3具有較好的羥自由基清除能力。在實驗濃度范圍內(nèi)，RPS-3對羥自由基的清除活性顯著高于RPS-1和RPS-2（P<0.01），且RPS-1和RPS-3對羥基自由基清除率呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。RPS-1、RPS-2和RPS-3在4.0 mg/mL時對羥基自由基的清除率為89.94%、24.99%和97.26%。當給藥濃度高于1.0 mg/mL時，RPS-3對羥基自由基的清除能力高于陽性對照Vc（圖2C）。

圖2 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖和維生素C 對DPPH、ABTS和羥自由基清除率Fig.2 Comparison of DPPH,ABTS,and hydroxyl radical scavenging capacity between polysaccharides with different molecular masses and vitamin C.A:DPPH radical scavenging capacity assay.B:ABTS radical scavenging capacity assay.C:Hydroxyl radical scavenging capacity assay.*P<0.05,**P<0.01.Data are presented as Mean±SD of three independent experiments.

2.5 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對腫瘤細胞增殖的影響

RPS-1、RPS-2和RPS-3在實驗濃度范圍內(nèi)均能抑制小鼠前胃癌MFC細胞和人肺癌A549細胞增殖（圖3）。在1.0 mg/mL時，RPS-1、RPS-2和RPS-3對MFC細胞增殖的抑制率分別為12.68%、32.22%和14.4%，對A549 細胞增殖的抑制率分別為20.35%、37.07%和15.75%，且RPS-2對MFC和A549細胞增殖的抑制率高于RPS-1和RPS-3（P>0.05）。

圖3 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對MFC和A549細胞增殖的影響Fig.3 Effects of polysaccharides with different molecular masses on proliferation of MFC(A)and A549 cells(B).

2.6 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對巨噬細胞RAW 264.7增殖和一氧化氮含量的影響

3種不同相對分子質(zhì)量的黑根霉胞外多糖均能促進小鼠巨噬細胞RAW 264.7 細胞增殖。當RPS-1、RPS-2和RPS-3為1.0 mg/mL時，RAW 264.7細胞的存活率分別為187.0%、199.6%和150.0%（圖4A）。其中RPS-2促進RAW 264.7細胞增殖的活性顯著高于RPS-1和RPS-3（P<0.05）。一氧化氮（NO）是一種重要的細胞內(nèi)信號分子，巨噬細胞可以通過釋放NO來發(fā)揮其對腫瘤細胞的細胞毒作用。實驗結(jié)果表明，RPS-2處理后的RAW 264.7細胞釋放的NO含量顯著高于RPS-1和RPS-3（P<0.01）（圖4B）。

圖4 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對RAW 264.7細胞增殖和NO含量的影響Fig.4 Effects of the 3 polysaccharides on proliferation(A)and NO production(B)of RAW 264.7 cells.*P<0.05 vs control group,**P<0.01 vs control group,##P<0.01.

2.7 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖誘導肺癌A549細胞凋亡

不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖均可以顯著誘導A549肺癌細胞凋亡（P<0.01，5A），在RPS-1、RPS-2和RPS-3的濃度為0.4 mg/mL時，RPS-2處理后A549細胞的凋亡率顯著高于RPS-1 和RPS-3（P<0.05，圖5B）。

圖5 不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對A549細胞凋亡的影響Fig.5 Flow cytometric analysis of apoptosis rates of A549 cells treated with RPS-1,RPS-2 and RPS-3 (0.4 mg/mL).Data are presented as Mean±SD of 3 independent experiments.*P<0.05 vs control group,**P<0.01 vs control group,#P<0.05 and##P<0.01.

3 討論

黑根霉胞外多糖的產(chǎn)量為196 mg/L，主要由葡萄糖、半乳糖、甘露糖和果糖組成，其摩爾比例為5.89∶3.64∶3.2∶1。黑根霉胞外多糖主要的糖苷鍵連接方式是→6）Glcp（1→，為吡喃型糖，既含有α型糖苷又含有β型糖苷［2］。黑根霉胞外多糖具有較好的抗腫瘤活性，可以誘導多種腫瘤細胞凋亡和自噬［14］，增強正常小鼠和免疫低下小鼠的免疫功能，抑制小鼠胃癌、結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展，抑制小鼠肝癌的發(fā)展和肺轉(zhuǎn)移［15］。

體內(nèi)產(chǎn)生的過量氧自由基可以誘導DNA損傷，導致細胞膜降解，從而引起細胞的破壞和機體的損傷，是癌癥、心血管疾病、糖尿病及風濕性關(guān)節(jié)炎等多種疾病的共同誘因，抗氧化劑可以用于上述疾病的預防和輔助治療［16-17］。天然多糖具有較好的抗氧化活性，由于相對分子質(zhì)量可以影響多糖的抗氧化活性，因此研究不同相對分子質(zhì)量多糖的抗氧化活性對提高多糖抗氧化性能具有重要意義。本文研究了3種不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖的抗氧化活性，研究結(jié)果表明中等相對分子質(zhì)量多糖RPS-1對DPPH和ABTS自由基的清除活性顯著高于高相對分子質(zhì)量多糖RPS-2（P<0.05），低相對分子質(zhì)量多糖RPS-3對羥自由基的清除活性顯著高于RPS-1和RPS-2（P<0.01），表明低、中相對分子質(zhì)量多糖的抗氧化活性高于高相對分子質(zhì)量多糖。Chen等［18］研究發(fā)現(xiàn)中等相對分子質(zhì)量玉米須多糖對DPPH和羥自由基的清除活性和還原力高于高相對分子質(zhì)量多糖；LI Wang等［19］研究表明低相對分子質(zhì)量平菇多糖對羥自由基和超氧陰離子自由基的清除活性高于高相對分子質(zhì)量多糖，均與本文的研究結(jié)果一致。黑根霉胞外多糖的相對分子質(zhì)量較高，含有大量具有還原性的半縮醛羥基，可以提供活潑氫與·OH結(jié)合生成水，從而降低·OH對機體的損傷；多糖的碳原子因此成為碳自由基，并進一步氧化形成過氧自由基，最后分解成對機體無害的產(chǎn)物［20］。

誘導腫瘤細胞凋亡和免疫調(diào)節(jié)是多糖發(fā)揮抗腫瘤活性的重要途徑，Chen等［21-22］研究發(fā)現(xiàn)玉竹多糖能夠可以誘導人食管鱗狀細胞癌（ESCC）細胞凋亡并且激活巨噬細胞。研究表明，多糖可以通過與腫瘤細胞的細胞膜上死亡受體結(jié)合，經(jīng)過一系列信號轉(zhuǎn)導將凋亡信號傳遞到細胞內(nèi)，從而誘導腫瘤細胞凋亡［23-24］。同時，多糖可以與巨噬細胞表面的Toll樣受體、甘露糖受體、補體受體3、清道夫受體等模式識別受體結(jié)合，從而引發(fā)細胞內(nèi)信號級聯(lián)反應(yīng)來調(diào)節(jié)巨噬細胞的免疫功能［25-26］。多糖與其受體的結(jié)合依賴于多糖復雜的高級結(jié)構(gòu)，而相對分子質(zhì)量是影響多糖空間構(gòu)象的重要因素，研究不同相對分子質(zhì)量多糖的抗腫瘤活性和免疫活性具有重要意義［27］。本文研究了三種不同相對分子質(zhì)量黑根霉胞外多糖對腫瘤細胞增殖、凋亡的影響和對巨噬細胞免疫活性的影響，發(fā)現(xiàn)高相對分子質(zhì)量多糖RPS-2對MFC和A549細胞增殖的抑制活性高于RPS-1和RPS-3（P>0.05）；RPS-2處理A549細胞24 h后，早期、晚期凋亡細胞的比例顯著高于RPS-1和RPS-3（P<0.05）。RPS-2處理RAW 264.7細胞24 h后，細胞存活率和NO釋放量均顯著高于低、中相對分子質(zhì)量多糖RPS-1和RPS-3（P<0.05）。李蘋等［28］研究發(fā)現(xiàn)相對分子質(zhì)量高于100 000的醋柴胡多糖對巨噬細胞的吞噬活性顯著高于低相對分子質(zhì)量醋柴胡多糖（3.5～50 000和50～100 000）（P<0.05），Kim等［29］研究發(fā)現(xiàn)相對分子質(zhì)量在10 000～30 000的樺褐孔多糖對人結(jié)腸癌HT-29細胞增殖的抑制活性和誘導凋亡活性高于低相對分子質(zhì)量樺褐孔多糖，均與本文的研究結(jié)果一致。高相對分子質(zhì)量多糖具有較好的抗腫瘤活性和免疫調(diào)節(jié)活性可能是由于其復雜的空間構(gòu)象，易與巨噬細胞和腫瘤細胞表面多種受體結(jié)合進而發(fā)揮生物活性。

綜上所述，黑根霉胞外多糖的抗腫瘤活性和免疫調(diào)節(jié)活性與自身相對分子質(zhì)量密切相關(guān)，低和中相對分子質(zhì)量多糖具有較好抗氧化活性，高相對分子質(zhì)量多糖具有較好的抗腫瘤活性和免疫調(diào)節(jié)活性。本文為將來進一步研究黑根霉胞外多糖的構(gòu)效關(guān)系提供了數(shù)據(jù)支持，具體機制有待進一步研究。