• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    侵染湖南甘薯種質(zhì)資源的曲葉病毒和桿狀病毒的檢測及其親緣關(guān)系分析

    2021-11-08 12:09:12黃艷嵐張超凡張道微董芳鄒學(xué)校
    熱帶作物學(xué)報 2021年9期

    黃艷嵐 張超凡 張道微 董芳 鄒學(xué)校

    摘? 要:采用PCR技術(shù)對2015—2016年從湖南省多個市縣采集的180份甘薯種質(zhì)資源進(jìn)行兩種DNA病毒(sweet potato leaf curl virus,SPLCV和sweet potato badnavirus,SPBV)檢測,并以PCR擴(kuò)增產(chǎn)物序列為基礎(chǔ),對這兩種病毒的親緣關(guān)系進(jìn)行分析。結(jié)果表明:(1)180份甘薯種質(zhì)資源中,22份檢測出SPLCV,占總數(shù)的12.2%;32份檢測出SPBV,占總數(shù)的17.8%;8份同時檢出SPLCV和SPBV這兩種病毒,占總數(shù)的3.9%。(2)檢出SPLCV的市縣有長沙、永州、懷化、邵陽、郴州、常德、婁底、益陽、岳陽和株洲;檢出SPBV的市縣有長沙、永州、懷化、衡陽和邵陽;檢出兩病毒復(fù)合侵染的市縣有懷化、長沙、永州和邵陽。(3)基于病毒全基因組序列分析顯示,全球已報道的36個SPLCV分離物可分為3組,本研究獲得的12個湖南分離物可分別歸于3個組中,其中6個歸于組Ⅰ,1個歸于組Ⅱ,5個歸于組Ⅲ,表明湖南SPLCV具有高度多樣性。(4)基于病毒運動蛋白和外殼蛋白編碼基因部分序列分析顯示,全球已報道的36個SPBV分離物可分為4組,絕大部分分離物屬于組Ⅰ,我國1個安徽分離物單獨成組(組Ⅱ),我國2個山東分離物和1個海南分離物構(gòu)成1個組(組Ⅲ),本研究獲得的2個湖南分離物其中1個歸于組Ⅰ,而另1個與已報道各分離物的核苷酸序列均存在顯著差異,相似性僅為74.92%,單獨成組(組Ⅳ),表明我國SPBV具有高度的變異性,存在多個變異類型。本研究結(jié)果可為湖南地區(qū)這兩種病毒病防控提供依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:甘薯種質(zhì)資源;甘薯曲葉病毒;甘薯桿狀病毒;鑒定與分析

    中圖分類號:S435.31????? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

    Detection and Genetic Relationship Analysis of Sweet Potato Leaf Curl Virus and Sweet Potato Badnavirus Infecting Sweet Potato Germplasm Resources in Hunan, China

    HUANG Yanlan1, ZHANG Chaofan, ZHANG Daowei1, DONG Fang1, ZOU Xuexiao2*

    1. Crop Research Institute, Hunan Academy of Agricultural Sciences, Changsha, Hunan 410125, China; 2. Hunan Agricultural University, Changsha, Hunan 410128, China

    Abstract: 180 sweet potato germplasm resources from different regions of Hunan were used to detect sweet potato leaf curl virus (SPLCV) and sweet potato badnavirus (SPBV) during 2015-2016. The genetic relationship of the two viruses was analyzed based on the sequence of PCR amplification products. 22 sweet potato germplasm resources were infected with SPLCV, making up 12.2% of the total, and 32 sweet potato germplasm resources were infected with SPBV, or 17.8% of the total. There were 8 sweet potato germplasm resources infected with both SPLCV and SPPV, accounting for 3.9% of all 180 sweet potato germplasm resources. SPLCV was detected in Changsha, Yongzhou, Huaihua, Shaoyang, Chenzhou, Changde, Loudi, Yiyang, Yueyang and Zhuzhou. SPBV was detected in Changsha, Yongzhou, Huaihua, Hengyang and Shaoyang. Both SPLCV and SPBV were detected in Huaihua, Changsha, Yongzhou and Shaoyang. Based on the whole genome sequence analysis of the virus, 36 SPLCV isolates reported in the world were divided into 3 groups. The 12 strains isolated from Hunan obtained in this study could be classified into 3 groups, six of them belonged to groupⅠ and one of them to groupⅡ, five of them to groupsⅢ, meaning that sweet potato leaf curl virus was highly diverse in Hunan. Based on the partial sequence analysis of viral movement protein and coat protein coding genes, 36 SPBV isolates reported in the world could be divided into 4 groups, the most of isolates belong to group I, and one Anhui isolate in China was divided into groupⅡalone. Two Shandong isolates and one Henan isolate in China constituted groupⅢ. One of the two Hunan isolates obtained in this study belongs to groupⅠ, and the other was significantly different from the reported isolates, only 74.92% similarity, classified groupⅣ. The results indicate that SPBV have high variability and many types of variation in China. This study could offer a useful reference for prevention and control of these two kinds of sweet potato virus diseases in China.

    Keywords: sweet potato germplasm resources; sweet potato leaf curl virus; sweet potato badnavirus; identification and analysis

    DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.09.031

    甘薯(Ipomoea Batatas)在全球作物糧食生產(chǎn)中排名第七,是僅次于馬鈴薯和木薯的第三大塊根作物[1]。據(jù)聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織(FAO,2017)統(tǒng)計數(shù)據(jù),全球有120多個國家和地區(qū)種植甘薯,全世界甘薯種植面積約12.5×106 hm2,產(chǎn)量約18.5×107 t。甘薯為無性繁殖作物,病毒通過世代傳遞在甘薯塊莖中累積,導(dǎo)致產(chǎn)量逐年降低,因此帶病毒的甘薯種薯已成為世界各國產(chǎn)量存在差異的主要因素[1]。目前侵染甘薯的病毒達(dá)30多種[2]。國際病毒分類委員會(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)發(fā)布侵染甘薯的病毒有31種[3]。近年來,國內(nèi)外甘薯生產(chǎn)上報道的主要病毒病害為甘薯羽狀斑駁病毒(sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)和甘薯褪綠矮化病毒(sweet potato chlorotic stunt vitus,SPCSV)復(fù)合侵染導(dǎo)致的復(fù)合病害[4],以及由甘薯曲葉病毒(sweet potato leaf curl virus,SPLCV)侵染產(chǎn)生的甘薯曲葉病害[5]。

    SPLCV是雙生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花葉病毒屬(Begomovirus)成員,基因組僅含有DNA-A,共編碼6個開放閱讀框:AV1(CP)、AV2、AC1、AC2、AC3 和AC4,由煙粉虱(Bemisia tabaci)以持久性方式傳播[6]。部分甘薯曲葉病毒侵染甘薯后葉片無明顯癥狀,多數(shù)表現(xiàn)為葉緣向上卷曲、葉脈黃化、葉脈間褪綠斑駁[7]。甘薯曲葉病毒病害是對甘薯生產(chǎn)危害較大的病毒病害之一,可導(dǎo)致甘薯減產(chǎn)20%~60%[8]。SPPV也稱為sweet potato badnavirus(SPBV),含SPBA-A和SPBB,屬花椰菜花葉病毒科(Caulimoviridae)桿狀DNA病毒屬(Badnavirus),包含5個開放閱讀框:ORF1、ORF2、ORF3a、ORF3b和ORF4[9],由粉蚧和少數(shù)種類的蚜蟲以半持久性方式傳播[10]。受SPPV侵染的甘薯植株無癥狀或表現(xiàn)為兩種以上病毒共同侵染的癥狀[2,11]。

    除甘薯種薯(種苗)易攜帶病毒外,甘薯種質(zhì)資源也存在不同程度的病毒感染。Paprotka等[12]在巴西甘薯種質(zhì)中鑒定出2個新的雙生病毒新種、3個新的株系和其他變異株系,甘薯曲葉病毒陽性檢測率為83.6%。Adane等[13]用ELISA方法檢測埃塞俄比亞甘薯種質(zhì)資源,存在甘薯羽狀斑駁病毒、甘薯褪綠矮化病毒和甘薯病毒2的陽性率達(dá)64.7%、36.8%和1.8%,部分種質(zhì)受甘薯羽狀斑駁病毒和甘薯褪綠矮化病毒共同侵染。Barkley等[14]檢測美國甘薯種質(zhì)資源,有6.7%種質(zhì)被檢測為甘薯曲葉病毒陽性。董芳等[15]對采自邵陽市、長沙市、永州市和株洲市4個地區(qū)的甘薯種質(zhì)檢測甘薯曲葉病毒,陽性率為5.7%。以上研究表明2種或2種以上甘薯病毒的復(fù)合侵染已不斷增加,導(dǎo)致協(xié)生而加重甘薯病毒病害[16]。

    以2015—2016年從湖南省各市縣采集的甘薯種質(zhì)及湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所甘薯種質(zhì)資源圃的種質(zhì)資源為材料,經(jīng)前期檢測,發(fā)現(xiàn)存在SPLCV[17]和SPPV[18]兩種DNA病毒,本文通過檢測甘薯曲葉病毒和甘薯桿狀病毒的發(fā)生及分布情況,為甘薯病毒病防控提供理論依據(jù)。

    1? 材料與方法

    1.1? 材料

    甘薯材料為101份地方品種和79份選育品種,共180份。地方品種是2015—2016年采自湖南省13個地級市34個縣(區(qū))的甘薯種質(zhì)資源;選育品種是采自湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所種質(zhì)資源圃的甘薯資源。采樣以1個甘薯塊根萌發(fā)的植株為1個混合樣本,葉片統(tǒng)一采摘甘薯植株新鮮展開頂葉3~4片,并記錄癥狀。

    1.2? 方法

    1.2.1? 甘薯葉片基因組DNA提取? 甘薯葉片基因組DNA提取參照CTAB法[19](CTAB、Tris、EDTA、PVP、TEMED購自北京鼎國公司;其余試劑為國產(chǎn)分析純)進(jìn)行。

    1.2.2? 甘薯DNA病毒PCR引物篩選及反應(yīng)體系的建立? SPLCV檢測引物參照背靠背引物L(fēng)CVQF1/R1、LCVQF2/R2、LCVQF3/R3和LCVQF4/R4[17]。SPBV檢測引物參照SPBV保守區(qū)引物SPBV-F1、SPBV-F2、SPBV-F3和SPBV- R1、SPBV-R2、SPBV-R3[18]。

    取甘薯葉片總DNA各3 ng為模板,利用SPLCV擴(kuò)增的引物組合LCVQF1/R1、LCVQF2/ R2、LCVQF3/R3和LCVQF4/R4(表1)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,10 ?L反應(yīng)體系為:DNA模板約50 ng,2×Phanta Max Buffer 5 ?L,dNTP Mix(10 mmol/L)0.5 ?L,Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 0.2 ?L,上下游引物(10 ?mol/L)各0.5 ?L,ddH2O補(bǔ)足10 ?L。反應(yīng)條件為:94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性30 s,56 ℃退火30 s,72 ℃延伸3 min,35個循環(huán);最后72 ℃延伸10 min。用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測。經(jīng)PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物回收后與PMDTM19-T Vector連接,轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞,篩選陽性克隆,測序委托武漢奧科鼎盛生物科技有限公司進(jìn)行。利用SPBV正反引物兩兩配對組合(表1)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,退火溫度58 ℃,72 ℃延伸1 min,其余反應(yīng)條件、測序鑒定與SPLCV鑒定的條件相同。

    1.2.3? 序列分析? 序列用Blast進(jìn)行比對,用MEGA7[20]軟件對SPLCV和SPPV的核酸序列進(jìn)行進(jìn)化分析,用Neighbor-Joining方法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,分支可信度Bootstrap為1000。

    2? 結(jié)果與分析

    2.1? SPLCV的PCR檢測

    經(jīng)引物篩選,甘薯葉片DNA樣品用引物對LCVQF1/R1進(jìn)行PCR檢測,目的條帶特異性高。陽性對照為Sim- 陰性對照為N3020。經(jīng)檢測,樣品2、4、9、11和14能獲得近3000 bp的特異性目的條帶(圖1)。通過對180份甘薯樣品進(jìn)行全基因序列檢測,其中有22份檢測為陽性。將目的條帶回收測序,獲得12個SPLCV基因全序列,大小在2769~2835 bp之間。

    2.2? SPPV的PCR鑒定

    經(jīng)引物篩選,9對SPBV引物組合中,引物SPBVF3/R2擴(kuò)增序列特異性強(qiáng)。用引物組合SPBVF3/R2對甘薯葉片DNA樣品進(jìn)行PCR檢測,以Sim-1為陽性對照,以N3020為陰性對照。經(jīng)檢測,樣品1~14能擴(kuò)增出750 bp的目的條帶(圖2)。將目的條帶回收測序,獲得大小約700 bp的序列。通過對180份甘薯樣品進(jìn)行SPBV檢測,其中有32份檢測為陽性。

    2.3? SPLCV核酸序列聚類分析

    經(jīng)Blast序列分析,本研究所得的12個SPLCV與NCBI下載的36個SPLCV序列進(jìn)行核苷酸相似性分析,利用MEGA7的NJ法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(圖3)?;诓《救蛐蛄蟹治鲲@示,全球已報道的36個SPLCV分離物可分為3組,本研究獲得的12個湖南分離物與選取序列的核苷酸相似性為90%~99%,可分別歸為3個組:SPLCV(21-5)、SPLCV(77)、SPLCV(4156)、SPLCV(6-1)、SPLCV(6-A5)和SPLCV(6-68)歸于組Ⅰ,其中SPLCV(4156)與甘薯廣西曲葉病毒(KJ476510)的相似性為95.51%,SPLCV(6-1)和SPLCV(6-A5)序列相似性為99.89%;SPLCV(3)歸于組Ⅱ,與甘薯河南曲葉病毒4(KJ476509)、甘薯曲葉病毒日本分離物(AB433786)、甘薯曲葉病毒西班牙分離物(EF456744)、甘薯曲葉病毒日本分離物(AB433788)、甘薯曲葉病毒美國分離物(HQ333143)、甘薯曲葉病毒中國分離物(KX033430)聚為1組,其中SPLCV(3)與甘薯曲葉病毒日本分離物(AB433788)親緣關(guān)系最近,相似性為95.77%;SPLCV(8-76)、SPLCV(8-47)、SPLCV(5)、SPLCV(194)、SPLCV(6126)歸于組Ⅲ,與甘薯曲葉病毒中國分離物(DQ512731)、甘薯河南曲葉病毒(KC907406、KJ476507)聚為1組,其中SPLCV(8-76)與甘薯喬治亞曲葉病毒中國分離物(KX033423)親緣關(guān)系最近,相似性為98.38%,這與聚類分析結(jié)果一致。

    2.4? SPPV核酸序列聚類分析

    對32份材料測序結(jié)果進(jìn)行分析,序列可分為兩大類,因此聚類分析只選擇了SPPV-A1和SPPV-A22這2個代表性分離物。在NCBI核苷酸數(shù)據(jù)庫中,SPPV基因組全序列較少,本研究獲得SPPV-A1序列位于FJ560944核酸位點1563~2228 bp之間,SPPV-A22序列位于FJ560943核酸位點1514~2171 bp之間,均為ORF3a區(qū)域?;诓《具\動蛋白和外殼蛋白編碼基因部分序列分析顯示,全球已報道的36個SPBV分離物可分為4組(圖4),絕大部分分離物屬于組Ⅰ,我國1個安徽分離物(KT448757)單獨成組(組Ⅱ),我國2個山東分離物(KT448748、KT448743)和1個河南分離物(KT448763)構(gòu)成1個組(組Ⅲ),本研究獲得的2個湖南分離物,其中SPBV-A1歸于組Ⅰ,與甘薯桿狀病毒TZ分離物(KF836892)親緣關(guān)系最近,相似性為88.44%;而SPBV-A22與已報道各分離物的核苷酸序列均存在顯著差異,與甘薯桿狀病毒(FJ560943)相似性為74.92%,單獨成組(組Ⅳ),表明我國SPBV具有高度的變異性,存在多個變異類型。

    2.5? 甘薯種質(zhì)資源感染SPLCV和SPPV統(tǒng)計分析

    180份甘薯種質(zhì)資源共檢測出SPLCV陽性樣品22份,包括17份地方品種和5份選育品種,占總數(shù)的12.2%;檢測出SPPV陽性樣品32份,包括20份地方品種和12份選育品種,占總數(shù)的17.8%。其中8份甘薯種質(zhì)資源樣品均檢測出SPLCV和SPBV這兩種病毒,包含6份地方品種和2份選育品種,占總數(shù)的3.9%。SPLCV分布為:長沙5份,永州4份,懷化和邵陽3份,郴州2份,常德、婁底、益陽、岳陽和株洲各1份;SPBV分布為:長沙14份,永州8份,懷化5份,衡陽3份,邵陽1份;SPLCV和SPPV復(fù)合侵染的分布點為:懷化3份,長沙和永州2份,邵陽1份(表2)。

    3? 討論

    通過對湖南地區(qū)甘薯種質(zhì)資源SPLCV和SPPV檢測,從品種類型上分析,甘薯種質(zhì)資源地方品種病毒單獨侵染發(fā)生率和復(fù)合侵染發(fā)生率均高于選育品種。甘薯是無性繁殖作物,病毒通過昆蟲媒介傳播,在塊莖中逐年積累,使甘薯產(chǎn)量降低,當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶自留種的種植習(xí)慣使病毒積累成為目前地方品種產(chǎn)量降低的主要因素,種薯(種苗)的跨區(qū)域流通更加促進(jìn)病毒的傳播和累積。從分布區(qū)域上分析,甘薯種質(zhì)資源SPLCV和SPPV檢測率較高的分布點為長沙、永州、懷化和邵陽,郴州、常德、婁底、益陽、岳陽和株洲的病毒檢測率較低,整體呈現(xiàn)出分布范圍廣、湘西南地區(qū)分布多,湘東北和湘西北分布較少的特點,病毒發(fā)病區(qū)域與董芳等[15]的研究結(jié)果相比有明顯增加,這與昆蟲媒介的傳播、種薯的流通及甘薯塊根內(nèi)病毒的不斷累積相關(guān)。此外,長沙地區(qū)作為城市核心地帶,帶病種薯通過核心區(qū)域的流通而促進(jìn)病毒的傳播。從病毒特征上分析,分離獲得12個SPLCV湖南分離物基因全序列可分別歸于3個組中,表明湖南SPLCV具有高度多樣性。不同地區(qū)的SPLCV株系具有一定的相似性,相鄰區(qū)域的SPLCV株系相似性較高,這與SPLCV在自然界傳播過程中極易發(fā)生重組變異而產(chǎn)生新的株系有關(guān)[21]。相比SPLCV,本研究獲得的2個SPBV湖南分離物中1個歸于組Ⅰ,而另1個與已報道各分離物的核苷酸序列均存在顯著差異,相似性僅為74.92%,單獨成組(組Ⅳ),表明我國SPBV具有高度的變異性,存在多個變異類型。

    自然界中植物病毒既能由單一的媒介進(jìn)行病毒傳播產(chǎn)生單獨侵染,也能由不同媒介進(jìn)行多種病毒共同傳播而產(chǎn)生復(fù)合侵染[22]。復(fù)合侵染可分為不同種間和相同種內(nèi)不同株系病毒的共同侵染,相比較單一侵染,病毒復(fù)合侵染能使寄主產(chǎn)生更嚴(yán)重的癥狀。不同種間病毒復(fù)合侵染在番茄、辣椒、菜豆上已有報道。劉微等[23-25]從帶病毒病癥狀番茄植株中檢測出番茄褪綠病毒和番茄黃化曲葉病毒。王少立等[26]從山東辣椒檢測出辣椒輕斑駁病毒和黃瓜花葉病毒。相同種間復(fù)合侵染如趙麗玲等[27]在云南凹頭莧檢測出番茄黃化曲葉病毒和勝紅薊黃脈病毒;Li等[28]在四川菜豆檢測出煙草曲莖病毒、番茄黃化曲葉病毒和煙草曲莖病毒衛(wèi)星DNA。甘薯不同種間復(fù)合侵染也有類似報道,黃利利等[8]檢測廣西甘薯病毒由兩種或兩種以上RNA和DNA病毒復(fù)合侵染,使甘薯表現(xiàn)出復(fù)雜的癥狀。姜珊珊等[29]檢測出甘薯褪綠矮化病毒和甘薯曲葉病毒復(fù)合侵染山東甘薯,由此產(chǎn)生多重PCR方法檢測用于甘薯病毒復(fù)合侵染的鑒定[30-31]。本研究從8份甘薯種質(zhì)資源中檢測的兩種病毒為不同種間的病毒,且均為侵染甘薯的DNA病毒,葉片表現(xiàn)出嚴(yán)重上卷、葉脈肥大及葉片扇形皺縮等癥狀。Mbanzibwa等[32]從葉片卷曲、黃脈和生長發(fā)育遲緩的甘薯樣本中檢測出SPPV和SpSV/1這兩種DNA病毒。表明病毒復(fù)合侵染甘薯產(chǎn)生的癥狀比單獨侵染更重更復(fù)雜,而且DNA病毒單獨侵染率和復(fù)合侵染率均呈增加趨勢[33]。

    目前針對單獨侵染或復(fù)合侵染后具有相應(yīng)病毒病癥狀的甘薯種質(zhì)資源可以利用莖尖脫毒技術(shù)繁育健康種薯(種苗),對生產(chǎn)上流通的種薯或癥狀不明顯而又需要檢測的甘薯種質(zhì)資源可以提取種薯(種苗)DNA,用SPLCV和SPPV病毒特異性引物進(jìn)行PCR鑒定,達(dá)到快速檢測目的,最大程度上降低該病毒的傳播,對甘薯種質(zhì)資源的保存與利用具有重要意義。

    參考文獻(xiàn)

    [1]? Loebenstein G. Control of sweet potato virus diseases[J]. Advances in Virus Research, 2015, 91: 33-45.

    [2]? Clark C A, Davis J A, Abad J A, et al. Sweetpotato viruses: 15 years of progress on understanding and managing complex diseases[J]. Plant Disease, 2012, 96(2): 168-185.

    [3]? Michael J Adams, Elliot J Lefkowitz, Andrew M Q King, et al. Changes to taxonomy and the international code of virus classi?cation and nomenclature rati?ed by the international committee on taxonomy of viruses[J]. Arch Virol, 2017, 162: 2505-2538.

    [4]? Gutiérrez D L, Fuentes S, Salazar L F. Sweet potato virus disease(SPVD): Distribution, incidence, and effect on sweet potato yield in Peru[J]. Plant Disease, 2003, 87(3): 297-302.

    [5]? Qin Y, Zhang Z, Qiao Z, et al. First report of sweet potato leaf curl Georgia virus on sweet potato in China[J]. Plant Disease, 2013, 97(10): 1388.

    [6]? Boni S B, Rugumamu C P, Gerling D, et al. Interactions between cassava mosaic geminiviruses and their vector, Bemisiatabaci (Hemiptera: Aleyrodidae)[J]. Journal of Economic Entomology, 2017, 110(3): 884-892.

    [7]? Kim J, Kil E J, Kim S, et al. Seed transmission of sweet potato leaf curl virus in sweet potato (Ipomoea batatas)[J]. Plant Pathology Jorunal, 2015, 64(6): 1284-1291.

    [8]? 黃利利, Pham B, 何芳練, 等. 廣西甘薯病毒病的病原病毒種類檢測[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué), 2016, 35(5): 1213-1218.

    [9]? Kreuze J F, Perez A, Untiveros M, et al. Complete viral genome sequence and discovery of novel viruses by deep sequencing of small RNAs: A generic method for diagnosis, discovery and sequencing of viruses[J]. Virology, 2009, 388(1): l-7.

    [10]????? Alangar Ishwara Bhat,Thomas Hohn, Ramasamy Selvarajan, et al. Badnaviruses: the current global scenario[J]. Viruses, 2016, 8(6): 177-206.

    [11]????? Kashif M, Pietil? S, Artola K, et al. Detection of viruses in sweetpotato from Honduras and Guatemala augmented by deep-sequencing of small-RNAs[J]. Plant Disease, 2012, 96(10): 1430-1437.

    [12]????? Paprotka T, Boiteux L S, Fonseca M E N, et al. Genomic diversity of sweet potato geminiviruses in a Brazilian germplasm bank[J].Virus Research,2010,149(2):224-233.

    [13]????? Adane A. Associated viruses threatening sweetpotato improvement and production in Ethiopia[J]. African Crop Science Journal, 2010, 18(4): 207-213.

    [14]????? Barkley N A, Pinnow D L, Wang M L, et al. Detection and classification of SPLCV isolates in the U.S. sweetpotato germplasm collection via a real-time PCR assay and phylogenetic analysis[J]. Plant Disease, 2011, 95(11): 1385-1391.

    [15]????? 董? 芳, 張道微, 黃艷嵐, 等. 湖南甘薯種質(zhì)資源曲葉病毒檢測分析初報[J]. 植物遺傳資源學(xué)報, 2017, 18(6): 1088-1104.

    [16]????? 李光艷. 病毒復(fù)合侵染對山東甘薯主栽品種的影響及轉(zhuǎn)錄組分析[D]. 泰安: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué), 2020.

    [17]????? 黃艷嵐, 張道微, 董? 芳, 等. Small RNA深度測序鑒定甘薯種質(zhì)的甘薯曲葉病毒[J]. 分子植物育種, 2019, 17(11): 3641-3649.

    [18]???? 黃艷嵐, 張超凡, 鄒學(xué)校. 甘薯桿狀病毒湖南分離物基因組全序列測定及比較分析[J]. 植物病理學(xué)報, 2019, 49(6): 790-798.

    [19]????? 黃艷嵐, 張超凡. 甘薯葉片基因組DNA提取方法[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011(1): 4-6.

    [20]????? Kumar S, Stecher G, Tamura K. MEGA7: Molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets[J]. Molecular Biology Evolution, 2016, 33(7): 1870-1874.

    [21]????? Liu Q L, Wang Y J, Zhang Z C, et al. Diversity of sweepoviruses infecting sweet potato in China[J]. Plant Disease, 2017, 101(12): 2098-2103.

    [22]????? Dum?n A D, Caro B A E, Mattio M F, et al. Co-infection with a wheat rhabdovirus causes a reduction inmal derío cuarto virus titer in its planthopper vector[J]. Bull Entomol Res, 2017, 108(2): 232-240.

    [23]????? 劉? 微, 史曉斌, 唐? 鑫, 等. 云南番茄褪綠病毒和番茄黃化曲葉病毒復(fù)合侵染的分子鑒定[J]. 園藝學(xué)報, 2018, 45(3): 552-560.

    [24]????? 尹躍艷, 盧? 訓(xùn), 李婷婷, 等. 云南番茄褪綠病毒和菜豆金色花葉病毒屬病毒復(fù)合侵染番茄的分子鑒定[J]. 植物保護(hù)學(xué)報, 2018, 45(4): 919-920.

    [25]????? 代惠潔, 程? 琳, 竺曉平, 等. 煙粉虱傳播的番茄褪綠病毒和番茄黃化曲葉病毒對不同番茄品種的復(fù)合侵染[J]. 植物保護(hù)學(xué)報, 2017, 44(3): 453-459.

    [26]????? 王少立, 譚瑋萍, 楊園園, 等. 山東省辣椒主要病毒種類的分子檢測與鑒定[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2017, 50(14): 2728-2738.

    [27]????? 趙麗玲, 鐘? 靜, 尹躍艷, 等. 云南凹頭莧上分離到的2種菜豆金色花葉病毒屬病毒基因組結(jié)構(gòu)特征[J]. 植物病理學(xué)報, 2017, 47(6): 738-746.

    [28]????? Li P B, Jing C C, Wang Z Y, et al. First report of tobacco curly shoot virus infecting Phaseolus vulgaris in China[J]. Plant Disease, 2019, 103(1): 165.

    [29]????? 姜珊珊, 謝? 禮, 吳? 斌, 等. 山東甘薯主要病毒的鑒定及多樣性分析[J]. 植物保護(hù)學(xué)報, 2017, 44(1): 93-102.

    [30]????? 蔣素華, 程喜梅, 宋彩霞, 等. 三種甘薯病毒多重RT-PCR檢測技術(shù)的建立[J]. 植物保護(hù), 2017, 43(1): 126-130.

    [31]????? 王? 爽, 田雨婷, 喬? 奇, 等. 侵染甘薯的菜豆金色花葉病毒屬病毒和甘薯褪綠矮化病毒多重PCR檢測方法的建立與應(yīng)用[J]. 植物保護(hù)學(xué)報, 2018, 45(6): 1427-1428.

    [32]????? Mbanzibwa D R, Tugume A K, Chiunga E, et al. Small RNA deep sequencing-based detection and further evidence of DNA viruses infecting sweetpotato plants in Tanzani[J]. Annals of Applied Biology, 2014, 165(3): 329-339.

    [33]????? Kim J, Yang J W, Kwak H R, et al. Virus incidence of Sweet potato in Korea from 2011 to 2014[J]. Plant Pathology Jorunal, 2017, 33(5): 467-477.

    責(zé)任編輯:沈德發(fā)

    男女边摸边吃奶| 亚洲av成人精品一二三区| 精品久久久精品久久久| 亚洲人成网站在线播| 国产片特级美女逼逼视频| 久久99热6这里只有精品| 曰老女人黄片| 欧美激情国产日韩精品一区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 久久久久久久国产电影| 亚洲美女视频黄频| 91久久精品电影网| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日韩 亚洲 欧美在线| 成人亚洲欧美一区二区av| 免费大片18禁| 久久国产精品大桥未久av | .国产精品久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 寂寞人妻少妇视频99o| 女人久久www免费人成看片| 国产精品久久久久成人av| 久久精品夜色国产| 人体艺术视频欧美日本| 三级国产精品欧美在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 老熟女久久久| 日韩成人av中文字幕在线观看| 精品酒店卫生间| 久热久热在线精品观看| 亚洲精品国产av成人精品| 99久国产av精品国产电影| 在线免费观看不下载黄p国产| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲国产精品成人久久小说| 日本av免费视频播放| 久久久久久久国产电影| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲伊人久久精品综合| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 美女主播在线视频| 国产伦理片在线播放av一区| 久久青草综合色| 日韩精品有码人妻一区| 麻豆成人av视频| 蜜桃在线观看..| 国产成人freesex在线| 中文字幕久久专区| 插阴视频在线观看视频| 男女国产视频网站| 久久久久国产网址| 免费看日本二区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲性久久影院| 青春草国产在线视频| √禁漫天堂资源中文www| 日韩一本色道免费dvd| 男女啪啪激烈高潮av片| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲成人av在线免费| 黑人猛操日本美女一级片| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲国产精品国产精品| 黄色一级大片看看| 亚洲av国产av综合av卡| 永久免费av网站大全| 午夜视频国产福利| av女优亚洲男人天堂| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 国产精品一区二区性色av| 欧美日韩精品成人综合77777| 熟女av电影| 成人午夜精彩视频在线观看| 三级经典国产精品| 成人亚洲欧美一区二区av| 日日啪夜夜爽| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲情色 制服丝袜| av网站免费在线观看视频| 久久久午夜欧美精品| 在线观看av片永久免费下载| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产乱来视频区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日韩av不卡免费在线播放| 搡女人真爽免费视频火全软件| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 性色av一级| 亚洲精品国产成人久久av| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 少妇人妻一区二区三区视频| 精品久久久久久电影网| 久久久久久久精品精品| 9色porny在线观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 中国美白少妇内射xxxbb| 欧美一级a爱片免费观看看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产高清有码在线观看视频| 三级国产精品片| 啦啦啦啦在线视频资源| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲美女黄色视频免费看| av福利片在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 尾随美女入室| 高清视频免费观看一区二区| 成人午夜精彩视频在线观看| 在线观看www视频免费| 天堂8中文在线网| 日本vs欧美在线观看视频 | 亚洲,一卡二卡三卡| 高清黄色对白视频在线免费看 | 日韩一本色道免费dvd| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲欧美日韩东京热| 三级国产精品片| a级毛片免费高清观看在线播放| 成人国产麻豆网| 亚洲欧美精品专区久久| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲精品日韩av片在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产日韩欧美在线精品| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产成人aa在线观看| 人妻系列 视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久精品夜色国产| 黄色怎么调成土黄色| 最新中文字幕久久久久| 制服丝袜香蕉在线| 亚洲av二区三区四区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 免费看av在线观看网站| 视频中文字幕在线观看| 最近最新中文字幕免费大全7| av在线观看视频网站免费| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品熟女久久久久浪| 国产精品女同一区二区软件| 久久久久视频综合| 一区二区三区四区激情视频| 一本久久精品| 久久午夜福利片| 欧美日韩在线观看h| 两个人的视频大全免费| 国产男女超爽视频在线观看| 国产 一区精品| 视频中文字幕在线观看| 久久久久精品性色| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 777米奇影视久久| 国产精品无大码| 91久久精品电影网| 最近中文字幕2019免费版| 99热国产这里只有精品6| 国产免费视频播放在线视频| 免费看不卡的av| 国产黄频视频在线观看| 日本av免费视频播放| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲av中文av极速乱| 深夜a级毛片| 日本av免费视频播放| 国产一区二区三区av在线| 日日啪夜夜撸| 午夜免费观看性视频| tube8黄色片| av在线老鸭窝| 91成人精品电影| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲国产精品成人久久小说| 免费黄色在线免费观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 日本黄大片高清| 欧美精品国产亚洲| 老司机影院成人| 黄色欧美视频在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲精品乱久久久久久| 在线观看免费高清a一片| 国产黄色视频一区二区在线观看| 水蜜桃什么品种好| 国产乱来视频区| 国产中年淑女户外野战色| 精品人妻熟女av久视频| 热re99久久精品国产66热6| 国产欧美日韩精品一区二区| 蜜桃在线观看..| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产在线一区二区三区精| 免费看不卡的av| 午夜免费观看性视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 男人添女人高潮全过程视频| 性色av一级| 久久久久久久大尺度免费视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 在线观看一区二区三区激情| 中文在线观看免费www的网站| 国产精品一区www在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲久久久国产精品| 十八禁高潮呻吟视频 | 精品少妇黑人巨大在线播放| 免费黄频网站在线观看国产| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产亚洲最大av| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 高清av免费在线| 欧美精品国产亚洲| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 狂野欧美激情性bbbbbb| 一级毛片我不卡| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 人妻少妇偷人精品九色| 久热久热在线精品观看| 国产午夜精品一二区理论片| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产高清有码在线观看视频| 偷拍熟女少妇极品色| 国产综合精华液| 久久 成人 亚洲| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| av视频免费观看在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 人妻 亚洲 视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产在线男女| 国产男女超爽视频在线观看| 观看av在线不卡| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲精品国产成人久久av| 我的女老师完整版在线观看| 黑人高潮一二区| 国产综合精华液| 久久99热6这里只有精品| av专区在线播放| 色94色欧美一区二区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 97在线人人人人妻| 精品亚洲成国产av| 97超碰精品成人国产| 国产精品一区二区在线观看99| 欧美少妇被猛烈插入视频| 精品人妻熟女av久视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 精品一区二区三卡| 18+在线观看网站| 在线看a的网站| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 高清视频免费观看一区二区| 视频区图区小说| 在线 av 中文字幕| 久久亚洲国产成人精品v| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产精品一区二区在线不卡| 热re99久久精品国产66热6| 国产成人freesex在线| 最黄视频免费看| 精品久久久精品久久久| 成人午夜精彩视频在线观看| 午夜av观看不卡| 能在线免费看毛片的网站| tube8黄色片| 女人久久www免费人成看片| 日韩av免费高清视频| 免费看日本二区| 亚洲欧美精品自产自拍| 夫妻午夜视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 秋霞伦理黄片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 我要看黄色一级片免费的| 成人免费观看视频高清| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 欧美国产精品一级二级三级 | 你懂的网址亚洲精品在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲在久久综合| 最近中文字幕2019免费版| 国产 一区精品| 99久久精品国产国产毛片| 黄色配什么色好看| av国产精品久久久久影院| 久久久欧美国产精品| 黑人高潮一二区| 国产在线一区二区三区精| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产精品伦人一区二区| 欧美日韩在线观看h| 99热6这里只有精品| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲国产最新在线播放| 久久久久久久久久人人人人人人| 91精品伊人久久大香线蕉| 免费看光身美女| 国产精品一区二区在线不卡| 蜜桃在线观看..| 午夜久久久在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产成人91sexporn| 欧美日韩亚洲高清精品| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲av综合色区一区| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产亚洲精品久久久com| 成人亚洲精品一区在线观看| av国产精品久久久久影院| 国产伦在线观看视频一区| 男女国产视频网站| 在线播放无遮挡| 激情五月婷婷亚洲| 97超碰精品成人国产| 久久久精品94久久精品| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 成人特级av手机在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 大码成人一级视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 日韩中字成人| 国产爽快片一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 热re99久久精品国产66热6| 免费高清在线观看视频在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 街头女战士在线观看网站| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲av国产av综合av卡| 乱系列少妇在线播放| 全区人妻精品视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产av精品麻豆| 成人无遮挡网站| 黄色日韩在线| 最近手机中文字幕大全| 亚洲电影在线观看av| 性色avwww在线观看| 亚洲成色77777| 卡戴珊不雅视频在线播放| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 久久久久精品久久久久真实原创| 成年av动漫网址| 最黄视频免费看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 综合色丁香网| 国产成人freesex在线| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久av网站| 激情五月婷婷亚洲| 高清视频免费观看一区二区| 国产av国产精品国产| 黄色一级大片看看| av国产久精品久网站免费入址| 国产男女超爽视频在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 日本-黄色视频高清免费观看| 婷婷色综合www| 在线天堂最新版资源| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美xxⅹ黑人| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产成人精品无人区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲精品成人av观看孕妇| 一级,二级,三级黄色视频| 国产 精品1| 亚洲精品视频女| 在线免费观看不下载黄p国产| 2022亚洲国产成人精品| 91精品国产九色| 国产熟女午夜一区二区三区 | 欧美日本中文国产一区发布| 精品少妇内射三级| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久国内精品自在自线图片| 久久久久久久久久久久大奶| 国产亚洲一区二区精品| 日韩中字成人| 中文在线观看免费www的网站| 各种免费的搞黄视频| 欧美97在线视频| 国产男女内射视频| 日韩成人伦理影院| 国产黄片视频在线免费观看| 夫妻性生交免费视频一级片| 免费观看的影片在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 一级黄片播放器| 国产精品无大码| 少妇熟女欧美另类| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 免费看日本二区| 交换朋友夫妻互换小说| 卡戴珊不雅视频在线播放| av视频免费观看在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美成人午夜免费资源| 哪个播放器可以免费观看大片| 免费黄色在线免费观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 一个人免费看片子| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲天堂av无毛| 成年人午夜在线观看视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产综合精华液| 日本欧美视频一区| freevideosex欧美| 日韩欧美精品免费久久| 欧美激情国产日韩精品一区| 高清不卡的av网站| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲精品日本国产第一区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产69精品久久久久777片| 少妇被粗大猛烈的视频| 新久久久久国产一级毛片| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产伦精品一区二区三区四那| 成人漫画全彩无遮挡| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 大片免费播放器 马上看| 高清午夜精品一区二区三区| 国产 精品1| 街头女战士在线观看网站| 中文字幕免费在线视频6| 精品久久久久久电影网| 精品一品国产午夜福利视频| 有码 亚洲区| tube8黄色片| 日韩大片免费观看网站| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久影院123| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 男女国产视频网站| 伦理电影大哥的女人| 99热网站在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| www.色视频.com| 亚洲图色成人| 欧美日韩精品成人综合77777| 欧美丝袜亚洲另类| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 日韩av免费高清视频| 新久久久久国产一级毛片| 婷婷色综合大香蕉| 国产精品一二三区在线看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产精品无大码| 伊人久久国产一区二区| 免费av中文字幕在线| 欧美人与善性xxx| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲精品aⅴ在线观看| 性色av一级| 精品一区二区免费观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 黄色毛片三级朝国网站 | 欧美日韩av久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 国产在视频线精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 中文字幕免费在线视频6| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 日韩成人伦理影院| 一级毛片我不卡| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产成人精品婷婷| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲欧美清纯卡通| 日本与韩国留学比较| 日日啪夜夜爽| 九色成人免费人妻av| 伦精品一区二区三区| 午夜老司机福利剧场| 久久久久久久久久久久大奶| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 五月伊人婷婷丁香| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久综合国产亚洲精品| 全区人妻精品视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 极品人妻少妇av视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产精品久久久久久av不卡| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲人成网站在线播| 一边亲一边摸免费视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲国产色片| 99热国产这里只有精品6| 成人美女网站在线观看视频| 国产精品女同一区二区软件| 日本免费在线观看一区| 久久精品久久久久久久性| 一级毛片 在线播放| 18+在线观看网站| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲不卡免费看| √禁漫天堂资源中文www| 女人久久www免费人成看片| a 毛片基地| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产黄片视频在线免费观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 欧美丝袜亚洲另类| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲久久久国产精品| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲真实伦在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 国产探花极品一区二区| 在线 av 中文字幕| 欧美精品一区二区免费开放| 成人美女网站在线观看视频| 久久97久久精品| 亚洲电影在线观看av| 婷婷色av中文字幕| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 黄色一级大片看看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 久久毛片免费看一区二区三区| 美女福利国产在线| 亚洲av中文av极速乱| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久久影院123| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 青春草国产在线视频| 久久久久视频综合| 久久久久国产网址| 日韩 亚洲 欧美在线| 精品一区二区免费观看| 18+在线观看网站| 午夜福利影视在线免费观看| 国产 一区精品| 国产淫语在线视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 最新的欧美精品一区二区| 一个人免费看片子| 综合色丁香网| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 老熟女久久久| 国产精品女同一区二区软件| 永久网站在线| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲内射少妇av| 黄色日韩在线| 麻豆乱淫一区二区| 精品午夜福利在线看| 九草在线视频观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产精品久久久久成人av| 精华霜和精华液先用哪个| 国产伦精品一区二区三区四那| 一区二区三区免费毛片| 只有这里有精品99| 欧美97在线视频| 99久久综合免费| av播播在线观看一区| 日韩电影二区| 成人无遮挡网站| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久久精品免费免费高清| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日本av免费视频播放| 国产欧美日韩精品一区二区| 日韩欧美精品免费久久| 国产熟女午夜一区二区三区 | 久久99精品国语久久久| 日本91视频免费播放| 国精品久久久久久国模美| 这个男人来自地球电影免费观看 | 日韩人妻高清精品专区| 丁香六月天网| 丰满迷人的少妇在线观看| 两个人的视频大全免费| 亚洲国产精品国产精品| 校园人妻丝袜中文字幕| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产成人免费无遮挡视频| 只有这里有精品99| 免费人成在线观看视频色| 丰满少妇做爰视频| 久久国产乱子免费精品| 国产午夜精品一二区理论片|