沉默信息調(diào)節(jié)因子1 在新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎腸組織中的表達(dá)特點(diǎn)

陳 銳，趙 云，趙曉霞，馬 東，韓一江，賴登明，顧偉忠，鈄金法

1.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院新生兒外科，杭州 310052；2.國家兒童健康與疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心，杭州 310052；3.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院病理科，杭州 310052

新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎（necrotizing enterocolitis，NEC）是早產(chǎn)兒和極低出生體質(zhì)量兒常見的嚴(yán)重胃腸道疾病，是早產(chǎn)兒出生后15～60 d 內(nèi)最常見的死亡原因。NEC 的發(fā)病率和死亡率很高，目前保守的治療方式一般僅限于腸道休息、抗生素和對癥支持治療，但其中約50%的患兒仍需要手術(shù)；術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率高，預(yù)后不佳［1］。目前NEC 確切的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，有文獻(xiàn)［2-3］指出NEC 患兒腸道中炎癥介質(zhì)之間的表達(dá)失衡會促進(jìn)NEC 進(jìn)展。炎癥介質(zhì)失衡的機(jī)制一方面是Toll 樣受體4 （Toll-like receptor 4，TLR4）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和IL-18 等促炎介質(zhì)表達(dá)增加，另一方面是TLR9、IL-1 受體拮抗劑（IL-1 receptor antagonist， IL-1Ra）、 IL-10 和轉(zhuǎn)化生長因子β2（transforming growth factor β2，TGF-β2）等抗炎介質(zhì)表達(dá)減少。這種失衡會導(dǎo)致惡性循環(huán)，過度的促炎信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和腸道損傷相互強(qiáng)化，促進(jìn)了NEC 的進(jìn)展［4］。因此，尋找能降低炎癥反應(yīng)、減輕細(xì)胞損傷的蛋白可能可以抑制NEC的進(jìn)展，降低手術(shù)概率或并發(fā)癥發(fā)生率。

沉默信息調(diào)節(jié)因子1 （silent information regulator transcript 1，SIRT1）是一種去乙?；?，在炎癥反應(yīng)過程中能通過抑制核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）這一炎癥信號通路來減少炎癥介質(zhì)的表達(dá)與釋放，進(jìn)而降低炎癥損傷。SIRT1也能夠減輕細(xì)胞損傷、減少細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖、延長細(xì)胞壽命，對細(xì)胞起到保護(hù)作用［5］。目前，SIRT1與炎癥關(guān)系的研究多集中在成人心血管、肝臟、腎臟領(lǐng)域，在兒科領(lǐng)域尤其是與NEC相關(guān)的研究不多。因此，本研究旨在探究SIRT1在NEC腸管組織中的表達(dá)特點(diǎn)及其可能的作用機(jī)制，為NEC的綜合治療提供新思路。

1 對象與方法

1.1 研究對象、分組及資料收集

研究對象來源于2018 年6 月—2020 年10 月經(jīng)浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院新生兒外科手術(shù)治療的NEC 患兒80例。納入標(biāo)準(zhǔn)：NEC病史診斷明確的新生兒，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考第4版《小兒外科學(xué)》［6］。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他腸道畸形如先天性巨結(jié)腸、先天性小腸閉鎖、胎糞性腹膜炎等，特發(fā)性穿孔，未切除腸管僅行腸造瘺。將經(jīng)外科手術(shù)治療，組織樣本為炎癥壞死腸管的NEC 患兒40 例設(shè)為觀察組；將經(jīng)保守治療后發(fā)生腸狹窄，再次選擇外科手術(shù)治療，組織樣本為切緣腸管的NEC患兒40例為對照組。

收集觀察組和對照組患兒的性別、孕周、出生體質(zhì)量、分娩方式、術(shù)前24 h 內(nèi)血清中的降鈣素原（procalcitonin，PCT）、超敏C 反應(yīng)蛋白（hypersensitive C reactive protein，hs-CRP）、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、γ干擾素（interferon-γ，IFN-γ）等臨床資料。本研究已通過浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院倫理委員會審批（審批號2021-IRB-048）。

1.2 研究方法

1.2.1 主要試劑和細(xì)胞 選用SD雌性大鼠小腸上皮細(xì)胞IEC-6 細(xì)胞系［購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心（American Type Culture Collection，ATCC）］。一抗：小鼠抗人SIRT1抗體（美國Abcam 公司，ab110304），兔抗人重組Anti-Smad3抗體（美國Abcam公司，ab40854），兔抗人NF-κB p65 抗體C-20 （美國Santa Cruz Biotechnology 公司，sc-372），兔抗人TGF-β1 抗體V （美國Santa Cruz Biotechnology公司，sc-146）。Cell Counting Kit-8（CCK8）細(xì)胞增殖試劑盒（日本同仁），Sirt1［購于美國Invitrogen公司的干擾小RNA（small interfering RNA，siRNA）］。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色和蘇木精-伊紅染色 免疫組織化學(xué)（免疫組化）染色方法（EnVisionTM 二步法）：所有標(biāo)本用10%中性緩沖福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋后連續(xù)切片，厚約4 μm，每例標(biāo)本切取4 張。常規(guī)脫蠟至水?？乖迯?fù)，采用高溫高壓修復(fù)［采用0.01 mmol/L 乙二胺四乙酸（ethylene diamine，EDTA）緩沖溶液，pH 值為9.0］；在冒氣后計(jì)時(shí)2 min 30 s，再關(guān)閉電源保溫4 min，然后流水沖洗至室溫。蒸餾水洗，畫圈。3%H2O2水溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶10 min。磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）洗5 min×3次。滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗（工作濃度均為1∶150），37 ℃孵育60 min。PBS 沖洗，5 min×3 次。滴加抗兔IgG 抗體-HRP 多聚體的二抗，37 ℃孵育30 min。PBS 沖洗，5 min×3 次。DAB 顯色液（臨用前配置）顯色1 min，顯微鏡下控制反應(yīng)，自來水沖洗終止反應(yīng)。Harris蘇木精復(fù)染細(xì)胞核3 min，脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。細(xì)胞核襯染呈藍(lán)色。

蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，H-E staining，H-E 染色）方法：石蠟切片脫蠟至水（依次將切片放入二甲苯Ⅰ10 min、二甲苯Ⅱ10 min、無水乙醇Ⅰ5 min、無水乙醇Ⅱ5 min、95%酒精5 min、90%酒精5 min、80%酒精5 min、70%酒精5 min，蒸餾水洗）。切片入Harris蘇木精染色4 min，自來水洗；1%鹽酸酒精分化5 s，自來水沖洗；0.6%氨水返藍(lán)，流水沖洗。伊紅染液中染色1 min。將切片依次放入95%酒精Ⅰ5 min、95% 酒精Ⅱ5 min、無水乙醇Ⅰ5 min、無水乙醇Ⅱ5 min、二甲苯Ⅰ5 min、二甲苯Ⅱ5 min 中脫水透明，將切片從二甲苯中拿出來稍晾干，中性樹膠封片。

1.2.3 免疫組化染色結(jié)果判讀 SIRT1 陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞核，以細(xì)胞核呈現(xiàn)清晰棕色或棕紅色為陽性表達(dá)；Smad3 和TGF-β1 陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，以細(xì)胞呈現(xiàn)清晰的黃、棕色為陽性；NF-κB 陽性表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，以細(xì)胞呈現(xiàn)清晰棕色或褐色為陽性表達(dá)。根據(jù)染色程度和染色細(xì)胞百分比進(jìn)行半定量分析。免疫組化結(jié)果判定：0 分代表陽性細(xì)胞占比＜5%，1 分代表陽性細(xì)胞占比5%～25%，2 分代表陽性細(xì)胞占比＞25%且≤50%，3 分代表陽性細(xì)胞占比＞50%。根據(jù)染色強(qiáng)度評分：0 分代表細(xì)胞無著色，1 分代表細(xì)胞淡黃色，2 分代表細(xì)胞棕黃色，3分代表細(xì)胞棕褐色。將免疫組化結(jié)果與染色強(qiáng)度評分之和作為染色結(jié)果的判定，0～1 分為陰性，≥2分為陽性［7］。

1.2.4 篩選最佳的siRNA-Sirt1序列 將IEC-6 細(xì)胞接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，并在細(xì)胞密度達(dá)到70%左右時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。將7.5 μL Lipofectamine RNAiMAX 稀釋于100 μL不含胎牛血清和抗生素的opti-MEM 中，充分混勻。將75 pmol RNA 稀釋于100 μL 不含胎牛血清和抗生素的opti-MEM 中，輕輕混勻。將Lipofectamine RNAiMAX 稀釋液加入RNA稀釋液中，充分混勻。室溫放置5 min，將200 μL Lipofectamine RNAiMAX 與RNA 混勻液加入至接種了細(xì)胞的6 孔細(xì)胞板中，輕輕搖動，使混合均勻，5 h后換液。48 h 后提取RNA 檢測，檢測方法采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）［8］。篩選出的3 條siRNA-Sirt1基因序列為：5′-GUGGUGAAUAUGCCA-AACUTT-3′，3′-AGUUUGGCAUAUUCACCACTT-5′ （1-siRNA-Sirt1） ；5′-CCUCAAGCGAUGUU-UGAUATT-3′，3′-UAUCAAACAUCGCUUGAGGTT-5′ （2-siRNA-Sirt1）；5′-CAGGAAUCCAAAGGAUAAUTT-3′，3′-AUUAUCC-UUUGGAUUCCUGTT-5′（3-siRNA-Sirt1）。選擇1-siRNA-Sirt1這一條序列完成后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 IEC-6細(xì)胞的CCK8增殖實(shí)驗(yàn) 將細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，3 000 個(gè)/孔。18 h 后轉(zhuǎn)染siRNA，以不干擾任何基因的陰性對照（negative control，NC）為對照組， siRNA-Sirt1為實(shí)驗(yàn)組， 每組 3 個(gè)重復(fù)，Lipofectamine RNAiMAX 的用量為0.3 μL/孔，siRNA 的用量為3 pmol/孔。轉(zhuǎn)染72 h 后吸去培養(yǎng)基，每孔換成含有10%CCK8 的DMEM 完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)1 h。在酶標(biāo)儀上檢測450 nm處的吸光值。

1.2.6 IEC-6 細(xì)胞的Transwell 遷移實(shí)驗(yàn) 將細(xì)胞接種于24 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，1×105個(gè)/孔。18 h 后轉(zhuǎn)染siRNA，以不干擾任何基因的NC 為對照組，將siRNA-Sirt1作為實(shí)驗(yàn)組，每組3個(gè)重復(fù)，Lipofectamine RNAiMAX 的用量為1.5 μL/孔，siRNA 的用量為15 pmol/孔。轉(zhuǎn)染48 h后將細(xì)胞消化打散，各取20 000 個(gè)細(xì)胞，加入Transwell 小室上層，總體積為100 μL，不含胎牛血清，每組用3 個(gè)小室。小室下層中加入600 μL 含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基。24 h 后將小室用4%多聚甲醛固定，然后將上層膜的細(xì)胞輕輕擦除，下層膜的細(xì)胞用4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（4′，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）染色。將染色后的下層膜的細(xì)胞置于熒光顯微鏡下拍照，每個(gè)小室隨機(jī)選取5 個(gè)視野。使用細(xì)胞計(jì)數(shù)軟件統(tǒng)計(jì)出每張照片中細(xì)胞個(gè)數(shù)，每孔中的5個(gè)視野個(gè)數(shù)相加作為一個(gè)數(shù)據(jù)值。

1.2.7 蛋白質(zhì)印跡檢測NF-κB表達(dá)變化 將細(xì)胞接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，50 000個(gè)/孔。18 h后轉(zhuǎn)染RNA，以不干擾任何基因的NC 為對照組，將siRNA-Sirt1作為實(shí)驗(yàn)組，每組2個(gè)重復(fù)，Lipofectamine RNAiMAX的用量為7.5 μL/孔，siRNA的用量為75 pmol/孔。轉(zhuǎn)染48 h后吸去培養(yǎng)基，用PBS洗1遍，提取蛋白。蛋白質(zhì)印跡（Western blotting）方法參考文獻(xiàn)［8］，用ECL 底物進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測，經(jīng)Tanon 4200 全自動化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)曝光后，使用Gel-Pro analyzer 軟件進(jìn)行灰度分析定量。SIRT1 和NF-κB一抗的工作濃度分別為1∶1 000和1∶200。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 23.0和GraphPad Prism 7.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。定量資料經(jīng)正態(tài)分布檢驗(yàn)后，符合正態(tài)分布的以±s表示，采用非配對t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)比較；不符合正態(tài)分布的以M（Q1，Q3）表示，采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患兒一般資料比較

2 組患兒的一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。2 組患兒的術(shù)中圖片顯示，NEC急性炎癥期可見腸壁發(fā)生透壁壞死，腸管淤血明顯（圖1A）；NEC腸狹窄的切緣腸管組織接近于正常腸管，無急性炎癥改變（圖1B）。H-E 染色顯示，觀察組NEC 炎癥壞死腸管中可見大量的紅細(xì)胞滲出，大量的中性粒細(xì)胞浸潤，腸管組織糜爛，結(jié)構(gòu)不清（圖1C）；對照組NEC 保守治療后腸狹窄患兒腸管未見急性炎癥改變，切緣腸管組織結(jié)構(gòu)存在（圖1D）。

表1 2組患兒的一般資料比較Tab 1 Comparison of the general data between the two groups

圖1 2組患兒腸管組織的術(shù)中照片和H-E染色（×50）Fig 1 Intraoperative photographs and H-E staining images of intestinal tissues in the two groups(×50)

2.2 2組患兒血清中的炎癥因子比較

與對照組相比，觀察組患兒術(shù)前24 h 內(nèi)血清中的hs-CRP、PCT、IL-6、IL-10 顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P=0.000）；IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γ的變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表2）。

表2 2組患兒血清中炎癥因子表達(dá)水平比較Tab 2 Comparison of expression levels of inflammatory factors in serum of the two groups

2.3 2組患兒的SIRT1、NF-κB、TGF-β1和Smad3表達(dá)結(jié)果

SIRT1在腸管的黏膜層、黏膜下層和肌層均可見陽性表達(dá)，在NEC 炎癥壞死腸管組織中陽性表達(dá)較對照組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），主要減少在黏膜層和黏膜下層；NF-κB 在腸管的黏膜層、黏膜下層和肌層均可見陽性表達(dá)，在NEC 炎癥壞死腸管組織中陽性表達(dá)較對照組上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），主要增加在黏膜層和黏膜下層；TGF-β1 和Smad3 主要表達(dá)在黏膜層，2 組之間表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2和表3）。

表3 SIRT1、NF-κB、TGF-β1和Smad3在2組間的表達(dá)差異Tab 3 Differential expression of SIRT1，NF-κB，TGF-β1 and Smad3 in the two groups

圖2 光學(xué)顯微鏡下觀察SIRT1、NF-κB、TGF-β1和Smad3在2組間的表達(dá)（×200）Fig 2 Expression of SIRT1,NF-κB,TGF-β1 and Smad3 in the two groups by optical microscope(×200)

2.4 SIRT1與NF-κB表達(dá)的關(guān)系

通過免疫組化半定量評分發(fā)現(xiàn)，在NEC 炎癥壞死腸管組織中SIRT1 與NF-κB 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.592，P=0.000）。在體外培養(yǎng)大鼠小腸上皮細(xì)胞IEC-6 中，siRNA抑制IEC-6 細(xì)胞中Sirt1的mRNA 和蛋白表達(dá)后（圖3A），IEC-6細(xì)胞中的NF-κB表達(dá)升高（圖3B、C）。

圖3 IEC-6細(xì)胞中SIRT1蛋白與NF-κB蛋白的表達(dá)關(guān)系Fig 3 Relationship between the expression of SIRT1 protein and NF-κB protein in IEC-6 cells

2.5 SIRT1對腸上皮細(xì)胞增殖和遷移能力的影響

體外培養(yǎng)IEC-6 細(xì)胞，抑制腸上皮細(xì)胞IEC-6 中的SIRT1 表達(dá)后，大鼠小腸上皮細(xì)胞IEC-6 的增殖和遷移能力明顯減弱（圖4）。

圖4 SIRT1對大腸上皮細(xì)胞的增殖和遷移能力的影響Fig 4 Effects of SIRT1 on the proliferation and migration of intestinal epithelial cells

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，SIRT1 在NEC 炎癥壞死腸管組織中呈低表達(dá)，NF-κB 在NEC 炎癥壞死腸管組織中呈高表達(dá)，觀察組患兒血清中的hs-CRP、PCT、IL-6 以及IL-10 較對照組升高。這一現(xiàn)象與張嵐等［7］的發(fā)現(xiàn)一致。分析產(chǎn)生這一現(xiàn)象的原因可能是SIRT1 表達(dá)降低減少了對NF-κB 炎癥信號通路的抑制作用，從而導(dǎo)致炎癥因子表達(dá)升高，而過度的炎癥反應(yīng)會觸發(fā)NEC 的進(jìn)展［9］。研究［10］發(fā)現(xiàn)，激活NF-κB 信號通路能促進(jìn)腸上皮細(xì)胞釋放炎癥因子如TNF-α、IL-6、IL-1β 等，加重NEC 的進(jìn)展，證實(shí)了NF-κB 調(diào)控的炎癥信號通路是NEC 急性炎癥期的重要分子機(jī)制。抑制NF-κB 信號通路的激活，也能夠減輕NEC 的進(jìn)展［11］。本研究結(jié)果顯示，抑制IEC-6 細(xì)胞中的SIRT1 表達(dá)后NF-κB 表達(dá)升高。這提示了在NEC的發(fā)展中，SIRT1 可能通過調(diào)控NF-κB 信號通路來降低炎癥因子的表達(dá)，這一機(jī)制在其他領(lǐng)域已經(jīng)得到研究［12-14］證實(shí)。本研究的免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NF-κB 信號通路上的炎癥細(xì)胞因子TGF-β1 和Smad3 在NEC 的腸管組織中表達(dá)無明顯差異，分析可能的原因是NEC 急性期炎癥過程中SIRT1/NF-κB/TGF-β1/Smad3 這一炎癥通路不參與NEC 的發(fā)生發(fā)展。

SIRT1能夠通過去乙?；饔谜{(diào)控組蛋白和非組蛋白來參與生物體內(nèi)的多種細(xì)胞生物學(xué)功能，如細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖遷移、細(xì)胞分裂、炎癥反應(yīng)等［15］。已有的研究證實(shí)SIRT1 能夠抑制腸上皮細(xì)胞的凋亡［16］，其過表達(dá)能促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的增殖和遷移能力［17］。在炎癥性腸病中發(fā)現(xiàn)SIRT1 能調(diào)節(jié)腸道菌群、抑制炎癥來維持腸黏膜屏障功能的穩(wěn)定，具有保護(hù)腸上皮細(xì)胞的功能［18］。本研究通過抑制SIRT1的mRNA 和蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)IEC-6細(xì)胞的增殖能力和遷移能力明顯減弱，這也說明SIRT1 對腸上皮細(xì)胞具有保護(hù)作用。

早產(chǎn)兒相比足月兒更容易發(fā)生NEC 的一個(gè)主要原因是早產(chǎn)兒腸道屏障功能不完善；其機(jī)制可能是因?yàn)樵绠a(chǎn)兒腸上皮細(xì)胞的緊密連接蛋白表達(dá)不足，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性增加，更易發(fā)生NEC［19］。早產(chǎn)兒腸上皮細(xì)胞受到脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激后能夠表達(dá)更多的炎癥因子來促進(jìn)自身凋亡，抑制其增殖和遷移，減少腸黏膜的損傷修復(fù)，最終導(dǎo)致腸損傷。本研究的H-E 染色結(jié)果也可提示NEC 患兒腸管的黏膜層和黏膜下層破壞明顯。因此減少腸上皮細(xì)胞的凋亡，保護(hù)腸上皮細(xì)胞的增殖和遷移能力有助于維持腸道屏障功能的穩(wěn)定。本研究發(fā)現(xiàn)SIRT1 能夠促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的增殖和遷移，分析其可能機(jī)制，即在NEC 的進(jìn)展過程中，SIRT1 表達(dá)的減少導(dǎo)致其對腸上皮細(xì)胞增殖和遷移的保護(hù)能力下降，使得其更容易受到炎癥因子的損害，從而加重NEC。

本研究分析了SIRT1 影響NEC 的2 種可能的機(jī)制，根據(jù)已有研究推測SIRT1 可能還通過其他途徑來影響NEC。在膿毒癥研究［20］中發(fā)現(xiàn)，LPS 能夠通過激活內(nèi)皮細(xì)胞中的TLR4 表達(dá)，抑制SIRT1 表達(dá)，增加內(nèi)皮細(xì)胞的通透性。早產(chǎn)兒發(fā)生NEC 的過程中，LPS 也能夠刺激腸壁固有層免疫細(xì)胞表面TLR4 的表達(dá)促進(jìn)炎癥反應(yīng)［21］。因此，推測SIRT1 在NEC 炎癥壞死腸管中的低表達(dá)可能是由于LPS 通過激活TLR4 信號通路來抑制SIRT1 表達(dá)，這一機(jī)制還需進(jìn)一步研究證實(shí)。

早產(chǎn)兒更容易缺血缺氧也是NEC的發(fā)病機(jī)制之一，其原因可能是早產(chǎn)兒抗氧化作用與氧化應(yīng)激損傷的失衡，導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞易受到損傷和凋亡。研究［7，22］發(fā)現(xiàn)NEC 患兒血清中的活性氧（reactive oxygen specie，ROS）升高，超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）表達(dá)降低；其機(jī)制可能是SIRT1 表達(dá)降低減少了對細(xì)胞的保護(hù)作用，加重了腸組織氧化應(yīng)激損傷。在腸道的缺血再灌注損傷研究［23］中發(fā)現(xiàn)，SIRT1 的特異性激動劑SRT1720 能夠清除生物體內(nèi)的氧自由基，抵抗氧化應(yīng)激損傷，降低炎癥因子TNF-α 和IL-6 等釋放，減少腸上皮細(xì)胞的凋亡。因此推測，SIRT1在NEC炎癥壞死腸管組織中的低表達(dá)可能導(dǎo)致細(xì)胞抵抗氧化應(yīng)激損傷的能力下降，進(jìn)而加重NEC 的進(jìn)展，這一機(jī)制也需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，SIRT1 能抑制NF-κB 炎癥信號通路的表達(dá)，減少炎癥因子的產(chǎn)生。另一可能的機(jī)制是SIRT1 在NEC 炎癥壞死腸管組織中低表達(dá)，在NEC 的進(jìn)展中可能起到了保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的增殖和遷移能力來維持腸黏膜屏障功能的穩(wěn)定，減少腸管損傷。本研究旨在初步發(fā)現(xiàn)SIRT1 在NEC 炎癥壞死腸管組織中的表達(dá)特點(diǎn)和可能機(jī)制，拓展SIRT1 在兒科領(lǐng)域中的研究，為NEC的綜合治療提供新的靶點(diǎn)和思路。