甪里艾葉粉對蛋雞產蛋性能、血清生化指標及抗氧化能力的影響

■畢文明 雷雪芹 徐廷生 宋 禎 白俊艷

(1.河南科技大學動物科技學院，洛陽市優(yōu)質禽種質資源與遺傳繁育重點實驗室，河南洛陽 471023；2.洛陽市伊濱區(qū)畜牧獸醫(yī)防疫檢疫中心，河南洛陽 471934)

甪里艾產于河南省汝陽縣，有2 000 余年的栽培使用歷史。據《重修商山廟碑記》和《伊陽縣志》（汝陽縣古時稱伊陽縣）記載，秦末漢初，甪里先生就開始在商山采集艾草，用艾灸為周邊百姓治病，并用汝陽商山虎嶺艾草為漢惠帝劉盈艾灸治療疾病，劉盈賜汝陽商山虎嶺艾草為“甪里艾”。艾草作為飼料添加劑在畜牧生產中使用的研究成果已有報道，認為艾草具有中藥的藥用價值、綠色添加劑的特殊保健價值和配合飼料的均衡營養(yǎng)價值三重功效，可以提高畜禽的生產性能、抗氧化能力、機體免疫力和畜禽產品品質。前期研究發(fā)現，添加1%～3%甪里艾葉粉可以改善50 周齡后海蘭褐蛋雞的產蛋性能，提高產蛋率、平均日產蛋重，減少平均日采食量[1]。在肉仔雞日糧中添加0.25%～2%的艾蒿粉對肉仔雞的抗氧化性能有一定的促進作用，血清中免疫球蛋白（GLB）含量和總抗氧化能力（T-AOC）提高、丙二醛（MDA）含量降低[2]。在飼料中添加艾蒿水提物，肉仔雞的T-AOC、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）活性較對照組顯著升高，而MDA 含量顯著下降[3]。關于艾草粉作為飼料添加劑對產蛋高峰期蛋雞的生產性能及血清生化指標、抗氧化性能的影響研究尚不多見，本試驗以京紅蛋雞為研究對象，探討添加甪里艾葉粉對其產蛋高峰期的產蛋性能、血清生化指標和抗氧化性能的影響，為甪里艾的綜合利用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與儀器

甪里艾葉粉為甪里艾經干燥、粉碎、提絨后的副產品；血清生化指標測定使用全自動生化分析儀（迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司，型號CS-380）；抗氧化指標測定使用酶標儀，T-AOC、GSH-Px、CAT、SOD、MDA試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗設計

試驗選取33周齡京紅蛋雞360只，隨機分為對照組和3個試驗組，每組6個重復，每個重復15只雞。對照組飼喂基礎日糧（見表1），試驗組在基礎日糧中分別添加1%、2%、3%甪里艾葉粉，預試期7 d，正試期63 d。

表1 基礎日糧配方及營養(yǎng)水平

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗在同一雞舍內進行，3層全階梯式籠養(yǎng)，乳頭飲水器飲水，嚴格消毒管理。每天喂料2 次，自由采食，定時檢查雞群、勻料。每天光照時間17 h，早上5：00補光，晚上22：00熄燈，陰天光照不足時補光，定時撿蛋，稱量蛋重、計數，每周測量周耗料量。

1.4 血清采集與處理

備齊5 mL注射器、離心機、離心管、冷藏保溫箱，正試期結束后，每個重復隨機選1只雞抽取雞全血3～5 mL，每組采樣6只，共計采樣24只。分離血清，部分血清進行生化指標測定，其余部分-20 ℃冷凍備用。

1.5 測定項目與方法

1.5.1 產蛋性能的測定

以重復為單位，每天記錄產蛋數、產蛋重量以及不合格蛋數，每周記錄飼料消耗量。計算日產蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比、平均日產蛋重。

日產蛋率（%）=每天產蛋數/每天蛋雞數量×100

平均蛋重（g）=每天產蛋總重/總蛋數

平均日采食量（g）=周耗料重/周飼養(yǎng)雞數總和

料蛋比（g）=耗料重/產蛋重

平均日產蛋重（g）=每天產蛋總重/每天飼養(yǎng)雞數量

1.5.2 血清生化指標測定

測定血清中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、谷草轉氨酶（AST）、谷丙轉氨酶（ALT）、尿酸（UA）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、間接膽紅素（IBIL）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素（UREA）、肌酐（CRE）、葡萄糖（GLU）含量。

1.5.3 血清抗氧化指標測定

取出-20 ℃冷凍血清，水浴解凍，用酶標儀測TAOC、GSH-Px、CAT、SOD、MDA 5種抗氧化指標含量，試驗操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.6 數據統計分析

用Excel 2010初步整理試驗數據，采用SPSS 22.0軟件one-way ANOVA 程序進行方差分析，Duncan’s法多重比較差異性，結果以“平均值±標準差”表示；P<0.01 表示差異極顯著，P<0.05 表示差異顯著，P>0.05表示差異不顯著。

2 結果與分析

2.1 甪里艾葉粉對蛋雞產蛋高峰期產蛋性能的影響（見表2）

表2 蛋雞產蛋性能測定結果

由表2可以看出，添加1%～3%甪里艾葉粉對蛋雞平均蛋重、平均日產蛋重無顯著影響（P>0.05）。但平均日產蛋重隨著艾葉粉添加量的增加有逐漸減少的趨勢。

試驗組日產蛋率隨艾葉添加量的增多而逐漸降低，分別比對照組降低0.62%、1.04%和2.23%；添加1%、2%的甪里艾葉粉對日產蛋率的影響差異不顯著（P>0.05），但添加3%甪里艾葉粉日產蛋率顯著降低（P<0.05）。

添加1%、2%甪里艾葉粉，平均日采食量與對照組無顯著差異（P>0.05），添加3%時采食量極顯著減少（P<0.01）。

料蛋比，除添加3%甪里艾葉粉組顯著低于添加2%組外（P<0.05），其他組間差異不顯著（P>0.05）。

2.2 甪里艾葉粉對蛋雞產蛋高峰期血清生化指標的影響（見表3）

由表3 可知，各試驗組ALT、AST、TP、ALB、GLB、TBIL、ALP、UREA、UA、GLU、TG、TC、IBIL 等13 項血清生化指標組間差異均不顯著（P>0.05）；其中，AST、TP、ALB、GLB、TBIL、TG、TC、UA 8項指標與對照組相比含量降低，GLU指標含量升高。

表3 蛋雞血清生化指標測定結果

與對照組相比，甪里艾葉粉添加組CRE、DBIL指標含量下降，但差異性不同，添加1%和2%時與對照組差異不顯著（P<0.05），但添加3%時與對照組和2%添加組差異顯著（P<0.05）。3%甪里艾葉粉添加組HDL-C含量極顯著升高（P<0.01），分別是對照組及其他試驗組的1.57、1.60、2.06 倍。1%甪里艾葉粉添加組LDL-C含量比對照組顯著降低（P<0.05），其他組之間差異不顯著（P>0.05）。

2.3 甪里艾葉粉對蛋雞產蛋高峰期血清抗氧化指標的影響（見表4）

表4 蛋雞血清抗氧化指標測定結果

由表4 可看出，SOD、T-AOC 兩項指標各組間無顯著差異（P>0.05）。與對照組相比，日糧中添加1%甪里艾葉粉MDA 含量極顯著降低（P<0.01），添加2%、3%甪里艾葉粉顯著降低（P<0.05）。試驗組GSHPx 含量不同程度高于對照組，其中2%甪里艾葉粉添加組極顯著高于對照組（P<0.01）、顯著高于1%和3%甪里艾葉粉添加組（P<0.05）。2%甪里艾葉粉添加組CAT含量極顯著高于對照組和1%添加組（P<0.01）。

3 討論

3.1 甪里艾葉粉對蛋雞產蛋性能的影響

在產蛋高峰期，產蛋率隨著艾葉添加量的增多而逐漸降低。杜森有[4]的研究表明，在飼料中添加1.5%～2.5%的艾葉粉，雞的產蛋率提高1.4%～5.5%；張旭等[5]在蛋雞日糧中添加3%不同品種艾葉草粉，發(fā)現產蛋率提高了7.94%～11.46%。本試驗添加1%～3%的甪里艾葉粉，產蛋率降低了0.62%～2.23%，與上述結果不一致，原因可能與所用雞種、甪里艾葉草粉品種、添加方法等不同有關，本研究使用的是提絨后的艾葉粉，且直接取代基礎日糧，而張旭等[5]用艾葉粉取代日糧中的小麥麩；此外，這與亢君芳等[1]添加1%～3%甪里艾葉粉可以改善50 周齡后的海蘭褐蛋雞的產蛋性能，提高產蛋率的試驗結果也不一致，原因可能是試驗雞的飼養(yǎng)階段不同，亢君芳等[5]所使用的蛋雞為產蛋后期，本試驗則為產蛋高峰期。

徐紅蕊等[6]在基礎飼糧中添加3.0%艾葉粉，結果顯示，常溫條件下，艾葉對蛋雞生產性能、產蛋性能無顯著影響（P>0.05），與本試驗結果基本一致。

艾葉粉中含有生物堿、鞣質類、揮發(fā)油類、糖類等生物活性物質，能夠改善畜禽生殖內分泌系統，促進卵泡發(fā)育，調節(jié)子宮收縮，對蛋雞生殖系統具有促進作用[7]。本試驗中料蛋比出現先微增長后下降現象，與亢君芳等[1]添加艾葉草粉試驗料蛋比逐漸下降結果不完全一致?？赡苁钱f里艾葉中含有的一些生物活性物質刺激了蛋雞食欲，促進腸道蠕動，出現耗料量上升現象；當添加量達到3%時，艾葉草影響了日糧的適口性，進而導致產蛋率下降、采食量減少，間接提高了飼料的利用效率。

3.2 甪里艾葉粉對蛋雞血清生化指標的影響

血清生化指標是評價動物機體新陳代謝及健康狀況的重要指標，是反映動物體內物質代謝和某些組織器官機能狀態(tài)變化的重要特征[8]。張旭等[5]在蛋雞中添加3%不同品種艾葉草粉，發(fā)現血清TC、TG、TP、ALB、UA、GLU、ALT、AST、ALP活性均無顯著影響，與本試驗結果基本一致。

CRE是肌肉中磷酸肌酸的終末代謝產物，不能被重吸收，經腎小球過濾后排出體外，血漿CRE 含量變化反映了腎小球的濾過能力。日糧中添加甪里艾葉粉可降低CRE 含量，當添加量達到3%時效果更為顯著。由此可見，添加甪里艾葉粉可以增強蛋雞腎小球濾過能力和蛋雞磷酸肌酸代謝能力。

UA 是家禽氨基酸代謝的終產物，主要由蛋白質和核酸降解生成，由腎臟排出。血清中尿酸的含量反映了飼糧氨基酸的平衡及雞只機體蛋白質分解代謝水平，常作為檢測禽類腎功能的重要依據。其含量越低，表示蛋白質沉積代謝越旺盛，雞產蛋性能發(fā)揮越充分；其含量升高，則機體排出的氮含量增加，氮的沉積受到影響。本試驗中添加艾葉粉后各組UA含量均呈現下降趨勢，說明添加艾葉粉能提高蛋雞對飼料蛋白及氨基酸的利用率，促進了蛋雞體內蛋白質合成作用，對蛋雞腎臟的保護功能起到促進作用，但隨著艾葉粉添加量的增加UA含量出現上升趨勢。

TP、ALB、GLB為機體蛋白質代謝的重要指標，TP主要由GLB和ALB構成。TP與ALB含量是肝臟功能和營養(yǎng)狀況的重要指標，可反映機體營養(yǎng)狀態(tài)及蛋白質吸收和代謝水平，TP含量高，動物營養(yǎng)狀況良好[9]；ALB主要由肝臟實質細胞產生，其含量可反映肝臟是否受損，ALB 除作為營養(yǎng)物質的載體外，還可維持血漿滲透壓，是機體蛋白質的一個來源，可轉化為組織蛋白，用于修補組織和提供能量；GLB 的高低與機體的免疫性能有一定的關系，能與外來特異性抗原起免疫反應而保護機體，其含量越高機體抗病力越強。本試驗中TP、GLB 含量與對照組相比逐漸下降，ALB 呈現先降后升趨勢，表明添加甪里艾葉粉對蛋雞飼料蛋白的吸收、代謝能力有一定影響，但效果不明顯。

TC、TG 含量是反映機體能量及脂類代謝的重要指標，能反映機體脂類的沉積與代謝狀況，TC、TG 含量越高，機體脂類利用率則越低。TG 是主要的能源物質，可以為動物機體提供必需脂肪酸，也具有運輸養(yǎng)分的功能，能促進動物機體脂溶性維生素的吸收利用，同時也構成血漿脂蛋白，作為蛋黃合成的主要前體物之一，能反映出蛋黃營養(yǎng)供給水平。尚秀國等[10]研究表明，TG 濃度與產蛋雞腹部脂肪水平呈顯著正相關。血清TG含量下降，意味著腹部脂肪沉積減少，有利于蛋雞高產蛋率的維持。蛋雞血液中的TC主要來源于肝臟合成，血液TC過高會導致血管變窄，引起高血壓和心血管閉塞，嚴重的會形成動脈粥樣硬化。此外，TC、TG直接影響乙酞輔酶A的活性以及蛋黃在雞蛋中的形成[11-13]。本試驗中添加艾葉粉可降低TC、TG含量，表明艾草能增強蛋雞對TC、TG利用率，但隨著添加量的增加其利用率有所降低。

ALT 與AST 是反映肝功能代謝是否異常的重要指標，其值越低，肝功能越健康，當肝臟受到損害時，ALT 和AST 就會滲透進入血液。本試驗中，ALT 和AST 各組之間差異不顯著，但試驗組AST 含量均低于對照組，說明甪里艾對蛋雞肝臟功能有一定保護作用。

GLU是禽類能量代謝的主要能源，作為機體能量平衡的重要指標，可反映機體內糖生成與組織消耗間的動態(tài)平衡，對維護機體正常生理功能尤為重要。本試驗中，試驗組GLU 含量均高于對照組，表明飼料中添加艾葉草能提高機體能量水平，但其影響不顯著。

血清中的LDL-C、HDL-C 含量可反映膽固醇的合成與飼糧中脂類的吸收狀況，LDL-C是一種運載膽固醇進入外周組織細胞的脂蛋白顆粒，可被氧化為氧化低密度脂蛋白[14]，當LDL-C 含量升高時，它攜帶的膽固醇則易聚集在動脈壁上，形成動脈硬化；HDL-C的主要作用是促進膽固醇的代謝，血液中HDL-C 含量增加，表明膽固醇代謝能力強，飼料中脂質吸收率升高。本試驗表明，添加甪里艾葉粉可降低LDL-C含量，尤其是添加1%時的效果更為顯著，表明甪里艾葉粉能夠降低蛋雞血清中的LDL-C 含量，加速膽固醇轉運，有助于維持血管形態(tài)。當艾葉粉添加量達到3%時，蛋雞血清中HDL-C 含量顯著升高，表明有助于蛋雞對飼料中脂質的吸收。

ALP 是廣泛分布于動物體內的一種非特異性磷酸單酯酶，主要來源于骨骼和肝臟，是反映骨鹽沉積狀況的重要指標，發(fā)生佝僂癥時其活性顯著升高。本試驗中，隨甪里艾葉粉添加量的增加其含量先升后降，雖差異性不明顯，但說明添加甪里艾葉粉造成了少量骨鹽消耗的現象。

TBIL 為DBIL 和IBIL 的總和，膽紅素是一種生理抗氧化劑，主要由血紅蛋白中血紅素轉化而來，適量的膽紅素對心、腦、肝等組織和器官具有良好的保護作用[15]。血清中TBIL、DBIL 含量偏高說明肝臟細胞受到損傷，肝功能減退。肝臟對膽紅素的代謝大致包括攝取、結合和排泄三個過程，任何過程障礙都會引起血中總膽紅素水平的升高。本試驗中，TBIL、IBIL含量各組之間無顯著性差異，添加3%甪里艾葉粉試驗組DBIL 含量與對照組相比顯著下降，說明甪里艾對蛋雞肝臟起到一定保護作用。

3.3 甪里艾葉粉對蛋雞血清抗氧化指標的影響

動物機體在新陳代謝過程中會產生一些自由基，其中，氧自由基能使生物膜中的多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質過氧化作用。當脂質過氧化反應增強時，抗氧化能力則下降，體內抗氧化防御系統平衡被破壞，產生過多的活性氧，最終導致機體發(fā)生氧化應激[16-18]?；钚匝鯐趸疍NA、蛋白質、碳水化合物和脂類導致正常細胞、膜和生殖功能的崩潰，形成諸如MDA、過氧基等脂質過氧化物，影響機體健康和生產性能，加速動物衰老，產生疾病。蛋雞體內抗氧化能力增強可以延長產蛋期，提高生產性能。

動物體內抗氧化體系包括酶類系統和非酶類系統，在正常情況下，畜禽體內因代謝產生的自由基和一些活性氧會通過自身的氧化還原系統來清除，從而保護機體不受自由基的傷害。T-AOC、SOD、CAT 和GSH-Px等酶作為抗氧化還原體系的酶類系統通過維持氧化與抗氧化之間的相對穩(wěn)定來降低體內自由基水平，其活性適當升高可以有效制止自由基的生成和脂質過氧化。因此，常作為機體抗氧化反應的標志物，是評價機體抗氧化能力的主要指標之一。

曹振興[19]在基礎日糧中添加0.25%、0.5%、1%和2%的艾蒿粉飼喂肉仔雞，發(fā)現2%艾蒿粉組的總抗氧化能力顯著增強，MDA 含量明顯低于對照組，SOD、CAT、GSH-Px含量均略高于對照組。趙飛[20]在日糧中添加500、1 000 mg/kg 艾蒿水提物飼喂肉仔雞，發(fā)現其組織和血清中MDA 含量顯著降低，總抗氧化能力明顯有不同程度的升高，而且對小腸、肝臟、脾臟中SOD、GSH-Px 和CAT 的活性及其mRNA 相對表達量也表現出較好的促進效果。張鵬飛[21]在肉仔雞日糧中添加1 000 mg/kg 艾蒿水提取物，發(fā)現肉仔雞血清MDA 含量降低，CAT 和GSH-Px 含量提高。張旭等[5]在蛋雞飼料中添加3%不同品種艾草粉，發(fā)現血清GSH-Px及CAT含量顯著提高。其作用機理可能是艾蒿中的黃酮、揮發(fā)油、多糖等[22-23]物質的抗氧化作用產生生物活性物質，清除機體產生的自由基和活性氧，從而避免脂質的過氧化。

MDA是體內自由基攻擊機體多不飽和脂肪酸和蛋白質所產生的脂質和蛋白質過氧化產物，是體內氧化損傷的特異性標志物，其含量可直接反映機體內脂質過氧化的程度，進而顯示細胞的破壞狀況，間接反映自由基的產生情況與機體組織細胞的脂質過氧化程度。MDA能導致細胞代謝和功能障礙，甚至死亡，還可氧化低密度脂蛋白(LDL)轉為氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)，最后在血管形成血栓。本試驗中試驗組MDA 含量均低于對照組，且添加1%甪里艾葉粉組極顯著降低，與曹振興[19]、趙飛[20]試驗結果相近。

GSH-Px 是一種依賴于硒能分解過氧化物的酶，可清除線粒體、胞漿與脂類中的H2O2，將脂質過氧化產物轉為較穩(wěn)定的羥基化合物(R-HO)，阻斷脂質過氧化的自由基鏈式反應[24]，進而保護細胞膜的結構和功能免受過氧化物的損害。肝細胞可通過此途徑使肝臟免受損傷，保護細胞膜結構和功能的完整。MDA是脂質過氧化物代謝產物之一，與GSH-Px活性通常呈負相關[25]。本試驗表明，添加甪里艾葉粉可提高蛋雞血清谷胱甘肽過氧化物酶的含量，尤其添加2%艾葉粉的效果更為顯著。這與曹振興[19]、張鵬飛[21]關于GSH-Px的研究結果一致。

CAT可促使H2O2分解為分子氧和水，從而使細胞免受H2O2的毒害，是生物防御體系的關鍵酶之一。飼糧添加艾草粉使蛋雞血清GSH-Px 含量和CAT 活性顯著提高，在抗氧化能力提高的同時，有利于保持蛋雞良好的身體機能和免疫功能。CAT和GSH-Px對活性氧的清除有十分重要的作用，當機體的活性氧含量提高時，CAT 和GSH-Px 的酶活性會增加[26]。本試驗結果認為，蛋雞日糧中添加甪里艾葉粉可提高CAT含量，尤其是添加2%、3%時效果極顯著，表明艾草能增強蛋雞的抗氧化能力。

SOD 是生物體中具有催化超氧陰離子向過氧化氫和氧轉化的一種重要抗氧化酶，是體內清除自由基的重要物質，能夠清除超氧化自由基O2-，其活性與動物體清除自由基的能力成正比，能保護細胞免受損傷。當畜禽體內缺乏SOD時，細胞氧化代謝將受到破壞，從而導致細胞損傷。T-AOC是衡量動物機體抗氧化系統能力的綜合指標，可在總體上反映機體自由基代謝的狀態(tài)和抗氧化系統對外來刺激的調控能力，直接反映機體酶類與非酶類抗氧化物的總體水平。本試驗中對照組及各試驗組之間SOD、T-AOC血清含量差異不顯著，說明添加3%以下的甪里艾對蛋雞血清SOD及T-AOC沒有影響。

4 結論

①在蛋雞產蛋高峰期日糧中添加2%以下提絨后的甪里艾葉粉時，蛋雞的平均蛋重、平均日產蛋重、產蛋率、平均日采食量、料蛋比等均無顯著影響，當甪里艾葉粉添加量達到3%時，其日產蛋率、平均日采食量和料蛋比均明顯下降。②甪里艾葉粉飼喂高產蛋雞能不同程度降低血清直接膽紅素、肌酐、低密度脂蛋白含量，提高高密度脂蛋白含量，對肝臟有一定保護作用，并提高了飼料脂質吸收率，對血管的保護作用增強。③甪里艾葉粉飼喂高峰期產蛋雞能提高機體抗氧化性能，2%添加量極顯著提升了血清GSH-Px、CAT含量，1%添加量極顯著降低了血清MDA含量，但對SOD、T-AOC 無影響，說明甪里艾具有提高產蛋雞機體抗氧化性能的作用。由此可見，最適的添加比例范圍為2%以內。