福建省種雞J亞群禽白血病的流行病學(xué)調(diào)查

陳秀琴，張世忠，鄭 敏，林 甦，朱志明，黃梅清*，林鋒強(qiáng)* (.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所/福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心，福建 福州35003；2.吉林大學(xué) 人獸共患病研究所/人獸共患病研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林 長(zhǎng)春 30062)

禽白血病(avian leukosis,AL)是由反轉(zhuǎn)錄病毒科α反轉(zhuǎn)錄病毒屬的禽白血病病毒(avian leucosis virus,ALV)引起禽類的一類腫瘤性疾病[1]。根據(jù)病毒血清中和試驗(yàn)、囊膜糖蛋白、宿主范圍和病毒干擾模式的不同，可將ALV劃分為A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K共11個(gè)亞群[2-4]。只有 A、B、C、D、E、J、K 7個(gè)亞群可以自然感染雞群[2]，其中E亞群是內(nèi)源性病毒，通常致病性弱甚至無(wú)致病性，其余亞群均為外源性病毒，具有較強(qiáng)的致病性[5]。1988年，英國(guó)科學(xué)家首先從白羽肉雞中分離到對(duì)雞致病性更強(qiáng)的J亞群禽白血病病毒(ALV-J)[3]，隨后在世界各地廣泛傳播，給全球養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失[6]。1999年至今，我國(guó)已先后報(bào)道從雞群中分離到ALV-J毒株[1,7-9]，特別是自2007年以來(lái)，我國(guó)多地的蛋雞場(chǎng)暴發(fā)以血管瘤為特征的J亞群AL[10]。外源性ALV的傳播方式包括水平傳播和垂直傳播兩種。水平傳播是通過(guò)接觸ALV感染雞或被ALV污染的物品，通常造成短暫的病毒血癥[3]。絕大多數(shù)水平傳播都發(fā)生在出殼后的雛雞階段。被接觸感染的雞都是由于與先天感染的雞的直接接觸而被感染[11]。垂直傳播是ALV最重要的傳播方式，感染雞可產(chǎn)生持久的病毒血癥[3]。母雞和公雞都可以將ALV-J傳播給下一代[11]。

ALV感染對(duì)雞群的危害體現(xiàn)在兩方面：首先，ALV誘發(fā)腫瘤導(dǎo)致死亡，但死亡率通常較低(1%～2%)；其次，ALV感染雞可發(fā)生亞臨床感染，導(dǎo)致產(chǎn)蛋下降、免疫抑制或生長(zhǎng)緩慢。而由ALV感染導(dǎo)致的繼發(fā)感染所帶來(lái)的損失可能遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于由于腫瘤致死造成的經(jīng)濟(jì)損失[2]。目前，尚無(wú)預(yù)防AL的有效疫苗，主要依靠種源凈化[12]。

為了解福建省種雞感染ALV的情況和進(jìn)一步開展福建地區(qū)垂直性傳播病毒病凈化工作，本研究采集了福建省不同地區(qū)、不同品系種雞的血清和初產(chǎn)蛋，對(duì)采集樣品分別進(jìn)行了ALV-J抗體檢測(cè)和ALV p27抗原檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源及養(yǎng)殖場(chǎng)概況分別從福州、莆田、龍巖3個(gè)地區(qū)6個(gè)種雞場(chǎng)采集2 470份血樣和2 848 枚初產(chǎn)蛋。各種雞場(chǎng)的生產(chǎn)性能、種源管理情況和疫病凈化情況分別見(jiàn)表1，2，3。

表1 各種雞場(chǎng)的生產(chǎn)性能

每個(gè)雞場(chǎng)隨機(jī)抽取一定數(shù)量的健康雞進(jìn)行翅下靜脈采血，5 000 r/min離心10 min分離血清，-20℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

表2 各種雞場(chǎng)的種源管理情況

表3 各種雞場(chǎng)的疫病凈化情況

1.2 ALV-J抗體檢測(cè)用ALV-J抗體檢測(cè)試劑盒(Avian Leukosis Virus Antibody Test Kit subgroup J，美國(guó)IDEXX)檢測(cè)ALV-J抗體，具體方法參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。ELx800光吸收酶標(biāo)儀和洗板機(jī)均為美國(guó)伯騰儀器有限公司(BioTek)。

為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，每份血清樣品設(shè)定1個(gè)重復(fù)，只有2次均為陽(yáng)性可判定為陽(yáng)性。如有可疑則將該樣品重復(fù)3次。

1.3 初產(chǎn)蛋中ALV p27抗原的檢測(cè)分別于種雞開產(chǎn)后1周內(nèi)收集種蛋，每枚種蛋吸取1 mL稀蛋清反復(fù)凍融3次后，用ALV p27抗原檢測(cè)試劑盒(Avian Leukosis Virus Antigen Test Kit，美國(guó)IDEXX公司)檢測(cè)ALV特異性抗原p27，具體方法參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，每份樣品設(shè)定1個(gè)重復(fù)，只有2次均為陽(yáng)性可判定為陽(yáng)性。如有可疑則將該樣品重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1 各地區(qū)種雞ALV-J抗體檢測(cè)情況如表4所示，3個(gè)地區(qū)檢測(cè)的2 470份血清樣品中，共有114份為ALV-J抗體陽(yáng)性，陽(yáng)性率為4.62%；其中福州地區(qū)檢測(cè)1 185份血清，ALV-J抗體陽(yáng)性率為5.23%(62/1 185)，莆田地區(qū)檢測(cè)1 116份血清，ALV-J抗體陽(yáng)性率為2.87%(32/1 116)，龍巖地區(qū)檢測(cè)137份血清，ALV-J抗體陽(yáng)性率為14.6%(20/137)。結(jié)果表明，龍巖地區(qū)的ALV-J抗體陽(yáng)性率最高。公雞的ALV-J抗體總陽(yáng)性率為3.02%(25/828)，母雞的ALV-J抗體總陽(yáng)性率為5.42%(89/1 642)，表明福建省種公雞的ALV-J抗體總陽(yáng)性率低于種母雞。對(duì)不同地區(qū)的公母種雞的ALV-J抗體陽(yáng)性率進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)相同的規(guī)律。

表4 福建省種雞場(chǎng)ALV-J抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果

2.2 各地區(qū)種雞ALV p27抗原檢測(cè)情況如表5所示，本研究共收集2 848枚初產(chǎn)蛋用于檢測(cè)ALV p27抗原，有224份為陽(yáng)性，總陽(yáng)性率為7.87%；其中福州地區(qū)檢測(cè)2 177份蛋清，陽(yáng)性率為0.83%(18/2 177)，莆田地區(qū)檢測(cè)298份蛋清，陽(yáng)性率為62.4%(186/298)，龍巖地區(qū)檢測(cè)120份蛋清，陽(yáng)性率為16.67%(20/120)。結(jié)果表明，莆田地區(qū)的ALV p27抗原陽(yáng)性率最高，福州地區(qū)最低。對(duì)不同品系的種雞進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)不同品系的種雞都有不同程度的ALV p27抗原陽(yáng)性檢出，福建省本地雞的ALV p27抗原陽(yáng)性率明顯高于海蘭、羅曼和京紅。

表5 福建省種雞場(chǎng)ALV p27抗原檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同用途雞群ALV檢測(cè)差異分析對(duì)蛋種雞和肉種雞的ALV-J抗體陽(yáng)性率、ALV p27抗原陽(yáng)性率進(jìn)行比較，由圖1可知，蛋種雞ALV-J抗體陽(yáng)性率略高于肉種雞，蛋種雞的ALV p27抗原陽(yáng)性率明顯低于肉種雞。

圖1 不同用途雞群ALV流行病學(xué)比較

2.4 不同品系雞群ALV檢測(cè)差異分析對(duì)海蘭、京紅、羅曼和福建本地雞多個(gè)品系的ALV-J抗體陽(yáng)性率、ALV p27抗原陽(yáng)性率進(jìn)行比較，由圖2，3可知，海蘭品系的ALV-J抗體陽(yáng)性率和ALV p27抗原陽(yáng)性率都很低。京紅和羅曼品系的ALV-J抗體陽(yáng)性率分別達(dá)到了7.17%和10.68%，但是ALV p27抗原陽(yáng)性率卻均低于2%。福建地方品系雞的ALV-J抗體陽(yáng)性率和ALV p27抗原陽(yáng)性率普遍高于大型種雞場(chǎng)培育的品系，特別注意的是，本地雞2的ALV-J抗體陽(yáng)性率較低(2.87%)，但是ALV p27抗原陽(yáng)性率卻達(dá)到了62.42%。

圖2 不同品系雞群ALV-J抗體陽(yáng)性率比較

圖3 不同品系雞群ALV p27抗原陽(yáng)性率比較

3 討論

AL可導(dǎo)致禽類免疫抑制，主要通過(guò)垂直傳播，無(wú)有效的疫苗，目前防制的方法主要是通過(guò)種源凈化?！秶?guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃(2012—2020年)》中已經(jīng)將AL列為需要優(yōu)先凈化的禽病，并制定了“到2020 年全國(guó)所有種雞場(chǎng)達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)”的疫病凈化考核標(biāo)準(zhǔn)。

本研究對(duì)福建省3個(gè)地區(qū)6個(gè)種雞場(chǎng)進(jìn)行AL感染調(diào)查，結(jié)果表明，不同品系的種雞群普遍感染ALV-J。ALV-J抗體總陽(yáng)性率和ALV p27抗原總陽(yáng)性率分別為4.62%和7.87%。此外，本研究發(fā)現(xiàn)本地雞2的ALV p27抗原陽(yáng)性率為62.4%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于ALV-J抗體陽(yáng)性率2.87%，本地雞3也是類似的結(jié)果。李鑫等[13]對(duì)蛋雞場(chǎng)進(jìn)行AL流行病學(xué)調(diào)查，同樣發(fā)現(xiàn)ALV p27抗原陽(yáng)性率高于ALV-J抗體陽(yáng)性率。這種現(xiàn)象一方面可能與ALV-J的垂直傳播有關(guān)。垂直傳播可導(dǎo)致雞產(chǎn)生免疫耐受感染，只有當(dāng)免疫耐受的雞不再處于免疫耐受狀態(tài)時(shí)，機(jī)體才能產(chǎn)生相應(yīng)的抗體[14]。另一方面可能是由于雞群中除了感染ALV-J外，還感染了馬立克氏病病毒和禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒等其他免疫抑制性病毒，抑制了ALV-J抗體的產(chǎn)生[15]。

將各個(gè)種雞場(chǎng)的生產(chǎn)性能、種源管理情況、疫病凈化情況與ALV的感染進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，福建省本地雞2和本地雞3的ALV p27抗原陽(yáng)性率均遠(yuǎn)高于大型種雞場(chǎng)培育的品系，而這兩個(gè)本地雞品系的死亡和淘汰率均高于大型種雞場(chǎng)培育的品系。提示ALV p27抗原陽(yáng)性率與雞群的死亡和淘汰率存在一定的正相關(guān)性。趙鵬等[16]報(bào)道，種蛋中p27抗原檢出率越高，種雞群發(fā)病情況越嚴(yán)重，下游客戶雞群發(fā)病率和投訴率越高。此外還表明福建地方品系雞ALV感染嚴(yán)重。楊鳳等[10]對(duì)海蘭蛋雞、羅曼蛋雞、特佳蛋雞、尼克珊瑚粉蛋雞和蘆花雞進(jìn)行AL流行病學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)蘆花雞的ALV p27抗原陽(yáng)性率高于進(jìn)口蛋雞品系。貝懷國(guó)等[17]對(duì)江蘇安徽地區(qū)5個(gè)品系的父母代種雞及其中的3個(gè)子代雞群進(jìn)行AL的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)某蛋雞品系的p27抗原陽(yáng)性率高達(dá)49.77%。崔治中[18]研究表明，我國(guó)有些純地方品種雞群ALV-J的感染率相當(dāng)高，且開始表現(xiàn)典型的髓細(xì)胞瘤和其他AL的病理變化。

場(chǎng)1和場(chǎng)2嚴(yán)格開展ALV凈化，ALV-J抗體陽(yáng)性率和p27抗原陽(yáng)性率普遍低于沒(méi)有開展ALV凈化的場(chǎng)，說(shuō)明通過(guò)種源凈化是可以降低ALV感染率。本研究還發(fā)現(xiàn)，福建省種公雞的ALV-J抗體總陽(yáng)性率低于種母雞。這可能是由于種母雞的血樣數(shù)量遠(yuǎn)大于種公雞的血樣數(shù)量導(dǎo)致的。公雞和母雞對(duì)ALV的易感性是否存在顯著性差異，還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

鑒于福建省地方品種雞ALV感染率較高的問(wèn)題，且沒(méi)有凈化的雞群對(duì)其他已實(shí)現(xiàn)凈化的規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)可能會(huì)造成威脅，種雞場(chǎng)有必要開展ALV種源凈化。雖然垂直傳播是ALV重要的傳播方式，但是水平傳播卻起著放大的效應(yīng)。種蛋入孵前種蛋及孵化器的消毒、孵化環(huán)節(jié)的控制、出雛前的準(zhǔn)備工作及人員的管理，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，這些對(duì)ALV的凈化都發(fā)揮關(guān)鍵作用。同時(shí)鑒于國(guó)內(nèi)活疫苗普遍存在外源性ALV污染的問(wèn)題[15]，還要關(guān)注用雞胚或雞胚來(lái)源的細(xì)胞作為原材料生產(chǎn)的弱毒疫苗[18]。此外，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室開展ALV凈化和防控也很重要。首先，引進(jìn)種雞前必須進(jìn)行ALV檢疫。ALV容易發(fā)生變異和基因重組，隨著引種而帶入的ALV將對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)構(gòu)成威脅[19]。其次，在育成雞轉(zhuǎn)群和種雞留種前還要定期檢測(cè)和監(jiān)控雞群的感染狀態(tài)。總之，AL的凈化工作任重道遠(yuǎn)，養(yǎng)殖場(chǎng)需要從飼養(yǎng)管理和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)等方面多措并舉，才能盡快凈化ALV。