提高蜂蜜中羥甲基糠醛檢測精度的方法

黃麗芳，劉斯萍，楊麗娜，陳方定，易 偉，楊志懷

（1.井岡山市拾野山蜜發(fā)展有限公司，江西 吉安 343604；2.江西省江咨工程咨詢有限公司，江西 南昌 330038；3.江西省養(yǎng)蜂研究所，江西 南昌 330045）

井岡山市拾野山蜜發(fā)展有限公司在生產(chǎn)中蜂成熟蜜時，對蜂場環(huán)境、養(yǎng)蜂生產(chǎn)、全自動分裝的整個過程進行了高標準、嚴要求的監(jiān)控。每年對生產(chǎn)的成熟蜜也進行全面檢測，包括理化指標，微生物指標和十幾種抗生素。在檢測羥甲基糠醛含量的過程中發(fā)現(xiàn)，配制好的檢測用溶液貯存時間的長短，對檢測結(jié)果會有影響，為了確定影響的大小，找到規(guī)律和提高檢測精度的方法，我們做了以下實驗。

1 材料和方法

1.1 材料

實驗用樣品2 個，樣品1 是2020 年8 月6 日本企業(yè)生產(chǎn)的拾野山蜜（中蜂成熟蜜）；樣品2 是2019 年9 月8 日生產(chǎn)的拾野山蜜（中蜂成熟蜜）。

1.2 儀器設備和試劑

儀器設備：分光光度計（550 nm），水浴鍋。

試劑：巴比妥酸，對甲苯胺，異丙醇，冰乙酸，無氧蒸餾水。

1.3 試驗方法

一次性配制出可以檢2 個樣品共30 次的巴比妥酸溶液和對甲苯胺溶液。配制方法如下：

巴比妥酸溶液：稱取500 mg 巴比妥酸于燒杯中，加70 mL 蒸餾水，置于熱水浴上加熱攪拌，使其溶解。冷卻后移入100 mL 容量瓶中，用蒸餾水定容到刻度。

對甲苯胺溶液：稱取10.0 g 對甲苯胺，溶解于約50 mL 的異丙醇中，溫熱溶解后用異丙醇轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，加入10 mL 冰乙酸，冷卻，再用異丙醇定容至刻度。溶液配制后貯存于暗處。

按以上方法再配2 次，將3 次配的溶液混合轉(zhuǎn)移至300 mL 容量瓶中，貯存至暗處。

以上溶液配制完成后，馬上按以下程序操作。

稱取10 g 樣品，溶于20 mL 無氧蒸餾水，并用無氧蒸餾水將樣品溶液移入50 mL 容量瓶中，定容至刻度，混勻。此樣液為待測液，應立即進行下列測定。

分別吸取2.0 mL 樣液于2 個試管中，并在每個試管中加入5.0 mL 對甲苯胺溶液，然后在一個試管中加入1 mL 無氧蒸餾水（作空白對照），另一個試管中加入1.0 mL 巴比妥酸溶液，兩試管立即振搖混合，于分光光度計550 nm 波長下用1 cm 比色皿以空白為對照測定樣品的吸光度，讀取達到的最大吸光度。

結(jié)果計算：羥甲基糠醛（HMF)按下式計算：

X=A×19.2

式中：X—每100 g 樣品中羥甲基糠醛的毫克數(shù)，mg/100 g；

A—吸光度。

按以上方法測出樣品1 和樣品2 的羥甲基糠醛含量后，做好記錄，從這時起，每隔24 h測一次，直至測量結(jié)果誤差越來越大為止。

2 結(jié)果與分析

表1 是溶液配制后貯存時間從0 至14 d，蜂蜜樣品1 和蜂蜜樣品2 的羥甲基糠醛檢測結(jié)果。

表1 溶液配制后不同天數(shù)羥甲基糠醛檢測結(jié)果

圖1 是以對甲苯胺和巴比妥酸溶液配制后貯存時間為橫坐標，以蜂蜜中羥甲基糠醛含量為縱坐標，形象地展示了隨著貯存時間的延長，兩個蜂蜜樣品的羥甲基糠醛重復檢驗值的變化。

圖1 溶液配制后不同天數(shù)羥甲基糠醛檢測結(jié)果

從圖1 可以看出，剛配好的溶液檢測結(jié)果，一號樣偏高，二號樣偏低，而且誤差很大。這也證明了檢測標準“SN/T 0852-2000”要求對甲苯胺溶液配制后貯存于暗處24 h 后方能使用的原因。還可以看出從第3 天到第10 d，重復檢驗誤差最少；10 d 后，測定的羥甲基糠醛值都有升高的趨勢。

3 結(jié)論

根據(jù)這個實驗結(jié)果，為提高蜂蜜中羥甲基糠醛檢測精度，防止溶液配制后貯存時間的影響。我們規(guī)定：對甲苯胺溶液要配制后貯存于暗處48 h 后方能使用，貯存時間超過10 d 就必須廢棄，不能再使用。