陳 丹

平頂山市紅十字中心血站(河南 平頂山 467000)

隱匿性乙型肝炎感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)特指血清轉(zhuǎn)換前的窗口期,機(jī)體存在乙肝病毒DNA,但仍無(wú)法對(duì)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)進(jìn)行有效測(cè)定,乙肝核心抗體(抗-HBc)可能為陽(yáng)性的一段特殊時(shí)期[1]。OBI在不同地區(qū)的流行狀況存在一定差異[2],據(jù)相關(guān)研究統(tǒng)計(jì),2017年,平頂山市的乙型肝炎(HBV)發(fā)病率在38.51/10萬(wàn),平頂山市的HBV發(fā)病率逐年下降,但缺乏近年來(lái)的數(shù)據(jù)觀察[3]。乙肝屬于血液傳播疾病,基于OBI患者由于處于窗口期外,難以通過(guò)HBsAg檢測(cè)確診為乙肝患者,繼而造成乙肝輸血及感染風(fēng)險(xiǎn)[4]。因此,有必要就平頂山市無(wú)償獻(xiàn)血人群OBI的血清學(xué)特征進(jìn)一步分析,為平頂山市無(wú)償獻(xiàn)血機(jī)構(gòu)血液制品采集及篩檢提供數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1檢測(cè)對(duì)象及樣本采集 選取平頂山市中心血站2019年1～12月檢測(cè)的51689例無(wú)償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本,獻(xiàn)血者年齡18～55歲,其中初次獻(xiàn)血者20125人,重復(fù)獻(xiàn)血者31564人,血液樣本均采集自經(jīng)膠體金試紙測(cè)定HbsAg初篩合格,然后在采血時(shí)在血袋樣本留取口留取三個(gè)5ml試管樣本,分別為抗凝管、促凝管和帶有分離膠的抗凝管。并留取血袋樣辮保存?zhèn)洳椤?/p>

1.2設(shè)備及試劑 設(shè)備選用全自動(dòng)樣本處理系統(tǒng)(型號(hào)TECAN-EVO)、全自動(dòng)酶免處理系統(tǒng)(型號(hào)為BEPIII和FAME)、全自動(dòng)核酸匯集提取儀、PCR擴(kuò)增儀。試劑選擇HBV-HCV-HIV(1+2型)熒光PCR聯(lián)合檢測(cè)試劑,試劑由蘇州華益美生物科技有限公司及上海浩源生物科技有限公司提供。HBsAg及二對(duì)半試劑盒由廈門新創(chuàng)生物工程股份有限公司和法國(guó)伯樂(lè)生產(chǎn)。

1.3檢測(cè)方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)血液樣品進(jìn)行測(cè)定,采用平行聯(lián)檢對(duì)HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、梅毒血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。乙肝二對(duì)半操作方式嚴(yán)格參照各種試劑及儀器說(shuō)明書進(jìn)行操作。上述指標(biāo)測(cè)試結(jié)束后進(jìn)行核酸定性檢測(cè),HBV-DNA核酸定性檢測(cè)為陽(yáng)性者,確定最終OBI標(biāo)本。

1.4觀察指標(biāo) 采集獻(xiàn)血者的性別、年齡及HBsAg、HBV-DNA測(cè)定結(jié)果。當(dāng)HBsAg測(cè)試為陰性(-)且HBV DNA(+)者經(jīng)跟蹤測(cè)試HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、經(jīng)分析后視為OBI患者。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用STATA 11.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,分類變量應(yīng)用卡方檢驗(yàn),連續(xù)變量采用t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1OBI感染者性別、年齡情況 經(jīng)檢驗(yàn)篩查確定,平頂山市無(wú)償獻(xiàn)血人群中隱匿性乙肝患者僅45例,統(tǒng)計(jì)年OBI發(fā)病率為0.87%。OBI與非OBI患者相比,男性、35歲以上人群、血清學(xué)指標(biāo)HBsAb、HBeAb、HBcAb陽(yáng)性例數(shù)高于非OBI者,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表1)。

表1 OBI感染者性別、年齡情況

2.2OBI的血清學(xué)標(biāo)志物分布模式 比較OBI患者的HBsAb、HBeAb、HBcAb陽(yáng)性率,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,以HBcAb陽(yáng)性率最高,達(dá)100%,HBeAb陽(yáng)性率次之,為53.33%(P<0.05)(見(jiàn)表2)。

表2 OBI的血清學(xué)標(biāo)志物分布模式(n=45)

3 討論

乙型肝炎(HBV)是世界范圍內(nèi)的流行病之一,我國(guó)約有1億以上的HBV感染者[5]。由于HBV起病隱匿,且成人HBV感染者常無(wú)自感癥狀。調(diào)查顯示,深圳市無(wú)償獻(xiàn)血人群中OBI感染率在0.04%[6]。與深圳市相比,本研究就平頂山市2019年的無(wú)償獻(xiàn)血者中的OBI感染率在0.09%(45/51689),相比較而言,平頂山市的OBI感染率更高,但與江蘇地區(qū)的OBI感染率0.08%接近[7]。

本研究同時(shí)比較OBI和非OBI者的性別、年齡段及血清學(xué)指標(biāo)發(fā)現(xiàn),45例OBI患者中多數(shù)為男性、年齡>35歲,且HBsAb、HBeAb、HBcAb篩查的陽(yáng)性率更高。在性別方面,這一結(jié)果與深圳市及慶陽(yáng)市相同[8],考慮主要是男性的生活方式密切相關(guān)[9]。而<35歲人群的OBI感染率更低,主要以新生兒接種乙肝疫苗及青年人的免疫功能更強(qiáng)有關(guān),而≥35歲人群會(huì)存在免疫功能逐漸衰退,步入50歲以上生活節(jié)奏減慢,感染乙肝風(fēng)險(xiǎn)有所降低[10]。

HBV感染受病毒DNA載量及免疫狀態(tài)影響,OBI屬于HBV感染的特殊階段,血液的血清中攜帶的病毒DNA載量較低,對(duì)受血者而言,需要免疫狀態(tài)嚴(yán)重下降才能造成輸血感染風(fēng)險(xiǎn)[11]。本研究同時(shí)針對(duì)血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)OBI患者HBsAb、HBeAb、HBcAb陽(yáng)性率更高。因此,對(duì)于初篩存在HBsAb、HBeAb、HBcAb陽(yáng)性患者應(yīng)進(jìn)一步確定HBV DNA載量,以保證血液制品的安全性[12]。進(jìn)一步分析,OBI患者的HBsAb、HBeAb、HBcAb陽(yáng)性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,以HBcAb陽(yáng)性率最高,達(dá)100%,HBeAb陽(yáng)性率次之,為53.33%(P<0.05)。這一結(jié)果與張毓等研究結(jié)果相似[13]。多數(shù)OBI患者存在HBsAb、HBeAb、HBcAb中兩種或三種陽(yáng)性情況,也存在少部分患者單一HBcAb陽(yáng)性者。研究認(rèn)為,HBcAb陽(yáng)性屬于較為穩(wěn)定的指標(biāo),OBI患者通常處于感染或恢復(fù)期,而此類OBI患者的HBsAb屬于陰性狀態(tài),無(wú)法對(duì)受血者產(chǎn)生保護(hù)能力,輸注后會(huì)增加感染風(fēng)險(xiǎn)[14-15]。同理,雖然沒(méi)有HBeAb單獨(dú)陽(yáng)性者,但仍存在部分患者缺乏HBsAb抗體保護(hù),輸注后仍會(huì)存在受體感染風(fēng)險(xiǎn)。因此,對(duì)于HBeAb、HBcAb陽(yáng)性者需進(jìn)一步測(cè)定病毒載量,明確受血癥感染風(fēng)險(xiǎn)。

國(guó)內(nèi)外對(duì)隱匿性感染者是否可參與獻(xiàn)血仍存在爭(zhēng)議。部分學(xué)者認(rèn)為,隱匿性感染獻(xiàn)血者血液傳播能力差,病毒載量低,且開(kāi)展全面核酸檢測(cè)費(fèi)用過(guò)高,增加用血成本,部分省市的隱匿性感染者的獻(xiàn)血者仍會(huì)作為合格供血者[16]。反對(duì)者認(rèn)為,當(dāng)隱匿性感染著的血液被制成體積大的200ml的新鮮冰凍血漿或20ml的血漿紅細(xì)胞后,足以感染給被輸血者[17]。因此,國(guó)際上通常認(rèn)為,應(yīng)將HBV的最低傳染量下調(diào)至3.0IU/ml。當(dāng)獻(xiàn)血者的核酸DNA為陰性時(shí)可作為合格供血者。

綜上所述,平頂山市無(wú)償獻(xiàn)血人群中隱匿性乙肝發(fā)病率為0.87%,核酸檢測(cè)是降低單純乙肝病毒抗原抗體篩查所漏診的OBI的輸血感染風(fēng)險(xiǎn)的有效方式,尤其對(duì)于存在HBeAb、HBcAb陽(yáng)性結(jié)果患者應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行核酸測(cè)定,避免造成輸血傳播乙肝風(fēng)險(xiǎn)。