PLOD3 與LATS1 在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及與臨床病理特征、預(yù)后的相關(guān)性

金建祥，王波定，陳茂送，王洪財，馬磊，馮寬

腦膠質(zhì)瘤是常見的原發(fā)性腦腫瘤，臨床預(yù)后差[1]。雖外科手術(shù)、放射療法和化學(xué)療法的治療取得了進(jìn)展，但是惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的預(yù)后仍然非常差。盡管WHO 分類可以作為預(yù)測患者臨床結(jié)局的標(biāo)準(zhǔn)，但最近的研究表明，僅憑該標(biāo)準(zhǔn)可能不足以估計患者的預(yù)后。因此確定新的潛在生物標(biāo)志物，以進(jìn)行早期診斷、預(yù)后預(yù)測以及新的治療靶標(biāo)至關(guān)重要。PLOD3 已被提議作為人類H460 細(xì)胞放射抗性的生物標(biāo)志物[2]；哺乳動物大腫瘤抑制激酶1（LATS1）低表達(dá)可導(dǎo)致星形細(xì)胞瘤、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌發(fā)生[3]，可能是人類癌癥類型中重要的腫瘤抑制因子。目前關(guān)于PLOD3 與LATS1 在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)的研究報道較少，因此本研究擬探討PLOD3 與LATS1 在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平及與臨床病理特征、預(yù)后的相關(guān)性，為腦膠質(zhì)瘤的診斷治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集寧波市醫(yī)療中心李惠利醫(yī)院2015 年1 月至2016 年3 月行手術(shù)治療的星形細(xì)胞神經(jīng)膠質(zhì)瘤94例為病例組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《中國膠質(zhì)瘤規(guī)范化治療現(xiàn)狀》[4]；（2）術(shù)后經(jīng)病理學(xué)證實；（3）患者或家屬均已提供書面知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他部位腫瘤；（2）臨床及隨訪資料不完整。另收集除惡性腫瘤以外的其他原因（如腦外傷、需要進(jìn)行減壓治療的嚴(yán)重的顱腦損傷）49 例的腦組織標(biāo)本為對照組。病例組男58 例，女36 例；年齡42 ～69 歲，平均（59.3±8.5）歲；卡諾夫斯基性能評分（KPS）≤70 分25 例，＞70 分69 例；WHO 等級Ⅰ級12 例，Ⅱ級46 例，Ⅲ級28 例，Ⅳ級8 例。對照組男31 例，女18例；年齡40 ～68 歲，平均（59.4±8.0）歲；KPS評分≤70 分14 例，＞70 分35 例。本研究獲本院倫理委員會批準(zhǔn)，所有相關(guān)患者或家屬均已提供書面知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化及判定標(biāo)準(zhǔn) 將標(biāo)本固定在Bouin溶液（美國Sigma-Aldrich，批號：WS-52636.3）中1 h，用磷酸鹽緩沖液沖洗，后用70%、80%、95%和100%的乙醇梯度脫水，包埋切成片。將切片在檸檬酸抗原回收溶液中在濕度箱（中國河南遠(yuǎn)通化工有限公司）中處理60 min。加入小鼠抗PLOD3、LATS1 多克隆抗體（1∶1 000、1∶2 000，美國Santa Cruz Biotechnology，目 錄 號 sc-17320、69653），并在4℃下孵育過夜。使用抗生物素蛋白-生物素-過氧化物酶技術(shù)，并以3，3’-二氨基聯(lián)苯胺（丹麥Dako Denmark，批號：SW-56963）作為發(fā)色劑，蘇木精復(fù)染。使用Eclipse 80i 顯微鏡（日本Nikon Corporation；放大倍數(shù)，×400）在3 個隨機(jī)選擇的高倍視野中，通過計數(shù)除PLOD3、LATS1 陽性染色的細(xì)胞核之外的所有細(xì)胞核，確定 PLOD3、LATS1 陽性細(xì)胞的比例。0 ～10%、10%～30%、30%～70%和＞70%的PLOD3、LATS1 陽性細(xì)胞得分分別為－、1+、2+和3+。（－）表示PLOD3、LATS1 陰性表達(dá)，得分1+、2+和3+表示陽性表達(dá)。

1.2.2 隨訪 病例組術(shù)后每3 個月通過電話訪問和問卷調(diào)查信更新隨訪信息，從最初的手術(shù)日期到死亡計算總生存時間。

1.3 統(tǒng)計方法 采用SPSS 23.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料比較采用2檢驗或Fisher 精確檢驗比較，使用Kaplan-Meier 生存曲線和Cox 回歸模型進(jìn)行生存分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組PLOD3、LATS1 蛋白表達(dá)比較 病例組PLOD3 蛋白表達(dá)陽性率高于對照組，LATS1 蛋白表達(dá)陽性率低于對照組（均P ＜0.05），見表1。

表1 兩組PLOD3、LATS1 蛋白表達(dá)陽性率比較 例（%）

2.2 PLOD3、LATS1蛋白表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤臨床病理特征的關(guān)系 PLOD3、LATS1 蛋白表達(dá)與腫瘤最大徑、TNM分期、浸潤深度、病理級別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)相關(guān)，且腫瘤最大徑≥5 cm、TNM分期越高、浸潤深度越深、病理級別越高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)患者PLOD3 陽性表達(dá)率越高，LATS1 蛋白陽性表達(dá)率越低（2≥9.548，均P ＜0.05），見表2。

表2 PLOD3L、LATS1 蛋白表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤臨床病理特征的關(guān)系 例（%）

2.3 腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后情況 94 例自出院后至隨訪結(jié)束存活4 ～72 個月，5年生存率為27.6%（26/94）。PLOD3 陽性和陰性患者5 年總生存率分別為2.94%（2/68）和92.39%（24/26），而LATS1 陽性和陰性患者5 年總生存率分別為55.56%（20/36）和10.34%（6/58）。PLOD3、LATS1 陽性和陰性患者5 年總生存率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（2=75.075、22.691，均P ＜0.05）。

2.4 影響腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后單因素分析 腫瘤最大徑≥5 cm、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ、浸潤深度浸潤≥6 cm、有淋巴血管浸潤、病理級別高、有復(fù)發(fā)、PLOD3 陽性及LATS1 陰性患者5 年生存率均顯著降低（均P ＜0.05），見表3。

表3 影響腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后單因素分析 例（%）

2.5 腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后影響因素多因素Cox 回歸分析 Cox 回歸分析顯示，TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、病理級別高、PLOD3 表達(dá)陽性、LATS1 表達(dá)陰性是腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后獨立危險因素（均P ＜0.05），見表4。

表4 腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后影響因素多因素Cox 回歸分析

3 討論

PLOD是細(xì)胞內(nèi)膜結(jié)合同型二聚體蛋白的一個家族，其中PLOD3 具有膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移酶和葡糖基轉(zhuǎn)移酶的活性[5]。已經(jīng)在肝癌、乳腺癌和子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤等人類癌癥中發(fā)現(xiàn)PLOD3 表達(dá)升高[6]。本研究發(fā)現(xiàn)PLOD3 在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中過表達(dá)，且腫瘤最大徑≥5 cm、TNM 分期越高、浸潤深度越深、病理級別越高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)患者PLOD3陽性表達(dá)率越高。因此，PLOD3 過表達(dá)可能會導(dǎo)致神經(jīng)膠質(zhì)瘤生長，增強局部細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移，并調(diào)節(jié)細(xì)胞分化。同時，本文針對患者預(yù)后進(jìn)行分析，結(jié)果顯示PLOD3 表達(dá)陽性是腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后獨立危險因素（P ＜0.05），這說明PLOD3 過度表達(dá)是神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后不良因素。

LATS1可能在早期有絲分裂中與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶1 形成復(fù)合物，從而降低H1 組蛋白激酶活性，具有細(xì)胞周期抑制劑作用。敲除LATS1 可抑制小鼠肉瘤、卵巢腫瘤進(jìn)展，這表明LATS1可能起抑癌作用[7]。臨床研究表明LATS1在45%的宮頸癌組織標(biāo)本中表達(dá)下調(diào)，LATS1 下調(diào)與晚期宮頸癌TNM 分期和腫瘤狀態(tài)呈正相關(guān)，表明LATS1 喪失與宮頸癌的進(jìn)展有關(guān)[8]。本研究中，LATS1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)降低，且PLOD3陽性表達(dá)與腫瘤最大徑、TNM分期、浸潤深度、病理級別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)呈負(fù)相關(guān)，提示LATS1 是神經(jīng)膠質(zhì)瘤的抑癌基因。在宮頸癌中，促進(jìn)LATS1表達(dá)可調(diào)節(jié)細(xì)胞活力、增殖、遷移、集落形成，細(xì)胞周期分布和腫瘤生長[9]。本研究結(jié)果顯示LATS1 陰性患者5 年生存率均顯著縮短，LATS1 表達(dá)陰性是影響腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨立危險因素，這與上述討論一致，再次說明LATS1 低表達(dá)是膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后不良因素。

綜上所述，人腦膠質(zhì)瘤中PLOD3 表達(dá)升高，LATS1 表達(dá)降低；PLOD3、LATS1表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征相關(guān)；PLOD3 高表達(dá)、LATS1 低表達(dá)是神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后不良因素。