永康野生靈芝菌種與培養(yǎng)基配方篩選*

方 莉，鈄凌娟**，李金輝，徐金晶

（1.金華市農(nóng)業(yè)科學研究院，浙江 金華 321017；2.浙江菇爾康生物科技有限公司，浙江 金華 321304）

靈芝（Ganoderma lucidum）分布廣泛，在熱帶、亞熱帶、溫帶都可以生長，因此自然界有適應各種生態(tài)環(huán)境的靈芝菌株[1]。靈芝作為傳統(tǒng)的藥用真菌，很長一段時間內(nèi)只能靠采集野生子實體來滿足市場需求。

20世紀60年代，我國開始進行靈芝人工栽培，早期主要以段木栽培為主，之后以木屑為基質(zhì)進行瓶栽和袋栽，目前大多利用短段木栽培[2-3]。經(jīng)過幾十年的不斷培育，靈芝的產(chǎn)量和品質(zhì)也得到了極大的提高與改善。靈芝袋料栽培技術(shù)的發(fā)展更是縮短了靈芝的栽培周期，可選用的原料也從單一的原木，轉(zhuǎn)變?yōu)槊拮褮?、雜木屑、棉花秸稈等[4-6]。

永康靈芝人工栽培產(chǎn)業(yè)發(fā)展已有40多年的歷史，但前期靈芝栽培品種和技術(shù)主要來自日韓[7]，市場上靈芝品種又比較混亂，一直缺乏自主選育的優(yōu)良靈芝品種。通過以永康本地野生靈芝菌種為試驗材料，設計多個原種和栽培種培養(yǎng)基配方，對菌種的適應性、產(chǎn)量以及培養(yǎng)基配方進行比較，篩選適宜的野生靈芝菌種及其配套栽培基質(zhì)，為野生靈芝的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料來源

2019年5月3日在永康水祥坑采集野生靈芝2株，2019年5月17日在永康歷山掃帚坑采集野生靈芝1株，2019年6月10日在永康歷山腳下石下后山上采集野生靈芝1株。分別將其命名為歷山1號、歷山2號、歷山3號。

1.2 培養(yǎng)基材料

馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、木屑、棉籽殼、麥麩、碎玉米、蔗糖、石膏。

2 方法

2.1 野生靈芝組織分離

選取健壯的幼芝（6分成熟），在接種箱內(nèi)先用75%的酒精將表面擦拭干凈，然后縱切。從菌蓋與菌柄交界處切出0.5 cm×0.5 cm的小塊，接種到PDA培養(yǎng)基斜面的中央，塞好棉塞。在25℃～28℃條件下培養(yǎng)，于第7天挑邊緣健壯菌絲進行轉(zhuǎn)接擴繁。

2.2 培養(yǎng)基配方

1） 母種培養(yǎng)基配方

選用常規(guī)PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g，水1 000 mL。

2） 原種培養(yǎng)基配方

配方A：雜木屑78%、麩皮20%、糖1%、石膏1%。

配方B：棉籽殼78%、麩皮20%、糖1%、石膏1%。

配方C：雜木屑70%、碎玉米粒8%、麩皮20%、糖1%、石膏1%。

3）栽培種培養(yǎng)料配方

配方D：木屑44%、棉籽殼44%、麩皮10%、糖1%、石膏1%。

配方E：木屑88%、麩皮10%、糖1%、石膏1%。

配方F：段木。

2.3 培養(yǎng)基的制作與培養(yǎng)

母種按PDA平板培養(yǎng)基的方法制作，培養(yǎng)基滅菌之前pH調(diào)整為6.5，在121℃的條件下滅菌20 min～30 min。共3個處理，每個處理10個重復。

原種按常規(guī)方法制作，培養(yǎng)基的pH調(diào)整為6.5，瓶裝，121℃滅菌2 h。共3個處理，每個處理10個重復。培養(yǎng)的條件為：黑暗，室溫（25℃～28℃），濕度 60%～65%。

2.4 栽培培養(yǎng)料制作

配方D和配方E制作方法相同，將各配料攪拌均勻，及時用自動裝袋機進行裝袋，栽培袋規(guī)格為17 cm×36 cm×0.06 mm。裝袋的培養(yǎng)料要求緊實且富有彈性，料重0.5 kg左右。料面壓平并在中部插入直徑為2 cm的接種棒直到料底，最后緊貼料面扎緊袋口，每個處理各1 000袋。

配方F制作方法為，將含水量為38%～45%的樹干截成長15 cm的段木，斷面應平整。把截好的段木剔去尖角和毛刺，每袋裝段木0.5 kg左右，上鍋及時滅菌，每個處理1 000袋。

2.5 大棚覆土栽培

所有配方均采用大棚覆土栽培。用鐵鍬開深度為35 cm、直徑為15 cm的栽培穴，穴之間間距為40 cm，在挖好的坑內(nèi)撒入辛硫磷防蟲。將長滿菌絲的菌袋轉(zhuǎn)移至大棚，將菌袋塑料袋去除，取出菌棒豎直放入坑內(nèi)，露出部分覆土。全部完成后打開噴灌設備進行噴霧，使菌棒吸足水分。后期管理與傳統(tǒng)大棚靈芝管理相同[8]。

2.6 測量和觀察指標

母種和原種分別在第7天測量菌絲生長速度，并觀察菌絲生長勢，菌絲的生長勢用“+”號表示。記錄菌絲長滿瓶的時間。栽培種每個配方隨機選100袋菌包采集子實體曬干，測定菌蓋直徑和厚度，稱取重量；隨機選100袋菌包收集孢子粉，曬干后稱取重量。

2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

使用Excel 2019統(tǒng)計分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同靈芝品種母種菌絲生長情況對比

不同靈芝品種母種菌絲生長情況對比見表1。

表1 不同靈芝品種母種菌絲生長情況對比Tab.1 Comparison of mycelial growth of different Ganoderma lucidum stock culture

如表1所示，使用同一培養(yǎng)基，母種菌絲生長速度最快的是歷山3號，達到0.43 cm·d-1，菌絲純白，菌絲較濃密、整齊，長勢最佳；其次是歷山2號，生長速度為0.36 cm·d-1，菌絲純白、濃密、整齊，長勢較好；歷山1號生長速度最慢，為0.34 cm·d-1，菌絲純白，但密度一般，且不整齊，長勢較差。

3.2 不同培養(yǎng)基配方對原種菌絲生長的影響

不同培養(yǎng)基配方對原種菌絲生長的影響見表2。

表2 不同培養(yǎng)基配方對原種菌絲生長的影響Tab.2 Effects of different medium formulas on mother spawn mycelium growth

如表2所示，在3種不同培養(yǎng)基上，歷山3號菌絲生長速度均較快，菌絲生長勢也最強，在原種的發(fā)菌時間上，滿瓶所用時間最短。歷山1號在3種配方中平均生長速度與歷山3號相當，但滿瓶時間較長。不同培養(yǎng)基對靈芝原種菌絲生長有影響，3個靈芝品種菌絲都在培養(yǎng)基配方C上生長速度最快，最快為0.52 cm·d-1，滿瓶時間也最短，最短可以達到33 d。

3.3 不同袋料配方對靈芝品種經(jīng)濟性狀影響

按照每噸干料所得產(chǎn)量進行計算，不同袋料配方對靈芝品種經(jīng)濟性狀影響見表3。

表3 不同栽培種袋料配方對靈芝品種經(jīng)濟性狀影響Tab.3 Effects of different cultivation formulas on economic traits of Ganoderma lucidum strains

如表3所示，歷山1號子實體呈扇形，歷山2號和歷山3號呈腎形。在大棚覆土栽培下，菌蓋直徑和菌肉厚度以歷山3號最大，平均直徑為12.53 cm，平均厚度為1.43 cm；歷山3號子實體和孢子粉的平均產(chǎn)量也要優(yōu)于歷山1號和歷山2號，分別為31.86 kg·t-1干料、11.14 kg·t-1干料。從靈芝子實體和孢子粉產(chǎn)量看，不同的袋料配比以配方F為最優(yōu)，其次為配方E，配方D的產(chǎn)量最低。

4 結(jié)論

試驗結(jié)果表明，歷山3號母種菌絲生長速度快，對應的菌絲純白，菌絲較濃密、整齊，長勢最佳；在原種培養(yǎng)試驗中，菌絲生長速度最快，滿瓶所用時間最短；在子實體栽培試驗中，菌蓋直徑、菌肉厚度、子實體和孢子粉的產(chǎn)量也最高。因此，歷山3號品種總體優(yōu)于歷山1號、歷山2號，比較適宜本地的生產(chǎn)推廣需求，可以作為菌株保藏和用于生產(chǎn)。

在原種培養(yǎng)基篩選中，添加玉米粒的配方C有利于提高發(fā)菌速度及菌絲濃密度；栽培袋料對比試驗中，從靈芝子實體和孢子粉產(chǎn)量看，以配方F為最優(yōu)，其次為配方E，配方D的產(chǎn)量最低。配方D的產(chǎn)量最低可能與棉籽殼木質(zhì)素含量比木屑低有關(guān)。由于段木成本較高，而且砍伐樹木影響生態(tài)環(huán)境，本試驗認為配方E更適合歷山3號配套栽培應用。