長鏈非編碼RNA在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后中的研究進(jìn)展

龔予希，張 響，翟博雅，楊野梵，張智弘

彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL)是一種具有侵襲性、復(fù)雜性、高致死率的非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma, NHL)，其臨床表現(xiàn)、免疫表型和分子特征異質(zhì)性明顯[1]。近年臨床聯(lián)合應(yīng)用利妥昔單抗與CHOP(環(huán)磷酰胺-阿霉素-長春新堿-強(qiáng)的松)[1]，一定程度上提高了DLBCL的治療效果，但仍有部分患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)、耐藥甚至死亡。若在診斷初期即能鑒別出高風(fēng)險患者，就可以對其實施更有效的治療策略，延長其生存期并改善患者生活質(zhì)量。然而，由于DLBCL的異質(zhì)性，國際預(yù)后指數(shù)(international prognostic index, IPI)[2]等臨床預(yù)后模型不能準(zhǔn)確地預(yù)測淋巴瘤的臨床病程，具有相同預(yù)后評分的患者也會出現(xiàn)不同的結(jié)果。因此，需要新的生物學(xué)標(biāo)志物輔助DLBCL的預(yù)后判斷和風(fēng)險分層。

長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA, LncRNA)是長度超過200個核苷酸，通常具有低序列保守性的RNA[3]。人類基因組中有15 000～60 000種LncRNA存在[4]。根據(jù)LncRNA的定位可將其分為五類：(1)基因間LncRNA；(2)反義LncRNA；(3)內(nèi)含子LncRNA；(4)雙向LncRNA；(5)重疊正義LncRNA[5]。對腫瘤樣本的全基因組關(guān)聯(lián)研究已經(jīng)確定了大量與各種癌癥發(fā)生和轉(zhuǎn)移相關(guān)的LncRNA[6]，且已有研究表明LncRNA的表達(dá)失調(diào)與DLBCL預(yù)后密切相關(guān)。因此，探討LncRNA在DLBCL預(yù)后中的價值具有重要意義。該文結(jié)合既往文獻(xiàn)報道，對與DLBCL預(yù)后相關(guān)的LncRNA及其作用進(jìn)行綜述(表1)。

表1 與DLBCL預(yù)后相關(guān)的LncRNA

1 單個LncRNA與DLBCL預(yù)后

1.1 PVT1PVT1定位于染色體8p21區(qū)域，屬于基因間LncRNA，是重要的表觀遺傳調(diào)節(jié)因子，可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)展來影響腫瘤細(xì)胞增殖，在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中均發(fā)揮了生物學(xué)作用[7]。Yang等[8]發(fā)現(xiàn)PVT1在DLBCL中的表達(dá)顯著增高，且與MYC表達(dá)、腫瘤大小和Ki-67增殖指數(shù)和結(jié)外受累器官數(shù)目呈正相關(guān)。PVT1高表達(dá)患者的總生存率和5年無進(jìn)展生存率較PVT1低表達(dá)組均更低(61.4%vs82.5%和51%vs72.8%)。此外，Yang等還評估了PVT1表達(dá)和IPI系統(tǒng)預(yù)測預(yù)后的能力，發(fā)現(xiàn)伴PVT1低表達(dá)和IPI低評分的患者預(yù)后最好，而伴PVT1高表達(dá)和IPI高評分的患者預(yù)后最差，提示PVT1是潛在的影響DLBCL預(yù)后的因素。

1.2 PANDAPANDA是基因間LncRNA，位于CDKN1A(p21)轉(zhuǎn)錄起始區(qū)上游5 kb處，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡的功能[9]。研究表明轉(zhuǎn)錄因子p53可與PANDA的啟動子結(jié)合，促使PANDA激活，進(jìn)而抑制MAPK/ERK通路的活性，參與調(diào)節(jié)腫瘤的增殖和細(xì)胞周期[10]。在DLBCL中p53和PANDA表達(dá)均降低，且PANDA表達(dá)與DLBCL臨床特征(如B癥狀、Ann Arbor分期、IPI評分)及對化療的反應(yīng)性相關(guān)。PANDA在診斷和預(yù)測DLBCL預(yù)后等方面也有重要價值，其診斷的敏感性和特異性分別為60.29%和77.94%；Kaplan-Meier生存分析也發(fā)現(xiàn)PANDA高表達(dá)患者的總生存期和無進(jìn)展生存期更長(P=0.003)，且多因素分析也表明PANDA是獨(dú)立的預(yù)后因素[10]。

1.3 NONHSAG026900由于DLBCL可以發(fā)生于正常B細(xì)胞發(fā)展的任何階段，Zhao等[11]利用GEO數(shù)據(jù)庫將DLBCL樣本與正常B細(xì)胞分化的五個階段(初始B細(xì)胞、中心母細(xì)胞、中心細(xì)胞、記憶B細(xì)胞和漿細(xì)胞)的樣本進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)基因間LncRNA NONHSAG026900在DLBCL中表達(dá)顯著降低，且其低表達(dá)可能是受轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游146 bp的CpG甲基化調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，non-GCB亞組較GCB亞組NONHSAG026900的表達(dá)水平更低，且無論接受哪種化療方案(CHOP或R-CHOP)，伴NONHSAG026900低表達(dá)患者的預(yù)后都更差，表明NONHSAG026900不僅可以用于鑒別DLBCL的細(xì)胞起源亞型，也可以用于預(yù)測DLBCL患者的預(yù)后，且輔助證明了“non-GCB型患者比GCB型患者預(yù)后更差”。盡管NONHSAG026900作為獨(dú)立預(yù)后因素的預(yù)測能力略次于IPI系統(tǒng)(受試者工作特征曲線下面積分別為0.703、0.715)，但聯(lián)合NONHSAG026900和IPI系統(tǒng)可以提高預(yù)測能力。

1.4 HOTAIRHOTAIR位于12號染色體上HOXC基因簇內(nèi)，是一種基因間LncRNA，其過表達(dá)在多種實體腫瘤中常見，如食管癌、胃癌、腸癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等，并且與這些腫瘤的不良預(yù)后相關(guān)[12-13]。Yan等[14]發(fā)現(xiàn)HOTAIR在DLBCL中表達(dá)水平顯著升高，并且可以通過PI3K/AKT/NF-κB通路調(diào)節(jié)DLBCL細(xì)胞增殖。敲低HOTAIR，PI3K、AKT、NF-κB的磷酸化水平顯著下降，且功能實驗也表明敲低HOTAIR伴隨DLBCL細(xì)胞增殖的抑制、細(xì)胞周期阻滯于G2/M期及細(xì)胞凋亡的增加。此外，HOTAIR表達(dá)與DLBCL臨床分期、腫瘤大小、B癥狀和IPI評分等臨床特征呈正相關(guān)，但其在DLBCL預(yù)后中的作用仍有爭議。Yan等[14]和葉麗花等[15]的研究均發(fā)現(xiàn)，伴HOTAIR高表達(dá)的DLBCL患者預(yù)后更差，這與HOTAIR在其他實體腫瘤預(yù)后中的作用一致；但Oh等[16]的研究提出了相反的觀點(diǎn)，他們認(rèn)為HOTAIR高表達(dá)與較好的生存結(jié)果相關(guān)。因此，還需要更多的研究來探討HOTAIR在DLBCL預(yù)后中的作用。

1.5 SNHG12SNHG12定位于染色體1p35.3，屬于基因間LncRNA，與腎細(xì)胞癌、子宮頸癌、前列腺癌、肝細(xì)胞癌、直腸癌等均有密切關(guān)系。Chen等[17]通過比較80對DLBCL和反應(yīng)性淋巴結(jié)增生樣本中LncRNA的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)SNHG12在DLBCL中高表達(dá)，該結(jié)果在DLBCL細(xì)胞系中被進(jìn)一步證明。SNHG12表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析表明，SNHG12高表達(dá)患者更易出現(xiàn)在Ⅲ+Ⅳ期、結(jié)外受累和伴LDH異常增高中。比較160例患者的生存情況發(fā)現(xiàn)，SNHG12低表達(dá)組患者具有更高的總生存率和無進(jìn)展生存率，表明SNHG12是一個有意義的預(yù)后因素。在機(jī)制上，SNGH12發(fā)揮內(nèi)源競爭RNA(competing endogenous RNAs, ceRNA)作用，通過吸附miR-195競爭性抑制其表達(dá)，從而促進(jìn)DLBCL細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。

1.6 FIRREShi等[18]在DLBCL中發(fā)現(xiàn)了537個表達(dá)水平改變的LncRNA，其中基因間LncRNA FIRRE表達(dá)水平升高最顯著。Kaplan-Meier生存分析結(jié)果表明，伴FIRRE高表達(dá)患者的總生存期較伴FIRRE低表達(dá)患者明顯縮短，是潛在的預(yù)測預(yù)后因子。生物信息學(xué)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MYC是FIRRE的上游轉(zhuǎn)錄激活子，MYC通過與FIRRE的啟動子結(jié)合正向調(diào)節(jié)FIRRE表達(dá)。Wnt/β-catenin通路是FIRRE的下游影響通路，沉默F(xiàn)IRRE不僅導(dǎo)致了β-catenin、Cyclin D1和C-myc的表達(dá)下降，還抑制了β-catenin向細(xì)胞核的轉(zhuǎn)運(yùn)，進(jìn)而抑制DLBCL細(xì)胞的增殖，促進(jìn)其凋亡。

1.7 其他LncRNA研究發(fā)現(xiàn)LUNAR1[19]、HULC[20]和PEG10[21]高表達(dá)，LincRNA-p21[22]低表達(dá)均與較差的總生存率和無進(jìn)展生存率相關(guān)，且Cox回歸分析表明它們具有獨(dú)立的預(yù)測預(yù)后價值。用類似的方法研究LncRNA NEAT1_1[23]、OR3A4[24]、BCAR4[25]、TP73-AS1[26]、MUC5-B-AS1[27]、RP11-513G11.1[28]，發(fā)現(xiàn)DLBCL中LncRNA的表達(dá)水平均升高，同時也具有獨(dú)立的預(yù)測DLBCL預(yù)后價值。利用LncRNA表達(dá)與DLBCL預(yù)后的關(guān)系輔助IPI系統(tǒng)，一定程度上可以增加預(yù)測的可信度，有助于我們了解DLBCL的發(fā)展規(guī)律，采取最佳治療方案，也可以高效地對治療效果進(jìn)行評估。

2 多個LncRNA組合與DLBCL預(yù)后

2016年，Sun等[29]分析1 043例GEO數(shù)據(jù)庫DLBCL患者的LncRNA表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)6個與生存結(jié)果顯著相關(guān)的LncRNA，并通過風(fēng)險評分模型方法構(gòu)建了能將DLBCL患者分為具有顯著不同生存結(jié)局的高風(fēng)險和低風(fēng)險組six-LncRNA，其中MEE-AS1、CSMD2-AS1、RP11-360F5.1、RP11-25K19.1、CTC-467M3.1多在低風(fēng)險組中表達(dá)，而SACS-AS1多在高風(fēng)險組中表達(dá)。此外，six-LncRNA預(yù)測DLBCL預(yù)后不依賴于傳統(tǒng)臨床因素，提示six-LncRNA可以作為分子水平上的預(yù)后指標(biāo)輔助IPI系統(tǒng)。

為進(jìn)一步研究LncRNA的預(yù)后價值，Zhou等[30]于2017年利用GEO數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)有156個LncRNA在GCB-DLBCL和ABC-DLBCL中表達(dá)有顯著差異，其中56個LncRNA在ABC亞組中表達(dá)上調(diào)，100個LncRNA在GCB亞組中表達(dá)上調(diào)。他們在這156個LncRNA中篩選出17個在鑒別GCB和ABC亞組時預(yù)測精度較好的LncRNA(ENTPD1-AS1、SACS-AS1、SH3BP5-AS1、RP11-101C11.1、AC009892.10、RP1-68D18.4、MIR600HG、RP11-278 J6.4、RP11-203B7.2、CSMD2-AS1、CTC-467M3.1、RP4-788P 17.1、RP11-553 L6.5、CRNDE、RP11-519G 16.3、RP11-21 L19.1、MME-AS1)，并將其稱為SubSigLnc-17。以SubSigLnc-17為特征的亞組患者臨床結(jié)果差異有顯著性(GCB和ABC亞組患者的5年總生存率分別為69.2%和44.1%)，多變量Cox回歸分析證明SubSigLnc-17可以作為獨(dú)立的預(yù)測預(yù)后因子。

3 LncRNA和mRNA組合與DLBCL預(yù)后

研究表明LncRNA和mRNA組合在乳腺癌和直腸癌中有較好的預(yù)后價值[31-32]。Gao等[33]為研究LncRNA-mRNA在DLBCL中是否也有風(fēng)險分層的作用，從5個GEO數(shù)據(jù)集中篩選出11個RNA(包括9個mRNA和2個LncRNA)，其mRNA中THOC1、EEF1A1、CCDC78、SLC35F4、SLC43A2和LncRNA中ZNF252P-AS1、SNHG16在長期生存DLBCL中的表達(dá)水平升高，而mRNA中CD1E、APBA2、PDK1、NR3C1的表達(dá)水平降低。他們將11個RNA整合構(gòu)建了一個MGRS模型，該模型與細(xì)胞周期、DNA復(fù)制和修復(fù)相關(guān)。以MGRS=0為截斷值，DLBCL被分為MGRS-high風(fēng)險組和MGRS-low風(fēng)險組，MGRS-high風(fēng)險組患者的總生存率明顯低于MGRS-low風(fēng)險組。此外，分層分析和多因素Cox回歸分析表明，MGRS可以獨(dú)立于IPI評分提供預(yù)后信息，且結(jié)合MGRS與IPI評分的預(yù)測效率更高、更具臨床實用性。

4 展望

2000年Alizadeh等[34]根據(jù)基因表達(dá)譜對DLBCL進(jìn)行免疫表型分型，2018年Schmitz等[35]、Rosenwald等[36]通過二代測序技術(shù)根據(jù)基因突變情況鑒別DLBCL的遺傳亞型，并進(jìn)一步對DLBCL進(jìn)行預(yù)后判斷和風(fēng)險分層，使我們對DLBCL的臨床、形態(tài)和免疫表型譜的了解以及對DLBCL分子機(jī)制的認(rèn)知均有了較大的深化；而這些知識正被轉(zhuǎn)化為新治療策略的設(shè)計和新型治療藥物的開發(fā)。根據(jù)DLBCL的分子發(fā)現(xiàn)進(jìn)行預(yù)后分層及設(shè)計個性化的治療方案可能是現(xiàn)在最好的發(fā)展方向。近年研究報道表明，LncRNA可以調(diào)節(jié)DLBCL相關(guān)的代謝通路和基因表達(dá)，參與DLBCL細(xì)胞的凋亡、遷移、增殖等重要生物學(xué)過程，并且在DLBCL的診斷、預(yù)后中具有顯著價值，甚至影響患者對化療藥物的敏感性和耐藥，提示LncRNA可以作為DLBCL的分子標(biāo)志物，提供預(yù)后相關(guān)信息并且是潛在的治療靶點(diǎn)。此外，多個LncRNA聯(lián)合、LncRNA與mRNA聯(lián)合、LncRNA與IPI系統(tǒng)聯(lián)合等均被證明具有更好的預(yù)測預(yù)后和進(jìn)行風(fēng)險分層的能力。隨著技術(shù)的發(fā)展，實時定量PCR法、表達(dá)譜基因芯片技術(shù)和高通量RNA測序技術(shù)等使LncRNA的檢測更加簡便高效。然而，LncRNA的功能和機(jī)制并未完全闡明，以及如何將LncRNA高效簡便的應(yīng)用至臨床診治過程中，仍需進(jìn)一步分析。