網(wǎng)狀纖維染色、Masson三色染色在子宮平滑肌腫瘤良惡性鑒別中的應(yīng)用價(jià)值分析

張濤濤（焦作市人民醫(yī)院病理科，河南 焦作454350）

子宮平滑肌瘤是多發(fā)于30～50歲間的女性生殖器官常見(jiàn)腫瘤，20歲以下女性發(fā)病率較低［1］。子宮平滑肌瘤主要由子宮平滑肌細(xì)胞增生及纖維結(jié)締組織支持而形成，早期癥狀不顯，多由常規(guī)體檢時(shí)發(fā)現(xiàn)并確診。大多數(shù)子宮平滑肌瘤腫瘤均為良性結(jié)節(jié)，然而也存在少部分惡性，如何在早期對(duì)子宮肌瘤進(jìn)行良惡性鑒別診斷，對(duì)于患者生存和預(yù)后非常關(guān)鍵。現(xiàn)階段對(duì)于子宮肌瘤良惡性診斷方式主要通過(guò)病理活檢來(lái)判斷是否出現(xiàn)腫瘤性壞死，而常規(guī)的蘇木精-伊紅（HE）染色得到的切片形態(tài)難以觀察到腫瘤性壞死特征［2］，因此，急需在常規(guī)HE染色的基礎(chǔ)上，再通過(guò)膠原纖維染色（Masson）、網(wǎng)狀纖維染色、肌肉組織染色（磷鎢酸蘇木素）、脂肪染色（蘇丹Ⅲ）、糖原染色（PAS）以及彈力纖維染色等特殊染色方法對(duì)腫瘤良惡性質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步鑒別［3］。本研究對(duì)42例子宮平滑肌瘤患者腫瘤組織切片進(jìn)行網(wǎng)狀纖維染色以及膠原纖維Masson三色染色，觀察并對(duì)比兩種染色方式是否能夠鑒別腫瘤的良惡性。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年10月～2019年10月我院收治的需進(jìn)行手術(shù)切除的子宮平滑肌瘤患者42例，年齡28～55（44.2±5.8）歲。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本收集 收集腫瘤組織標(biāo)本，選擇壞死最明顯區(qū)域制作病理學(xué)切片，用4%多聚甲醛固定30min，脫水后用石蠟包埋，制成厚度約為4μM的切片，進(jìn)行后續(xù)染色實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 HE染色 將4μM石蠟切片置于含Ⅰ二甲苯的染缸中，5min后再與Ⅱ二甲苯反應(yīng)，以脫蠟，再用Ⅰ、Ⅱ無(wú)水乙醇浸泡后沖洗，再倒入蒸餾水中浸泡2min。再用蘇木精染色液染色10min，伊紅染色液染色2min，蒸餾水洗去浮色，Ⅰ、Ⅱ無(wú)水乙醇脫水2min，Ⅰ、Ⅱ二甲苯透明3min，封片干燥。

1.2.3 網(wǎng)狀纖維染色 采用Gomori’s嗜銀染色對(duì)4μM石蠟切片進(jìn)行處理。先將石蠟切片脫蠟至蒸餾水中，用高溫酸鉀溶液染色3min后用蒸餾水沖洗，草酸溶液漂白1min后沖洗，硫酸鐵銨溶液染色1min后沖洗，氨銀溶液浸染5min后沖洗，甲醛溶液還原1min后沖洗，氯化金溶液處理15min后沖洗，再用硫代硫酸鈉溶液固定2min后沖洗，最后用Ⅰ、Ⅱ無(wú)水乙醇脫水2min，Ⅰ、Ⅱ二甲苯透明3min，封片干燥。

1.2.4 Masson染色 將4μM石蠟切片于Bonin液中脫水包埋后脫蠟至蒸餾水中，用Weigert鐵蘇木素染色10min后用蒸餾水沖洗，再用1%的鹽酸酒精分化后沖洗，麗春紅酸性品紅溶液染色10min后沖洗，1%的磷鉬酸溶液染色10min，再用2%醋酸苯胺藍(lán)溶液染色5min，1%冰醋酸處理2min，再用Ⅰ、Ⅱ無(wú)水乙醇脫水3次，每次2min，Ⅰ、Ⅱ二甲苯透明3min，封片干燥。

1.2.5 染色結(jié)果判定 網(wǎng)狀纖維染色結(jié)果呈黑色，膠原纖維Masson染色結(jié)果呈綠色。當(dāng)纖維結(jié)構(gòu)呈蜂窩狀或玻璃樣時(shí)為腫瘤性壞死，而纖維呈線性時(shí)為部分壞死，纖維缺失則認(rèn)為是無(wú)腫瘤性壞死。參照劉恩彬等［4］的評(píng)估方式，對(duì)壞死區(qū)域的染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分：未見(jiàn)明顯纖維及染色記0分，偶見(jiàn)稀疏纖維，同時(shí)著色較少且分布零散記1分，較多纖維環(huán)繞交互但染色分布稀疏記2分，纖維及染色密集分布記3分。取平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料采用±s表示，兩組間比較行t檢驗(yàn)，多組間比較行SNK-q檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用例（百分率）表示，行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病理學(xué)分型分析 對(duì)42例子宮平滑肌瘤患者進(jìn)行網(wǎng)狀纖維染色以及Masson染色，觀察到與正常平滑肌細(xì)胞相似，顯微鏡下觀察到長(zhǎng)桿狀細(xì)胞核，腫瘤細(xì)胞呈梭子形或束狀以及旋渦狀排列，且腫瘤直徑以及細(xì)胞分化程度較正常的良性腫瘤18例，細(xì)胞結(jié)構(gòu)呈大小不一、分裂旺盛、細(xì)胞核及染色質(zhì)異常，顏色不均勻，細(xì)胞排列緊密且呈圓形及多邊形的惡性腫瘤14例，以及部分細(xì)胞偶有異型，細(xì)胞核及染色質(zhì)大小、顏色正常且均勻的惡性程度未定的腫瘤10例。

2.2 不同惡性程度患者網(wǎng)狀纖維、Masson染色評(píng)分分析比較 子宮平滑肌腫瘤壞死區(qū)域內(nèi)惡性腫瘤的網(wǎng)狀纖維染色評(píng)分為2.85±0.49分,顯著高于惡性程度未定腫瘤的1.18±0.56分及良性腫瘤的0.35±0.31分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Masson染色評(píng)分結(jié)果顯示，惡性腫瘤與惡性程度未定、良性腫瘤染色評(píng)分比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)附表。

附表 不同惡性程度患者網(wǎng)狀纖維、Masson染色評(píng)分分析比較（±s，分）

附表 不同惡性程度患者網(wǎng)狀纖維、Masson染色評(píng)分分析比較（±s，分）

?

3 討論

子宮平滑肌腫瘤是由結(jié)締組織及平滑肌組織增生形成的婦科腫瘤，多為良性，然而也有報(bào)道稱(chēng)，約0.4%～0.8%左右的良性腫瘤會(huì)進(jìn)一步演變成惡性腫瘤［5］，鑒于子宮平滑肌腫瘤早期癥狀不顯，晚期出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)移以后才被發(fā)現(xiàn)，而晚期腫瘤治療效果十分有限，嚴(yán)重影響患者的生存率、預(yù)后及生命安全［6］。因此，如何在早期對(duì)子宮平滑肌瘤的腫瘤良惡性進(jìn)行診斷鑒別，將病情控制在早期，對(duì)患者而言意義重大。

現(xiàn)階段臨床常用HE染色輔助網(wǎng)狀纖維染色及Masson染色的方式對(duì)子宮平滑肌瘤的進(jìn)行鑒別和篩查。本次研究也采用這種方式，對(duì)42例患者腫瘤切片進(jìn)行病理活檢，結(jié)果顯示，腫瘤性質(zhì)為良性者18例，惡性程度未定者10例、惡性者14例。分別用網(wǎng)狀纖維染色以及Masson三色染色對(duì)腫瘤切片染色程度進(jìn)行評(píng)分發(fā)現(xiàn)，Masson染色結(jié)果中惡性腫瘤、惡性程度未定腫瘤以及良性腫瘤的評(píng)分，無(wú)顯著差異（P＞0.05），而網(wǎng)狀纖維染色結(jié)果中，惡性腫瘤的評(píng)分明顯高于惡性程度未定腫瘤以及良性腫瘤（P＜0.05），表明網(wǎng)狀纖維染色在子宮平滑肌腫瘤的良惡性鑒別中作用效果更突出?，F(xiàn)階段臨床對(duì)于子宮平滑肌腫瘤良惡性的鑒別和診斷多通過(guò)電鏡下觀察是否出現(xiàn)腫瘤性壞死來(lái)判斷的，然而在臨床實(shí)際運(yùn)用中，常因平滑肌腫瘤的凝固性壞死和缺血性壞死交替出現(xiàn)，常規(guī)的HE染色及免疫組化法難以達(dá)到良好的鑒別效果［7］，因此還需通過(guò)特殊染色法來(lái)觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)輔助判斷。

網(wǎng)狀纖維染色是臨床和實(shí)驗(yàn)室用于區(qū)別癌癥以及肉瘤的重要手段，不僅在血管、神經(jīng)系統(tǒng)以及淋巴系統(tǒng)等癌癥鑒別中表現(xiàn)優(yōu)異，也同樣用于鑒別子宮平滑肌瘤腫瘤良惡性［8］。通過(guò)銀氨溶液浸染后甲醛溶液還原，將分部與子宮平滑肌腫瘤切片中的網(wǎng)狀纖維染成黑色，再在電鏡下觀察樣片中黑色區(qū)域是否出現(xiàn)纖維組織斷裂、塌陷等形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變，用以區(qū)分良性腫瘤及惡性腫瘤。Masson三色染色法最早由結(jié)締組織染色法改良而成，通過(guò)對(duì)腫瘤組織進(jìn)行染色，來(lái)判斷其是否較為膠原纖維或肌源或神經(jīng)纖維［9］。而在臨床及科研實(shí)驗(yàn)室中，Masson染色將分布在腫瘤切片中的膠原纖維組織染色綠色，觀察綠色區(qū)域分布的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，來(lái)區(qū)分纖維組織及平滑肌組織。

對(duì)于良性子宮平滑肌腫瘤而言，腫瘤壞死程度較低，細(xì)胞結(jié)構(gòu)保存較為完好，多呈蜂窩狀以及毛玻璃樣，而纖維狀破壞成線性或缺失時(shí)腫瘤結(jié)構(gòu)改變，增生異常，壞死程度高。網(wǎng)狀纖維染色在子宮平滑肌腫瘤的鑒別能力更強(qiáng)，顯色相比Masson染色更好。原因可能在于，Masson染色的顏色為綠色，而腫瘤壞死過(guò)程中膠原纖維的增色顏色與之相近，難以很好區(qū)別。而網(wǎng)狀纖維則不存在此問(wèn)題，不僅可簡(jiǎn)單觀察到黑色區(qū)域的面積大小，還可以通過(guò)網(wǎng)狀纖維的破壞程度進(jìn)行直觀的對(duì)比。這也與王雪晴等［10］的研究結(jié)論相符。

綜上所述，本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)子宮平滑肌腫瘤進(jìn)行網(wǎng)狀纖維染色以及Masson染色，對(duì)比染色后腫瘤壞死程度來(lái)鑒別腫瘤的良惡性，發(fā)現(xiàn)網(wǎng)狀纖維染色表現(xiàn)出優(yōu)異的顯色和鑒定能力，臨床應(yīng)用價(jià)值更高。