PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與帕金森癡呆精神行為癥狀的相關(guān)性

姜黎梅 王英 郭小鋒

(寶雞市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，陜西 寶雞 721000)

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)一種發(fā)病率較高的與年齡、環(huán)境、遺傳等因素相關(guān)的進(jìn)展緩慢的神經(jīng)退行性疾病，患者主要臨床表現(xiàn)為震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、僵硬等。帕金森病末期容易進(jìn)展為帕金森癡呆(parkinson’s disease dementia，PDD)，嚴(yán)重影響患者的正常生活[1]。由于PD早期癥狀相對(duì)隱匿，疾病進(jìn)展緩慢，疾病不易在早期確診，多數(shù)患者就診時(shí)已處于病理?yè)p害的中晚期階段。PDD被認(rèn)為是皮質(zhì)性癡呆及皮質(zhì)下癡呆的典型代表，若能在早期對(duì)PD患者病情及時(shí)診斷和評(píng)估，對(duì)于控制患者病情，減少PDD疾病的發(fā)生和進(jìn)展具有積極意義。重組人帕金森病蛋白7(recombinant human parkinson disease protein 7，PARK7)具有抗氧化應(yīng)激反應(yīng)、蛋白水解酶功能與PD患者氧化應(yīng)激反應(yīng)存在密切關(guān)系[2]。血漿外泌體miRNA被證實(shí)與機(jī)體多種疾病存在密切關(guān)系，研究[3]表明，在PD患者中存在miR-331-5p普遍高表達(dá)的情況。抗氧化酶是機(jī)體防止氧化應(yīng)激、清除活性自由基的一類(lèi)酶，PDD患者較PD早期多巴胺神經(jīng)元抗氧化能力和氧化應(yīng)激失衡更嚴(yán)重，導(dǎo)致抗氧化酶水平明顯異常。本文主要探討PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與PDD患者精神行為癥狀的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院2018年10月至2020年9月收治的80例PDD患者，納入患者均經(jīng)臨床檢查確診，符合原發(fā)性PD及PDD的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；患者及家屬知情同意，自愿簽署知情同意書(shū)；臨床資料完整，能夠完成相關(guān)量表評(píng)價(jià)。已排除肝腎功能異常者；合并腦部創(chuàng)傷史、腦血管疾病、免疫性疾病、急慢性感染、血液系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤患者；合并其他神經(jīng)退行性疾?。晃拿?、精神系統(tǒng)異常及其他無(wú)法配合研究者。將所有患者依照臨床癡呆評(píng)分量表(CDR)[5]分為輕度組(CDR評(píng)分0.5或1分，n=50)和中重度組(CDR評(píng)分2或3分，n=30)，其中輕度組男29例，女21例，年齡47～79歲，平均(67.2±3.8)，病程0.5～10年，平均(5.1±1.3)年，中重度組男18例，女12例，年齡49～80歲，平均(68.1±4.1)歲，病程0.5～9年，平均(4.9±1.4)年。另選取50名同期于我院接受體檢的健康志愿者作為對(duì)照組，其中男30例，女20例，年齡45～85歲，平均(68.3±4.4)歲。三組一般比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究取得我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 有研究對(duì)象采用神經(jīng)精神調(diào)查問(wèn)卷(NPI)評(píng)估精神行為癥狀，分?jǐn)?shù)越高，癥狀越嚴(yán)重。采用統(tǒng)一PD評(píng)定量表運(yùn)動(dòng)檢查(UPDRS)評(píng)估運(yùn)動(dòng)功能，評(píng)分越低，運(yùn)動(dòng)功能越好。采用蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估量表(MoCA)及簡(jiǎn)易精神狀態(tài)檢查表(MMSE)評(píng)估認(rèn)知功能，MoCA量總分30分，分?jǐn)?shù)越高認(rèn)知功能越好；MMSE量表總分30分，分?jǐn)?shù)越高，認(rèn)識(shí)功能越高。并采用生活活動(dòng)能力量表(ADL)評(píng)估日常生活活動(dòng)能力，分?jǐn)?shù)越高，能力越好。所有研究對(duì)象(包括對(duì)照組)均于入院當(dāng)日清晨抽取5 mL靜脈血，3 000 r/min離心分離血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay ,ELISA)測(cè)定炎癥因子C反應(yīng)蛋白(CRP)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)、抗氧化酶指標(biāo)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)及PARK7水平，試劑盒均購(gòu)自日立高科技貿(mào)易(上海)有限公司，嚴(yán)格執(zhí)行說(shuō)明書(shū)各項(xiàng)操作。采用RT-qPCR法測(cè)定血清外泌體miR-331-5p水平，取離心獲得的血清3 000 r/min離心15 min清除細(xì)胞碎片，TRI試劑分離血漿RNA。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(購(gòu)自北京諾博萊德科技有限公司)反向轉(zhuǎn)錄合成cDNA，采用美國(guó)Applied Biosystems7900實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)機(jī)檢測(cè)血漿外泌體miR-331-5p表達(dá)，引物序列：miR-331-5p，上游：5’-AUACCUA-3’，下游：5’-CGCAACA-3’；GADPH，上游：5’-GTCAACGGATTG-GTCTGTATT-3’，下游：5’-AGTCTTCTGG-GTGGCAGTAT-3’，試劑盒購(gòu)自丹麥Denmark公司，反應(yīng)條件：95℃ 10 min，95℃ 15s，40個(gè)循環(huán)，60℃延伸1 min。采用2-△△Ct檢測(cè)miR-331-5p表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1問(wèn)卷調(diào)查評(píng)分的比較 中重度組患者NPI、UPDRS評(píng)分顯著高于輕度組和對(duì)照組，MoCA、MMSE、ADL評(píng)分均顯著低于輕度組和對(duì)照組(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組問(wèn)卷調(diào)查評(píng)分結(jié)果的比較分,n=50]

2.2血清炎癥因子水平的比較 中重度組的各項(xiàng)血清炎癥因子水平顯著高于輕度組(P<0.05)；輕度組、中重度組的各項(xiàng)血清炎癥因子水平均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組血清炎癥因子水平的比較

2.3血清PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平比較 中重度組患者血清PARK7、miR-331-5p表達(dá)水平顯著高于輕度組，GSH-PX、SOD、CAT水平顯著低于輕度組(P<0.05)。輕度組和中重度組患者血清PARK7、miR-331-5p表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，GSH-PX、SOD、CAT水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組血清PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平的比較

2.4PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與各血清炎癥因子的相關(guān)性 PARK7、miR-331-5p表達(dá)與血清炎癥因子CRP、TNF-α、MCP-1存在明顯正相關(guān)性(P<0.05)；GSH-PX、SOD、CAT水平與血清炎癥因子CRP、TNF-α、MCP-1存在明顯負(fù)相關(guān)性(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與各血清炎癥因子的相關(guān)性

2.5PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與各問(wèn)卷量表評(píng)分的相關(guān)性 PARK7、miR-331-5p與NPI、UPDRS評(píng)分存在明顯正相關(guān)性，與MoCA、MMSE、ADL存在明顯負(fù)相關(guān)性(P<0.05)；GSH-PX、SOD、CAT與NPI、UPDRS評(píng)分存在明顯負(fù)相關(guān)性，與MoCA、MMSE、ADL存在明顯正相關(guān)性(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與各問(wèn)卷量表評(píng)分的相關(guān)性

3 討 論

研究[6]指出，PD患者由于多巴胺分泌不足，從而影響患者的計(jì)劃能力、工作記憶、注意力等執(zhí)行能力。多巴胺與神經(jīng)末梢的促性腺激素釋放激素存在軸突聯(lián)系，多巴胺能抑制其分泌而影響人的情緒。本研究結(jié)果顯示，帕金森伴中重度癡呆患者NPI、UPDRS評(píng)分顯著高于帕金森伴輕度癡呆患者，MoCA、MMSE、ADL評(píng)分均顯著低于輕度癡呆患者。提示帕金森伴癡呆患者存在明顯的認(rèn)知功能、運(yùn)動(dòng)功能障礙及精神行為癥狀異常，嚴(yán)重降低了患者的日常生活活動(dòng)能力。

PD患者多巴胺分泌不足還會(huì)導(dǎo)致機(jī)體抗氧化物過(guò)量消耗，使生物膜受到氧化自由基的破壞，進(jìn)而引發(fā)機(jī)體氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，影響神經(jīng)元代謝異常，導(dǎo)致PD患者癡呆的發(fā)生并進(jìn)一步影響其精神行為癥狀[7]。本研究中，中重度PDD患者機(jī)體CRP、TNF-α及MCP-1水平較輕度PDD患者及健康對(duì)照人群均明顯升高。研究[8]表明，炎癥反應(yīng)與PD發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，促炎性細(xì)胞因子對(duì)于多巴胺能神經(jīng)元具有毒性作用，導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞損傷凋亡。CRP為非特異性炎癥反應(yīng)生物學(xué)標(biāo)志物，CRP升高可導(dǎo)致腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞損傷。PD患者腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞激活，促使CRP等炎性細(xì)胞因子大量釋放和聚集。TNF-α可促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞合成集落刺激因子參與炎癥反應(yīng)，TNF-α還能影響細(xì)胞鈣離子水平，造成細(xì)胞損傷。MCP-1參與了機(jī)體炎癥反應(yīng)的多個(gè)環(huán)節(jié)，研究認(rèn)為MCP-1與PD患者抑郁程度、認(rèn)知功能障礙等存在明顯相關(guān)性。因此，炎癥水平與PDD患者疾病發(fā)生、發(fā)展及精神行為癥狀存在密切關(guān)系。

氧化應(yīng)激是導(dǎo)致PDD發(fā)生的重要因素，PARK7為PD發(fā)病早期常染色體隱性基因，可有效發(fā)揮蛋白水解酶及抗氧化應(yīng)激作用[9]。PARK7可作為機(jī)體氧化應(yīng)激感應(yīng)器，保護(hù)神經(jīng)元不受氧化應(yīng)激損害[10-11]。本研究中，PDD患者中PARK7水平明顯升高，GSH-PX、SOD、CAT明顯降低，且隨著病情進(jìn)展各指標(biāo)變化更顯著。提示隨著PDD疾病進(jìn)展，機(jī)體氧自由基大量產(chǎn)生，而抗氧化酶水平降低，導(dǎo)致氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，進(jìn)而損傷黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元，導(dǎo)致PDD神經(jīng)行為特征等病情發(fā)展。miR-331-5p與PD疾病嚴(yán)重程度存在密切關(guān)系。另有研究[12]證實(shí)，miR-331-5p與PD患者機(jī)體氧化應(yīng)激的發(fā)展存在一定的關(guān)聯(lián)。本研究中，PDD患者同樣存在miR-331-5p表達(dá)明顯升高的情況。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與炎癥因子及各量表評(píng)分存在明顯相關(guān)性。PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與PDD更嚴(yán)重機(jī)體抗氧化應(yīng)激能力密切相關(guān)，反映了PDD患者病情變化，影響了患者的精神行為癥狀的進(jìn)展。

綜上所述，PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平與帕金森癡呆患者炎癥水平及精神行為癥狀有關(guān)，檢測(cè)其水平有助于PDD患者的臨床診斷和治療。但是對(duì)于藥物治療后輕度組和中重度組PARK7、miR-331-5p及抗氧化酶水平變化情況，及其與帕金森病患者精神行為癥狀是否存在一致性變化仍有待進(jìn)一步研究。