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    2018年貴州省南北部地區(qū)艾滋病感染者抗病毒治療前HIV-1基因亞型和耐藥情況研究

    2021-10-11 02:51:16方星張信輝邢輝楊曉慧趙明伍柳興鳳
    貴州醫(yī)藥 2021年9期
    關鍵詞:耐藥

    方星 張信輝 邢輝 楊曉慧 趙明伍 柳興鳳

    (1.貴州省疾病預防控制中心/實驗中心,貴州 貴陽 550004;2.中國疾病預防控制中心/性病艾滋病預防控制中心,北京 102206;3.黔南州疾病預防控制中心,貴州 都勻 558000;4.遵義市疾病預防控制中心,貴州 遵義 563000;5.遵義醫(yī)科大學/貴州省普通高等學校腦科學特色重點實驗室,貴州 遵義 563000)

    全球擴大抗逆轉錄病毒治療(antiretroviral therapy,ART)通過有效抑制 HIV 感染者體內病毒的復制導致HIV-1 發(fā)病率和病死率大幅下降,使艾滋病成為慢性可治療的疾病[1-2]。隨著我國艾滋病ART工作的快速推廣和ART人數(shù)的增長,以及藥物的有限選擇下,HIV耐藥株的問題已經(jīng)日益凸顯,特別是在貴州省長期實施ART后,ART前的原發(fā)耐藥值得關注。而我省之前主要關注治療后的獲得性耐藥,所以本研究對2018年1—12月貴州省南北部地區(qū)(黔南州、遵義市)ART前388名新發(fā)現(xiàn)的HIV感染者進行耐藥檢測,對其HIV-1耐藥基因型和耐藥株的流行水平進行分析,為控制HIV耐藥株的流行提供參考依據(jù)。

    1 對象與方法

    1.1研究對象 2018年貴州省南北部地區(qū)(黔南州、遵義市)1—12月開始抗病毒治療前、年齡≥18歲的新發(fā)現(xiàn)HIV感染者,在提供書面知情同意書后,按初始的ART時間先后順序入組,收集流行病學資料,并采集ART前的抗凝靜脈血并分離血漿,運送到貴州省艾滋病確證中心實驗室。

    1.2檢測方法 采用in-house方法進行耐藥檢測。使用 MagNA Pure LC 全自動核酸提取儀和 MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit(德國,Roche)提取血漿RNA。用 One Step RNA PCR Kit(AMV)(日本,Takara)和引物 MAW26、RT21(北京,天一輝遠)進行逆轉錄和巢式PCR 擴增pol基因區(qū),引物序列見表1。瓊脂糖凝膠電泳鑒定目的片段1.3kb后,送北京天一輝遠生物科技有限公司進行PCR 產物純化、測序、序列拼接和校對。

    表1 耐藥基因檢測引物序列

    1.3基因型、耐藥程度分析 將得到包括蛋白酶區(qū)1~99氨基酸和逆轉錄酶區(qū)1~300氨基酸的pol基因區(qū)序列,提交美國斯坦福大學的網(wǎng)絡HIV數(shù)據(jù)庫進行基因型分析、耐藥性突變位點分析和對各種抗病毒藥物的耐受程度分析,對任何一種藥物出現(xiàn)低度及以上耐藥即判斷為基因型耐藥。

    2 結 果

    2.1調查對象的基本特征 共調查2018年1—12月貴州省南北部黔南州和遵義市抗病毒治療前、年齡≥18歲的新發(fā)現(xiàn)HIV感染者388例,并采集抗凝血樣。經(jīng)提取、擴增和測序,獲得341例pol區(qū)基因片段。其中,納入對象性別比為234/107(男/女),年齡18~83歲,平均(48.94±14.96)歲,漢族與少數(shù)民族比例為 237/104。調查時CD4+T淋巴細胞≤200個/μL占30.5%(104/341),201~350個/μL占25.81%(88/341),351~500個/μL占15.54%(53/341),>500個/μL占6.61%(21/341),缺失CD4+T淋巴細胞的占21.99%(75/341)。病毒載量檢測比例為61.58%(210/341),病毒載量≤1 000 copies/mL占1.17%(4/341),1 001~100 000 copies/mL占31.09%(106/341),>100 000 copies/mL占29.33%(100/341)。婚姻狀況,未婚者占16.42%(56/341),已婚或同居者占50.15%(171/341),離婚或喪偶者占31.67%(108/341)。傳播途徑以異性傳播為主(94.43%,322/388),同性傳播占3.81%(13/341)。見表2。

    表2 341例獲得pol區(qū)基因片段HIV感染者的基本情況[n(%)]

    2.2研究對象HIV-1基因亞型的分布情況 在得到的341份pol區(qū)基因片段中,發(fā)現(xiàn)8種HIV-1基因型,其中占比最多的基因型是CRF01_AE(54.55%,186/341),其次為CRF07_BC(27.57%,94/341)和CRF08_BC (12.90%,44/341),其他亞型還包括CRF55_01B以及A、B、C、D亞型。

    2.3研究對象HIV-1耐藥發(fā)生情況 發(fā)現(xiàn)耐藥突變的比例為12.02%(41/341),包括NRTIs耐藥突變1.76%(6/341),ABC、FTC、3TC耐藥分別達0.88%(3/341),HIV耐藥突變位點;NNRTIs相關耐藥突變9.68%(33/341),其中,EFV耐藥占7.33%(25/341)、NVP耐藥占9.09%(31/341);PIs耐藥突變占1.17%(4/341),HIV耐藥突變位點。發(fā)生NRTIs和NNRTIs、NNRTIs和PIs交叉耐藥分別占0.29%(1/341)。耐藥基因突變主要與非核苷反轉錄酶抑制劑 (NNRTIs)(33/341,9.68%)有關。V179(18/341,5.28%)是其中較突出的突變位點,其次為V106(7/341,2.05%)、E138(6/341,1.76%)。見表3。

    表3 41例HIV-1感染者耐藥特征分析

    3 討 論

    HIV耐藥株的出現(xiàn)使感染者ART的效果下降,同時耐藥株在未治療人群中的傳播和流行也給ART的長期實施增加障礙。本研究對2018年1—12月貴州省南北部地區(qū)(黔南州、遵義市)ART前388名新發(fā)現(xiàn)的HIV感染者進行耐藥檢測,對得到的341份pol區(qū)基因片段的HIV-1耐藥基因型和耐藥突變的流行水平進行分析研究。

    在亞型的分布上,貴州省HIV以CRF01_AE為主,占54.55%,其次為CRF07_BC和CRF08_BC,也有多種其他亞型(CRF55_01B以及A、B、C、D亞型并存),這與柳興鳳等人的2013-2017年貴州省艾滋病患者HIV亞型分布研究[3]結果一致,也與我省以性傳播流行毒株亞型相符合[3-4]。

    貴州省2009年及2015年的HIV耐藥警戒線調查顯示耐藥率分別為0、3.5%,均小于5%,為低流行水平[5-6]。而此次調查發(fā)現(xiàn)HIV耐藥株的比例為12.02%,根據(jù)WHO耐藥監(jiān)測指南的標準,已達到中度耐藥水平,耐藥為單重耐藥與多重耐藥并存,并且已發(fā)現(xiàn)有PI類藥物的原發(fā)耐藥,類型復雜多樣,因此應重點關注當?shù)豀IV耐藥株的流行,這可能與擴大ART的覆蓋面積產生的耐藥株有關。耐藥基因突變主要與非核苷反轉錄酶抑制劑(NNRTIs)有關,V179是NNRTIs出現(xiàn)最多的突變位點,其次為V106、E138,這與目前使用一線的ART方案實施情況相符。

    綜上所述,HIV耐藥株在貴州省南北部地區(qū)新發(fā)現(xiàn)的艾滋病感染者中出現(xiàn)中度流行,類型復雜,因此應適時在省內全面開展治療前的耐藥監(jiān)測,以減少原發(fā)耐藥毒株的產生和傳播。

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