基于國(guó)家藥品評(píng)價(jià)抽檢探討雷公藤多苷片的質(zhì)量現(xiàn)狀△

王亞丹，汪祺，何風(fēng)艷，吳先富，戴忠，馬雙成

中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050

雷公藤多苷片是20世紀(jì)80年代研制開發(fā)的一種單方制劑，在臨床上被廣泛用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、腎病綜合征等自身免疫性疾病[1]，療效確切，屬于一線用藥，生產(chǎn)企業(yè)眾多。2019 年，國(guó)家藥品抽驗(yàn)項(xiàng)目通過標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)和探索性研究對(duì)雷公藤多苷片進(jìn)行了全面質(zhì)量評(píng)價(jià)，基本明確了目前該品種的整體質(zhì)量狀況和存在的問題，通過分析問題產(chǎn)生的原因，給出合理建議。

1 雷公藤多苷片的基本信息

雷公藤多苷片是由衛(wèi)矛科植物雷公藤Tripterigium wilfordiiHook.f.的根部提取精制成的一種混合物粉末制成的片劑。該制劑具有抗炎和免疫抑制作用[1-3]，屬于國(guó)家基本藥物?，F(xiàn)代研究表明，雷公藤多苷的化學(xué)成分復(fù)雜，主要包括二萜、三萜和倍半萜生物堿類[4-7]，代表性化合物有雷公藤甲素、雷公藤紅素、雷公藤內(nèi)酯甲、雷公藤晉堿和雷公藤春堿等，幾乎無苷類成分。當(dāng)時(shí)在基礎(chǔ)研究尚不深入的情況下命名為“雷公藤多甙”，后根據(jù)國(guó)家藥典委員會(huì)《關(guān)于國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中“甙”改“苷”事宜的通知》（國(guó)藥典中發(fā)〔2006〕286 號(hào)），改為“雷公藤多苷”。目前，該制劑品種共有12 個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)，生產(chǎn)企業(yè)12家。

雷公藤多苷片的生產(chǎn)工藝較為復(fù)雜，大致過程：雷公藤根去皮后粉碎，經(jīng)乙醇提取和三氯甲烷萃取后得到雷公藤多苷粗品，然后進(jìn)行硅膠柱色譜分離，收集組分，再按照一定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)組分進(jìn)行調(diào)配，得到雷公藤多苷原料，最后加入輔料制成片劑。

雷公藤多苷片的毒性較大[8-10]，長(zhǎng)期服用后容易引起消化、泌尿、血液及生殖等多系統(tǒng)損害。根據(jù)《藥品不良反應(yīng)信息通報(bào)》第46期，2004年至2011年9 月，國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心病例數(shù)據(jù)庫中涉及雷公藤多苷片的病例報(bào)告633例，其中嚴(yán)重者53例（占8.4%），主要表現(xiàn)為藥物性肝炎、腎功能不全、粒細(xì)胞減少、血小板減少、閉經(jīng)、精子數(shù)量減少、心律失常等。

2 雷公藤多苷片的質(zhì)量現(xiàn)狀

雷公藤多苷片目前執(zhí)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家藥品監(jiān)督管理局局頒標(biāo)準(zhǔn)（WS3-B-3350-98-2011），檢驗(yàn)項(xiàng)目主要包括【性狀】、【鑒別】、【檢查】和【含量測(cè)定】。其中【檢查】項(xiàng)規(guī)定每片含雷公藤甲素不得超10 μg，【含量測(cè)定】項(xiàng)規(guī)定每片含雷公藤內(nèi)酯甲不得少于10 μg。2019 年，通過國(guó)家藥品抽驗(yàn)項(xiàng)目，對(duì)市場(chǎng)上流通的10家企業(yè)（編號(hào)1～10）生產(chǎn)的共計(jì)172 批雷公藤多苷片進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)其質(zhì)量情況不容樂觀，雖然所有樣品均符合標(biāo)準(zhǔn)，但仍存在許多問題。

2.1 不同企業(yè)制劑成分差異大

首先，在標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，不同企業(yè)生產(chǎn)的雷公藤多苷片中雷公藤甲素含量和雷公藤內(nèi)酯甲的含量波動(dòng)較大，前者在各企業(yè)樣品中的含量為0～9 μg/片，后者含量為11～66 μg/片，見圖1。

圖1 10家企業(yè)雷公藤多苷片中雷公藤甲素和雷公藤內(nèi)酯甲含量測(cè)定結(jié)果

隨后，采用Waters Cortecs T3色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.6 μm），以乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，采用220 nm 檢測(cè)波長(zhǎng)建立了雷公藤多苷片的超高效液相色譜法（UPLC）指紋圖譜。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同企業(yè)制劑整體成分上存在差異，根據(jù)差異基本可以將10家企業(yè)的制劑分為3組，第一組包括1、2、6、8、9、10，第二組僅包括4，第三組包括3、5、7。各組的典型色譜圖見圖2?？梢钥闯?，各組樣品在色譜峰的數(shù)量、極性分布及響應(yīng)強(qiáng)度等方面有很大區(qū)別。

圖2 3組雷公藤多苷片的典型UPLC圖

此外，采用快速液相色譜-三重四極桿-串聯(lián)質(zhì)譜法（RRLC-QQQ-MS/MS）對(duì)雷公藤多苷片中的多種成分進(jìn)行含量測(cè)定，根據(jù)成分特點(diǎn)，二萜和三萜的檢測(cè)采用選擇離子監(jiān)測(cè)模式（SIM），生物堿的檢測(cè)采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式。多指標(biāo)含量測(cè)定結(jié)果顯示，生物堿類成分含量高于二萜和三萜類成分，在不同企業(yè)樣品中差異很大，其在第一組企業(yè)雷公藤多苷片中含量均大于500 μg/片，在第二、三組企業(yè)雷公藤多苷片中含量均小于300 μg/片，結(jié)果見圖3。除生物堿外，雷公藤對(duì)醌B、雷酚內(nèi)酯、雷公藤紅素等成分在不同企業(yè)樣品中的含量也存在明顯差異。

圖3 二萜、三萜和生物堿類成分在10家企業(yè)雷公藤多苷片中的含量

2.2 不同企業(yè)雷公藤多苷片活性和毒性差異大

采用脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞RAW264.7、人源肝細(xì)胞HepaRG 等體外模型，通過檢測(cè)細(xì)胞因子和分化抗原簇86（CD86）的表達(dá)及細(xì)胞存活率，來評(píng)價(jià)雷公藤多苷片的抗炎、免疫抑制活性和肝毒性。結(jié)果顯示，不同企業(yè)雷公藤多苷片的活性和毒性存在明顯差異，第一、二組制劑活性和毒性相當(dāng)，第三組雷公藤多苷片活性和毒性相對(duì)較弱，代表性樣品結(jié)果見圖4。通過分析發(fā)現(xiàn)，雷公藤多苷片的活性和毒性基本呈正相關(guān)，即活性強(qiáng)的樣品毒性也強(qiáng)，反之，毒性小的樣品活性也較弱。同時(shí)，所有樣品的有效劑量和毒性劑量接近，治療窗口窄，這也是雷公藤多苷片在臨床上不良反應(yīng)頻發(fā)的根本原因。

圖4 3組雷公藤多苷片代表性樣品的抗炎、免疫抑制活性和細(xì)胞毒性結(jié)果（,n=6）

2.3 相同企業(yè)制劑批次間穩(wěn)定性較差

對(duì)各企業(yè)多批次樣品進(jìn)行指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)后發(fā)現(xiàn)，多數(shù)企業(yè)批次間相似度在0.8 以上，但個(gè)別企業(yè)樣品質(zhì)量穩(wěn)定性較差，相似度最低值僅有0.5 左右，反映出相關(guān)企業(yè)使用的原藥材質(zhì)量或生產(chǎn)工藝波動(dòng)較大。

2.4 殘留溶劑超標(biāo)

通過氣相色譜檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)部分企業(yè)雷公藤多苷片存在殘留溶劑乙醇和三氯甲烷超標(biāo)，分別超過限度值的1.0～1.5倍和6倍。由于三氯甲烷對(duì)人體危害較大，應(yīng)引起關(guān)注。

3 質(zhì)量問題產(chǎn)生的原因

3.1 藥材質(zhì)量混亂

雷公藤作為生產(chǎn)雷公藤多苷片的唯一中藥，其質(zhì)量對(duì)制劑的質(zhì)量具有重要影響。雷公藤在我國(guó)南部多個(gè)地區(qū)均有分布，受海拔、氣候等環(huán)境影響，不同產(chǎn)地的藥材成分存在差異[11-13]。此外，雷公藤屬的另一種植物昆明山海棠T.hypoglaucum(Levl.)Hutch 與雷公藤非常相近，兩者根部性狀幾乎無差別，化學(xué)成分類似[14]，混用情況嚴(yán)重。目前，雷公藤藥材無國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，僅被地方藥材標(biāo)準(zhǔn)收載，標(biāo)準(zhǔn)水平較低，項(xiàng)目設(shè)置簡(jiǎn)單，大多缺乏含量測(cè)定項(xiàng)，各企業(yè)依據(jù)其進(jìn)行藥材的入廠檢驗(yàn)無法有效地評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量，也難以區(qū)分昆明山海棠，容易造成原藥材質(zhì)量參差不齊，從而影響制劑的質(zhì)量。

3.2 雷公藤多苷提取物的生產(chǎn)工藝差異大

雷公藤多苷提取物目前沒有批準(zhǔn)文號(hào)，在雷公藤多苷片的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中也未附提取物的工藝和制法，各企業(yè)參照最初申報(bào)的地方標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，而這些標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的工藝比較簡(jiǎn)單、缺乏詳細(xì)過程，導(dǎo)致各企業(yè)雖然總體步驟相似，但在原料是否去皮、提取乙醇的體積分?jǐn)?shù)、提取方式、柱色譜使用的硅膠用量、裝柱及上樣方式、洗脫溶劑比例、組分收集及組分調(diào)配方法等具體參數(shù)上有較大區(qū)別，如部分企業(yè)按照毒理實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)組分進(jìn)行調(diào)配，部分企業(yè)按照成分含量進(jìn)行調(diào)配，也有部分企業(yè)不進(jìn)行調(diào)配。不同企業(yè)生產(chǎn)工藝的區(qū)別是導(dǎo)致雷公藤多苷片成分差異的根本原因，進(jìn)而造成療效與不良反應(yīng)的差異。

3.3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)存在缺陷

抽取的172 批雷公藤多苷片標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)全部合格，但仍存在多種質(zhì)量問題，說明現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能很好地控制制劑質(zhì)量，有待提高。首先，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)在檢測(cè)指標(biāo)的選擇和限量方面不合理，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的主要指標(biāo)成分是雷公藤甲素和雷公藤內(nèi)酯甲，前者作為毒性成分列入檢查項(xiàng)下，規(guī)定含量上限，而后者作為主要的有效成分列入含量測(cè)定項(xiàng)下，規(guī)定含量下限。通過藥理研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤甲素雖然毒性比較大，但抗炎和免疫抑制活性極強(qiáng)，僅將其作為毒性成分控制含量上限是不合理的，而雷公藤內(nèi)酯甲的活性和毒性均很弱，且有文獻(xiàn)報(bào)道該成分的口服生物利用度極低，很難吸收入血[15]，因此，標(biāo)準(zhǔn)中控制其含量意義不大。除這2 種成分外，雷公藤紅素、雷公藤對(duì)醌B 等成分的活性和/或毒性也非常顯著，對(duì)制劑活性和/或毒性貢獻(xiàn)較大，具有一定質(zhì)量控制意義；其次，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)缺乏指紋圖譜或有效成分特征圖譜等整體質(zhì)量評(píng)價(jià)項(xiàng)目，無法評(píng)價(jià)批次間質(zhì)量穩(wěn)定性；另外，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中缺乏殘留溶劑檢測(cè)項(xiàng)目。

4 總結(jié)與建議

雷公藤多苷片在治療多種自身免疫性疾病方面療效顯著，具有很大的臨床價(jià)值，但同時(shí)毒性較大。由于藥材質(zhì)量、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等方面的原因，導(dǎo)致不同企業(yè)雷公藤多苷片的成分、療效和不良反應(yīng)差異大，同企業(yè)制劑批次間穩(wěn)定性較差及殘留溶劑超標(biāo)等問題，總體質(zhì)量較差。為提高藥品質(zhì)量，降低臨床用藥風(fēng)險(xiǎn)，給出以下幾點(diǎn)建議：1）建立雷公藤多苷原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)一生產(chǎn)工藝，規(guī)定關(guān)鍵的工藝參數(shù)；2）對(duì)雷公藤藥材及雷公藤多苷片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提高研究，完善檢測(cè)項(xiàng)目，尤其對(duì)指標(biāo)成分的選擇和限量作出合理規(guī)定；3）由于該制劑活性和毒性并存，治療窗口窄，建議對(duì)已上市的雷公藤多苷片從化學(xué)成分、口服生物利用度、療效和毒性等方面進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)。通過以上舉措最終達(dá)到各企業(yè)雷公藤多苷片成分相似、療效相當(dāng)、不良反應(yīng)可控的目的。