免疫組化多種抗體聯(lián)合檢測(cè)在肝細(xì)胞癌與相關(guān)良性結(jié)節(jié)鑒別診斷中的應(yīng)用

梁婷，李榮，王冬梅，李慧娟

（贛州市腫瘤醫(yī)院病理科，江西 贛州 341000）

肝細(xì)胞癌及相關(guān)的良性增生性結(jié)節(jié)是肝臟的多發(fā)病，正確的診斷對(duì)治療決策具有關(guān)鍵的指導(dǎo)意義，其臨床及影像學(xué)均無(wú)明確特異性表現(xiàn)，需依靠病理檢查確診[1]。但在病理組織學(xué)形態(tài)方面，肝細(xì)胞癌（特別是高分化型）與肝細(xì)胞腺瘤（HCA）、局灶結(jié)節(jié)性增生（FNH）、結(jié)節(jié)性再生性增生（NRH）等良性結(jié)節(jié)相似，易誤診，引起嚴(yán)重后果[2]。本研究旨在探究免疫組化多種抗體聯(lián)合檢測(cè)在肝細(xì)胞癌與相關(guān)良性結(jié)節(jié)鑒別診斷的準(zhǔn)確性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年7月至2019年6月本院收治的肝癌患者38例，其中男23例，女15例；年齡38～63歲。另選取同期就診的肝良性結(jié)節(jié)增生患者18例，其中男11例，女7例；年齡39～63歲。兩組臨床資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。患者及家屬均簽署知情同意書(shū)。本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2015年版）》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，超聲檢查存在相關(guān)結(jié)節(jié)[3]。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者經(jīng)化療、放療以及免疫治療，伴繼發(fā)性肝癌，合并有其他器官惡性腫瘤或免疫系統(tǒng)疾病者[4-5]。

1.2 方法 所有患者均分別進(jìn)行病理組織學(xué)、形態(tài)學(xué)和免疫組織化學(xué)檢查。對(duì)患者進(jìn)行病理檢測(cè)，對(duì)比肝癌組織和良性增生性結(jié)節(jié)在免疫組化檢查的表達(dá)情況，確定肝癌以及良性增生性結(jié)節(jié)的最佳診斷方式[6]。取患者肝癌組織及增生性結(jié)節(jié)組織各3塊，福爾馬林中保存，脫水、石蠟包埋、切片、脫蠟。隨后選用適合石蠟切片的Glypican-3、Bcl-2及Ki-67鼠抗人單克隆抗體并標(biāo)記。依據(jù)DAB顯色試劑盒要求進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)[7]。

1.3 觀察指標(biāo) 對(duì)比肝癌組織和良性增生性結(jié)節(jié)在免疫組化檢查的表達(dá)情況，確定肝癌以及良性增生性結(jié)節(jié)的最佳診斷方式[8]。以高年資病理醫(yī)師核閱為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比在肝癌組織和良性增生性結(jié)節(jié)不同部位進(jìn)行免疫組化檢查的準(zhǔn)確率、敏感性和特異性[9]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以“±s”表示，行t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Glypican-3免疫組化結(jié)果 Gpc-3陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，呈棕黃色顆粒。免疫組化染色結(jié)果顯示，18例肝細(xì)胞癌組織Gpc-3蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為84.21%，良性增生性結(jié)節(jié)Gpc-3蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為0.00%，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=26.784，P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 Gpc-3對(duì)肝癌組織和良性增生性結(jié)節(jié)的免疫組化診斷結(jié)果Table 1 Gpc-3 in immunohistochemical diagnosis results of liver cancer tissues and benign hyperplastic nodules

2.2 BCL-2免疫組化結(jié)果 BCL-2的免疫組織化學(xué)染色，BCL-2陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞漿，染色為黃色或棕黃色。BCL-2蛋白在肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為88.89%，在良性增生性結(jié)節(jié)發(fā)生率為55.55%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.985，P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 BCL-2對(duì)肝癌組織和良性增生性結(jié)節(jié)的免疫組化診斷結(jié)果Table 2 BCL-2 in immunohistochemical diagnosis results of liver cancer tissues and benign hyperplastic nodules

2.3 Ki-67免疫組化結(jié)果 Ki-67蛋白表達(dá)位于細(xì)胞核，陽(yáng)性細(xì)胞的細(xì)胞核染色為棕黃色，Ki67以細(xì)胞不著色或＜10%為陰性，≥10%的細(xì)胞著色為陽(yáng)性。Ki-67蛋白在肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為76.32%，在良性增生性結(jié)節(jié)的陽(yáng)性表達(dá)率為33.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.93，P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 Ki-67免疫組化結(jié)果Table 3 immunohistochemistry results of Ki-67

3 討論

肝細(xì)胞癌起病隱匿，早期缺乏典型癥狀。手術(shù)是臨床上治療肝癌主要的方式，但術(shù)后5年復(fù)發(fā)率超過(guò)50%[10-11]，導(dǎo)致患者生存率并未得到顯著改善。因此，借助免疫組化檢測(cè)提高肝細(xì)胞癌的診斷準(zhǔn)確率對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)肝癌具有重要意義。

Glypican-3對(duì)于肝細(xì)胞癌具有較高的診斷價(jià)值，主要是由于該物質(zhì)在肝細(xì)胞癌患者體內(nèi)有較高的表達(dá)率，可反映患者體內(nèi)的病變情況，從而提高診斷效果[12]。BCL-2基因即B細(xì)胞淋巴瘤-2基因，在組織中抑制凋亡因子[13]。Ki67是一種核增殖抗原，是某些惡性腫瘤預(yù)后的重要參考指標(biāo)之一，其表達(dá)與多種惡性腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)[14]。3項(xiàng)指標(biāo)均可直接反映癌癥組織和增生性結(jié)節(jié)組織的癌細(xì)胞發(fā)展程度及病情所處階段[15-16]。本研究表明，肝細(xì)胞癌組織Gpc-3蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為84.21%，良性增生性結(jié)節(jié)Gpc-3蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為0.00%，BCL-2蛋白在肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為88.89%，在良性增生性結(jié)節(jié)發(fā)生率為55.55%，Ki-67蛋白在肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為76.32%，在良性增生性結(jié)節(jié)發(fā)生率為33.33%，Glypican-3及Ki-67免疫組化在肝癌組織的診斷中表達(dá)陽(yáng)性率最高。

綜上所述，肝臟肝細(xì)胞癌與增生性結(jié)節(jié)難以鑒別時(shí)，建議進(jìn)行Glypican-3及Ki-67免疫組化聯(lián)合檢測(cè)。