血清miR-92a、miR-20a在結(jié)腸癌術(shù)患者中的變化及對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值分析

曾繼莎，屈 敏，何 平

結(jié)腸癌具有較高的發(fā)病率與病死率。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌發(fā)病率在惡性腫瘤中排名第3，而病死率排名第2，且近年來(lái)發(fā)病率及病死率呈逐漸上升趨勢(shì)[1]。研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌病死率的升高與早期診斷困難、疾病進(jìn)展速度快等有一定相關(guān)性。許多結(jié)腸癌患者在中、后期才被確診，故預(yù)后不佳，5年生存率較低?；诖?，尋找能夠有效診斷結(jié)腸癌、評(píng)估其預(yù)后的分子標(biāo)志物意義重大。有研究表示，血清miR-92a、miR-20a參與了結(jié)腸癌的發(fā)生及發(fā)展[2]，但目前臨床關(guān)于血清miR-92a、miR-20a診斷結(jié)腸癌及預(yù)測(cè)預(yù)后價(jià)值的研究較少，且尚不清楚結(jié)腸癌患者血清miR-92a、miR-20a變化情況。故本研究對(duì)86例結(jié)腸癌術(shù)患者與86例體檢健康者的臨床資料進(jìn)行回顧性分析，旨在分析結(jié)腸癌患者血清miR-92a、miR-20a變化，以及其對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2018年1月—2020年11月攀鋼集團(tuán)總醫(yī)院血液腫瘤科診治的86例結(jié)腸癌術(shù)患者(觀察組)與86例體檢健康者(對(duì)照組)的臨床資料。觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)：符合結(jié)腸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)病理學(xué)檢查確診；予傳統(tǒng)手術(shù)或完整結(jié)腸系膜切除術(shù)治療；認(rèn)知功能正常；1個(gè)月前未行放化療等治療；無(wú)其他部位惡性腫瘤；臨床資料完整。觀察組排除標(biāo)準(zhǔn)：伴嚴(yán)重心功能不全；不愿接受手術(shù)治療；存在手術(shù)禁忌證。172例受檢人員中男87例、女85例，年齡32～70歲。2組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見(jiàn)表1。

表1 結(jié)腸癌術(shù)患者和體檢健康者一般資料比較

1.2研究方法

1.2.1miR-92a、miR-20a表達(dá)：比較觀察組術(shù)前及術(shù)后1周、1個(gè)月、3個(gè)月與對(duì)照組體檢時(shí)血清miR-92a、miR-20a表達(dá)量。清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取受檢人員外周靜脈血3 ml，離心處理后取上清液，將Trizol液與血清按照1︰1混勻在2 ml離心管中，充分震蕩后提取總RNA，加入Rnasin后，再根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(System Bio-sciences公司生產(chǎn))操作說(shuō)明，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；再以cDNA為模板，應(yīng)用熒光定量PCR試劑行SYBR實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，加入miR-92a、miR-20a特定引物后，應(yīng)用iCycler iQ熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)。循環(huán)參數(shù)為95℃預(yù)變性5 min，隨后95℃變性15 s，退火60℃ 30 s，延長(zhǎng)72℃ 1 min，共40個(gè)循環(huán)，最后采用循環(huán)閾值法定量分析miR-92a、miR-20a表達(dá)量，以小分子RNAU6為內(nèi)參，以2-ΔΔCt表示目的基因相對(duì)配對(duì)正常版本的變化倍數(shù)。

1.2.2生存時(shí)間、生存率、病死率：觀察組以血清miR-92a、miR-20a中位表達(dá)量為截?cái)嘀捣譃楦弑磉_(dá)組與低表達(dá)組，各43例，通過(guò)電話方式對(duì)2組進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間2018年1月—2020年11月，比較2組生存時(shí)間、生存率、病死率，生存時(shí)間為從治療結(jié)束后至患者死亡或末次隨訪時(shí)間。

1.2.3預(yù)后不良影響因素：根據(jù)生存率及病死率將觀察組分為預(yù)后良好組69例與預(yù)后不良組17例，回顧分析2組臨床病理資料,采用多因素Logistic回歸分析探討結(jié)腸癌術(shù)患者預(yù)后不良的影響因素。

1.2.4相關(guān)性分析：采用Spearman法分析觀察組腫瘤分化程度、TNM分期與miR-92a、miR-20a的相關(guān)性，并行受試者工作特征(ROC)曲線分析miR-92a、miR-20a對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值，以曲線下面積(AUC)為0.7～0.9表示預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性較好。

2 結(jié)果

2.1血清miR-92a、miR-20a表達(dá)量比較 觀察組術(shù)前血清miR-92a、miR-20a表達(dá)量高于對(duì)照組體檢時(shí)(P<0.01)；觀察組術(shù)后1周、1個(gè)月、3個(gè)月miR-92a、miR-20a表達(dá)量低于術(shù)前(P<0.05)，且術(shù)后3個(gè)月miR-92a、miR-20a表達(dá)量低于術(shù)后1周及術(shù)后1個(gè)月(P<0.05)，術(shù)后1周及術(shù)后1個(gè)月miR-92a、miR-20a表達(dá)量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 結(jié)腸癌術(shù)患者及體檢健康者血清miR-92a、miR-20a表達(dá)量比較

2.2生存時(shí)間、生存率、病死率比較 高表達(dá)組生存時(shí)間短于低表達(dá)組，生存率低于低表達(dá)組，病死率高于低表達(dá)組(P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3 結(jié)腸癌術(shù)患者及體檢健康者生存時(shí)間、生存率、病死率比較

2.3預(yù)后不良單因素分析 單因素分析顯示，預(yù)后良好組與預(yù)后不良組在性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而在腫瘤分化程度、腫瘤TNM分期、miR-92a表達(dá)量、miR-20a表達(dá)量方面比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表4。

表4 86例結(jié)腸癌術(shù)患者預(yù)后不良單因素分析

2.4預(yù)后不良多因素Logistic回歸分析 以“組別”為因變量(賦值：預(yù)后良好組=1，預(yù)后不良組=2)，以“腫瘤分化程度、腫瘤TNM分期、miR-92a表達(dá)量、miR-20a表達(dá)量”為協(xié)變量，行多因素Logistic回歸分析顯示，腫瘤分化程度(低分化)、腫瘤TNM分期(Ⅲ期)、miR-92a表達(dá)、miR-20a表達(dá)是結(jié)腸癌術(shù)患者預(yù)后不良的影響因素(P<0.01)。

2.5相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)性分析顯示，腫瘤分化程度、腫瘤TNM分期與miR-92a、miR-20a表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05，P<0.01)。見(jiàn)表5。

表5 結(jié)腸癌術(shù)患者腫瘤分化程度、TNM分期與miR-92a、miR-20a表達(dá)的相關(guān)性分析

2.6ROC曲線分析 ROC曲線分析顯示，miR-92a表達(dá)預(yù)測(cè)結(jié)腸癌術(shù)患者預(yù)后的AUC值為0.785，P<0.01；miR-20a表達(dá)預(yù)測(cè)結(jié)腸癌術(shù)患者預(yù)后的AUC值為0.969，P<0.01。見(jiàn)表6及圖1。

圖1 miR-92a與miR-20a表達(dá)預(yù)測(cè)結(jié)腸癌術(shù)患者預(yù)后的受試者工作特征曲線分析

表6 血清miR-92a、miR-20a表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌術(shù)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值分析

3 討論

結(jié)腸癌多發(fā)生在直腸與結(jié)腸交界處，隨著病情的發(fā)展，會(huì)侵犯多個(gè)內(nèi)臟器官及組織[3-4]。統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，該病具有較高的病死率，全球結(jié)腸癌病死率約為50%；若早期對(duì)結(jié)腸癌患者實(shí)施科學(xué)、有效的治療，則能進(jìn)一步提高生存率[5-8]。miRNA的異常表達(dá)在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后評(píng)估中具有十分重要的作用[9]。有研究報(bào)道顯示，miRNA的高表達(dá)能夠誘導(dǎo)腫瘤血管生成[10-11]。鑒于miRNA異常表達(dá)是導(dǎo)致結(jié)腸癌進(jìn)一步惡化的重要原因，本文從分析血清miR-92a、miR-20a表達(dá)量入手，以期為結(jié)腸癌的臨床診斷、預(yù)后評(píng)估篩選實(shí)用指標(biāo)。本研究結(jié)果可見(jiàn)，觀察組術(shù)前miR-92a、miR-20a表達(dá)量高于對(duì)照組體檢時(shí)，提示結(jié)腸癌患者血清miR-92a、miR-20a表達(dá)量較正常人群高，血清miR-92a、miR-20a表達(dá)與結(jié)腸癌的發(fā)生具有一定關(guān)系，在腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移等過(guò)程中起著十分重要的作用。

miR-92a為miR-17-92簇的重要組成，在多種腫瘤性疾病中異常表達(dá)。梁衛(wèi)東等[12]研究顯示，食管鱗癌患者血漿miR-92a表達(dá)顯著高于健康人員，且伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌患者血漿miR-92a表達(dá)高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，由此說(shuō)明miR-92a有望成為腫瘤生物學(xué)標(biāo)志物，其通過(guò)抑制FOXA2表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移，從而充分發(fā)揮原癌基因的作用。但結(jié)合目前已有研究結(jié)果，單一血清miR-92a診斷腫瘤性疾病存在一定局限性，建議聯(lián)合其他血清miRNA檢測(cè)進(jìn)一步提高結(jié)腸癌的診斷價(jià)值。

miR-20a同樣在腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲、凋亡過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用，通過(guò)下調(diào)程序性細(xì)胞死亡基因4的表達(dá)，抑制癌細(xì)胞凋亡及促進(jìn)癌細(xì)胞增殖[13-15]。黃鋒等[16]指出，miR-20a與腫瘤細(xì)胞的遷移及上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化具有密切關(guān)系。本文多因素Logistic回歸分析可見(jiàn)，miR-92a、miR-20a表達(dá)是結(jié)腸癌術(shù)患者預(yù)后不良的影響因素；且miR-92a、miR-20a表達(dá)與腫瘤分化程度、TNM分期呈正相關(guān)。說(shuō)明檢測(cè)miR-92a、miR-20a表達(dá)能為疾病程度判斷及預(yù)后評(píng)估提供客觀依據(jù)。本文86例結(jié)腸癌患者經(jīng)手術(shù)治療后，血清miR-92a、miR-20a表達(dá)量與術(shù)前相比明顯下降，因?yàn)閙iR-92a、miR-20a是經(jīng)癌組織或癌細(xì)胞分泌進(jìn)入血循環(huán)，當(dāng)手術(shù)切除病灶組織，間接切斷了血液中miR-92a、miR-20a的來(lái)源，故其表達(dá)量明顯下降[17-19]。

綜上，血清miR-92a、miR-20a表達(dá)與結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后相關(guān)，二者有望作為結(jié)腸癌診斷及術(shù)后預(yù)后評(píng)估的重要標(biāo)志物。但本研究樣本量較小，后續(xù)仍需收集大量臨床數(shù)據(jù)，以深入探究血清miR-92a、miR-20a在臨床中的應(yīng)用價(jià)值。