miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141與胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)的關(guān)系及聯(lián)合預測價值分析

劉鴻運，張曙光，于四海

目前肺癌已成為我國城市人口死亡的主要因素[1]，胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)是治療肺癌的主要術(shù)式，具有微創(chuàng)、術(shù)后恢復時間短等優(yōu)勢，但術(shù)后仍有30.0%～40.0%的患者死于肺癌復發(fā)[2-3]。因此，積極尋找一種預測肺癌復發(fā)的有效指標，對制定個性化治療方案、改善預后具有重要的臨床價值。富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)表達升高可激活腫瘤細胞內(nèi)絲裂原活化蛋白激酶信號通路，從而參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[4]。另有學者指出，微小RNA(miR)在多種腫瘤組織中異常表達，而miR-21、miR-141在腫瘤細胞增殖、侵襲等方面起重要作用[5-6]，但關(guān)于其與Cyr61 mRNA聯(lián)合預測胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)的臨床價值尚缺乏循證支持。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月—2020年1月我院收治的361例行胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)患者，其中男234例，女127例；年齡47～73(61.18±5.32)歲。納入標準：符合肺癌診斷標準[7]，并經(jīng)手術(shù)病理學檢查證實診斷；具有胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)指征。排除標準：遠處轉(zhuǎn)移者；有放化療及免疫治療史者；合并其他部位腫瘤者；合并肺部感染或其他部位感染者；凝血功能紊亂或活動性出血者；組織標本污染者；合并重度抑郁癥、精神分裂癥或其他精神疾病者。

1.2研究方法 記錄所有患者術(shù)后6個月復發(fā)情況，根據(jù)復發(fā)情況分為復發(fā)組30例、未復發(fā)組331例，比較2組miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平；采用多因素Logistic回歸分析尋找胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)的影響因素；采用受試者工作特征(ROC)曲線分析miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141單一及聯(lián)合檢測對胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)的預測價值；繪制K-M生存曲線，采用Log-rank檢驗分析miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平與生存率的關(guān)系。

1.3檢測方法 取手術(shù)切除病灶組織，應(yīng)用Trizol試劑促進細胞裂解，添加氯仿0.2 ml，4℃條件下12 000 r/min離心15 min，取無色水相上層，添加等體積異丙醇并沉淀。加入適量乙醇(75%)清洗，獲取RNA沉淀，清除上層乙醇溶液，25℃條件下空氣干燥5～10 min。紫外光吸收法檢測RNA純度及濃度，使用北京諾博萊德科技有限公司生產(chǎn)的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成樣品cDNA。采用百奧邁科生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的熒光定量PCR試劑盒測定組織miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141表達量。

2 結(jié)果

2.12組臨床資料比較 2組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，P<0.01)。見表1。

表1 2組行胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)患者臨床資料比較

2.2不同miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平患者術(shù)后復發(fā)率比較 以2組各指標均值分界(miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141均值分別為0.80、0.84、2.03)，將患者分為miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141高表達與低表達者。miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141高表達者復發(fā)率高于低表達者(P<0.01)。見表2。

表2 不同miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平的胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)患者術(shù)后復發(fā)率比較[例(%)]

2.3多因素Logistic回歸分析 以miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141作為自變量，低于均值=1、高于均值=2，以復發(fā)為因變量，未復發(fā)=0、復發(fā)=1，應(yīng)用多因素Logistic回歸方程進行分析，結(jié)果顯示，miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141是胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)的影響因素(P<0.01)。見表3。

表3 胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)的多因素Logistic回歸分析

2.4miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141預測術(shù)后復發(fā)的ROC曲線分析 以復發(fā)組為陽性樣本，以無復發(fā)組為陰性樣本，繪制各指標預測胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)的ROC曲線，結(jié)果顯示，miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141單一及聯(lián)合檢測預測術(shù)后復發(fā)的曲線下面積(AUC)依次為0.749、0.738、0.813及0.896。見圖1、表4。

表4 miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141單一及聯(lián)合檢測預測胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)的ROC曲線分析

圖1 miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141單一及聯(lián)合檢測預測胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)的受試者工作特征曲線

2.5不同miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平者生存率比較 miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141高水平者生存率低于低水平者(P<0.05)。見圖2。

圖2 不同miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141水平的胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)患者術(shù)后生存率比較

3 討論

既往研究證實，miR-21對胃癌、HER2陽性乳腺癌治療結(jié)局有一定預測價值[8-9]。但上述研究傾向于離體細胞，關(guān)于其在胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)患者中表達的相關(guān)報道較少。本研究結(jié)果顯示，miR-21在胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)患者中異常高表達，原因可能為miR-21過度表達可激活第10號染色體同源缺失性磷酸酶-張力蛋白基因/激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信號通路，促使腫瘤細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化，誘導腫瘤細胞異常生長，從而參與術(shù)后復發(fā)進程[10-11]。多因素Logistic回歸分析顯示，miR-21是胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)的影響因素，再次佐證了miR-21有望成為預測術(shù)后復發(fā)的潛在指標。非小細胞肺癌組織miR-21高表達可提示患者整體生存率下降，這可能歸因于miR-21表達升高通過對PETN等基因表達進行靶向調(diào)控，誘導新生血管形成，增強腫瘤細胞浸潤與侵襲作用，從而促使腫瘤細胞異常增殖，加快腫瘤細胞轉(zhuǎn)移，進而導致不良預后[12]。

Cyr61生物學功能較為復雜，多篇文獻指出，其可作為腫瘤新生血管形成的重要參與因子，調(diào)控細胞增殖[13-15]。本研究術(shù)后復發(fā)患者癌組織Cyr61 mRNA顯著高于未復發(fā)者，與何開明等[16]研究結(jié)果相似，這可能是由于Cyr61一方面可結(jié)合細胞膜上配體，提高整聯(lián)蛋白耦聯(lián)激酶活性，活化Wnt/β-catenin信號通路；另一方面可調(diào)控血管內(nèi)皮生長因子及其受體表達，激活下游靶基因，異常增殖血管內(nèi)皮細胞，促進新生血管形成，從而增加術(shù)后復發(fā)危險性。但段亞男等[17]研究認為，肺癌患者癌組織Cyr61蛋白表達陽性率顯著下降，與本研究結(jié)果存在一定差異，可能與樣本量、檢測方法不同等因素有關(guān)。進一步通過K-M曲線分析可知，Cyr61 mRNA表達升高可降低胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)患者生存率，可能與其表達升高一定程度破壞下游細胞外基質(zhì)合成與分解平衡，誘導腫瘤細胞轉(zhuǎn)移有關(guān)。提示Cyr61有助于反映胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)患者預后。

miR-141位于人類染色體12p13.31位點，國內(nèi)外研究均已證實，其在前列腺癌、卵巢上皮癌、鼻咽癌中均異常表達[18-20]。本研究表明，miR-141高表達患者術(shù)后復發(fā)率顯著高于低表達患者，其原因可能為miR-141高表達通過結(jié)合長鏈非編碼RNA XIST，上調(diào)轉(zhuǎn)化生長因子-β與細胞程序性死亡蛋白4含量，誘導腫瘤細胞異常增殖與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，調(diào)控腫瘤細胞增殖、凋亡、永生化等多種生物學效應(yīng)，從而參與術(shù)后復發(fā)進程[21]。進一步研究還發(fā)現(xiàn)，miR-141高水平可能增加胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)患者病死率，究其原因可能為miR-141表達上調(diào)可加重腫瘤惡性程度，進而影響患者生存率。然而miR-141單一檢測預測胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)的敏感度較低，存在一定局限性，本研究ROC曲線顯示，miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141聯(lián)合檢測預測術(shù)后復發(fā)的AUC最大，預測價值最佳。由此可見，miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141聯(lián)合檢測對胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)、預后具有重要的預測價值。

綜上，miR-21、Cyr61 mRNA、miR-141在胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)后復發(fā)患者中過度高表達，上述指標聯(lián)合檢測可為臨床預測胸腔鏡肺癌微創(chuàng)術(shù)患者術(shù)后復發(fā)與預后提供一種新手段。