• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳汁體細(xì)胞、酶、炎性和抗氧化因子影響

    2021-09-29 03:02:38錢柏霖尤留超呂尚揆肖勁邦蘇柘僮裴淼毓左昌雄楊世林馮育林沈留紅
    關(guān)鍵詞:白頭翁乳清乳汁

    錢柏霖,尤留超,張 鉞,莘 余,呂尚揆,肖勁邦,蘇柘僮,董 可,裴淼毓,左昌雄,楊世林,馮育林*,沈留紅*

    (1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院/動物疫病與人類健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/奶牛疾病研究中心,四川 成都 611130;2.廣西英路維特藥物有限公司,廣西 荔浦 541100;3.四川育強(qiáng)本草生物技術(shù)有限公司,四川 成都 611130;4.江西中醫(yī)藥大學(xué) 中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心,江西 南昌 330006)

    【研究意義】臨床型乳房炎是奶牛養(yǎng)殖業(yè)危害最為嚴(yán)重的疾病之一,不僅會降低奶牛生產(chǎn)性能、泌乳量和乳品質(zhì),而且治療周期長、成本高,嚴(yán)重影響牧場效益。目前國內(nèi)外主要通過使用各種抗菌藥物防治該病,然而長期、大量反復(fù)使用抗菌藥物不僅導(dǎo)致療效下降、抗生素殘留和耐藥菌株產(chǎn)生等問題,還嚴(yán)重危害人類健康。為配合農(nóng)業(yè)農(nóng)村部開展的“獸用抗菌藥使用減量化行動”,探尋天然高效、無耐藥性和乳汁殘留的抗生素替代藥物極具研究價(jià)值,對奶牛養(yǎng)殖業(yè)具有重要意義?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】奶牛發(fā)生乳房炎時,致炎因素刺激機(jī)體免疫細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素-1(interleukin-1β,IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白細(xì)胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)等炎癥介質(zhì)[1],損傷乳腺細(xì)胞并導(dǎo)致血管擴(kuò)張,促使血液中白細(xì)胞進(jìn)入乳汁,引起體細(xì)胞數(shù)(somatic cell counts,SCC)升高并產(chǎn)生炎癥反應(yīng)[2]。在體細(xì)胞溶酶體酶作用下,乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-d-glucosaminidase,NAG)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,AST)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase,ALT)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)等活性改變[3-4]。同時,炎癥反應(yīng)導(dǎo)致機(jī)體氧化-抗氧化失衡,使總抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和過氧化氫酶(catalase,CAT)等抗氧化指標(biāo)水平降低,丙二醛(malonaldehyde,MDA)堆積,造成乳腺氧化損傷[5]?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】白頭翁及其提取物皂苷B4 可明顯抑制金黃色葡萄球菌和傷寒沙門氏菌等[6],下調(diào)IL-1β、IL-6和TNF-α水平,抑制脂多糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[7],提高機(jī)體抗氧化和抗凋亡功能[8],增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答[9],兼具藥物和營養(yǎng)劑雙重作用,高效低毒且不易產(chǎn)生耐藥性和乳汁殘留,在替代抗生素治療乳房方面極具潛力和研究價(jià)值,且其治療臨床型乳房炎奶牛療效顯著[10]。【擬解決的關(guān)鍵問題】本試驗(yàn)旨在探究白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳汁SCC,乳清酶LDH、NAG、ALT、AST、ALP、ACP,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α 和抗氧化因子T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT、MDA的影響,為其防治奶牛臨床型乳房炎提供數(shù)據(jù)支持,并為其臨床推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)動物

    選用規(guī)?;敕忾]統(tǒng)一舍飼,2~3胎次泌乳高峰期、泌乳天數(shù)、產(chǎn)奶量相近的臨床檢查健康和臨床型乳房炎中國荷斯坦奶牛各12頭,自由飲水,統(tǒng)一全混合日糧飼喂,試驗(yàn)期間均無其他疾病發(fā)生,試驗(yàn)前后也未接受抗生素治療。

    1.2 主要儀器與試劑

    1.2.1 主要儀器 體細(xì)胞檢測儀,De Laval,瑞士;臺式離心機(jī),TGLB-16G,Sigma;超低溫冰箱,DW-86L828W,海爾;超凈工作臺,SW-CJ-1F,蘇凈集團(tuán);全波長酶標(biāo)儀,Varioskan Flash,美國;紫外可見分光光度計(jì),Lambda 45,美國;電子恒溫水浴鍋,DZKW-4,北京中興;微量加樣器,LH99186,美國Thermo。

    1.2.2 主要試劑 白頭翁皂苷B4 注射液(100 mL/瓶,白頭翁皂苷B4 含量66.00%),PubChem CID:11636713,由英路維特醫(yī)藥科技有限公司惠贈,經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心鑒定。

    乳酶LDH、NAG、ALT、AST、ALP、ACP,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α,抗氧化因子T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT、MDA雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(ELISA)試劑盒,上海酶聯(lián)生物。

    1.3 方法

    1.3.1 臨床型乳房炎奶牛判斷標(biāo)準(zhǔn) 試驗(yàn)?zāi)膛>鶠樽匀桓腥?,由牧場同一?zhí)業(yè)獸醫(yī)判定,表現(xiàn)典型臨床體征,入選標(biāo)準(zhǔn)如下:感染乳區(qū)乳汁SCC>50 萬/mL,患區(qū)紅、腫,觸之敏感、不安、躲避等,體溫升高,乳腺腫大,泌乳量顯著減少或停止,乳汁異常,呈淺黃色或淺紅色,稀薄、粘稠或有絮狀物[11-12]。

    1.3.2 分組和給藥 12 頭健康奶牛記為對照組(不注射藥物),12 頭臨床型乳房炎奶牛記為試驗(yàn)組(按0.05 mL/kg頸部肌肉注射白頭翁皂苷B4,1 次/d,連續(xù)6 d),乳房炎發(fā)病當(dāng)天記為第0天,觀察臨床療效至第12天。

    1.3.3 乳清采集和保存 每日08:00 于用藥前分別采集各組奶牛第0、1、3、5、7、9、11 天乳汁。采樣前溫水清洗乳房,75%酒精消毒,棄去前3 把后采集10 mL 乳汁,5 mL 立即檢測SCC,5 mL 在4 ℃下10 000 r/min 離心2次,30 min/次,充分脫脂,直至透明清亮,取上層乳清,-80 ℃凍存。

    1.3.4 體細(xì)胞數(shù)和乳清因子檢測 分別采用De Laval 乳汁體細(xì)胞檢測儀和ELISA 法檢測試驗(yàn)?zāi)膛5?、1、3、5、7、9、11 天乳汁SCC 和乳清酶LDH、NAG、AST、ALT、ALP、ACP,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNFα,抗氧化因子T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT、MDA含量。

    1.4 數(shù)據(jù)分析與處理

    采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,K-S檢驗(yàn)數(shù)據(jù)是否服從正態(tài)分布,各計(jì)量資料數(shù)據(jù)均采用平均值加減標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±Standard Deviation)表示,組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),P<0.05為差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳汁體細(xì)胞數(shù)的影響

    如表1所示,試驗(yàn)組臨床型乳房炎奶牛乳汁SCC在0~7 d顯著高于對照組(P<0.05),隨用藥時間推移呈下降趨勢,在0~7 d 顯著下降(P<0.05),7~11 d 無顯著變化(P>0.05),并在9、11 d 與對照組差異不顯著(P>0.05),表明白頭翁皂苷B4可顯著降低臨床型乳房炎奶牛乳汁SCC。

    表1 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳汁體細(xì)胞數(shù)的影響Tab.1 The effect of Pulsatilla saponin B4 on somatic cell count of milk in dairy cows with clinical mastitis

    2.2 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳清酶的影響

    如表2 所示,臨床型乳房炎奶牛乳清LDH 和NAG 在0~3 d 顯著高于對照組(P<0.05),AST 和ACP 在0~5 d 顯著高于對照組(P<0.05),ALT 在0~7 d 顯著高于對照組(P<0.05),ALP 在0~11 d 顯著高于對照組(P<0.05),隨用藥時間推移,各指標(biāo)均呈下降趨勢;其中LDH和NAG在5~11 d與對照組差異不顯著(P>0.05),AST和ACP在7~11 d與對照組差異不顯著(P>0.05),ALT在9~11 d與對照組差異不顯著(P>0.05),ALP 在用藥后仍顯著高于對照組(P<0.05),但其含量顯著低于發(fā)病初(P<0.05),表明白頭翁皂苷B4可顯著促進(jìn)臨床型乳房炎奶牛乳酶恢復(fù)至健康水平。

    表2 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳清酶的影響Tab.2 The effect of Pulsatilla saponin B4 on enzymes activity of whey in dairy cows with clinical mastitis

    2.3 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳清炎性因子的影響

    如表3 所示,試驗(yàn)組臨床型乳房炎奶牛乳清IL-1β 在0~5 d 顯著高于對照組(P<0.05),IL-6、IL-8 和TNF-α 在0~7 d 顯著高于對照組(P<0.05),隨用藥時間推移,各指標(biāo)均呈下降趨勢;其中IL-1β 在7~11 d與對照組差異不顯著(P>0.05),IL-6、IL-8 和TNF-α 在9~11 d 與對照組差異不顯著(P>0.05),表明白頭翁皂苷B4可顯著降低臨床型乳房炎奶牛乳清炎性因子含量。

    表3 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳清炎性因子的影響Tab.3 The effect of Pulsatilla saponin B4 on inflammatory factors of whey in dairy cows with clinical mastitis

    2.4 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳清抗氧化因子的影響

    如表4 所示,臨床型乳房炎奶牛乳清T-AOC 和GSH-Px 在0~5 d 顯著低于對照組(P<0.05),CAT 和SOD 分別在0~3 d 和0~1 d 顯著低于對照組(P<0.05),隨用藥時間推移,各指標(biāo)均呈上升趨勢,其中TAOC 和GSH-Px 在7~11 d 與對照組差異不顯著(P>0.05),CAT 和SOD 分別在5~11 d 和3~11 d 與對照組差異不顯著(P>0.05);MDA 含量在0~1 d 顯著高于對照組(P<0.05),隨用藥時間推移,呈下降趨勢,在3~11 d 與對照組差異不顯著(P>0.05),表明白頭翁皂苷B4 可顯著升高臨床型乳房炎奶牛乳清抗氧化因子含量,降低脂質(zhì)過氧化物含量。

    表4 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳清抗氧能力的影響Tab.4 The effect of Pulsatilla saponins B4 on antioxidant index of whey in dairy cows with clinical mastitis

    3 討論與結(jié)論

    3.1 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳汁體細(xì)胞和炎性因子的影響

    奶牛乳汁SCC是指每毫升原乳含有的細(xì)胞總數(shù),主要包括巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞以及脫落的乳腺上皮細(xì)胞等,它們共同參與乳房細(xì)胞免疫,其含量隨乳房炎嚴(yán)重程度增加而升高,可作為奶牛臨床型乳房炎早期診斷和療效評估指標(biāo)[13]。當(dāng)奶牛發(fā)生乳房炎時,病原微生物刺激并激活其合成和分泌IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎性因子參與炎癥反應(yīng),而炎性因子通過趨化作用,又吸引免疫細(xì)胞向炎癥部位聚集,最終造成乳腺炎癥相關(guān)因子過度表達(dá),導(dǎo)致乳腺細(xì)胞損傷加劇[14]。本試驗(yàn)結(jié)果表明,臨床型乳房炎奶牛乳汁SCC 和炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α 含量顯著高于健康奶牛(P<0.05),與資料報(bào)道一致[15],可能是細(xì)菌感染損傷乳腺組織,使血管增強(qiáng)通透性,血液白細(xì)胞進(jìn)入乳中,導(dǎo)致SCC 升高并產(chǎn)生大量的炎性因子引起炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)中藥可有效提高機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫功能,減輕泌乳期奶牛炎癥反應(yīng),降低乳汁SCC,提高奶牛生產(chǎn)性能和乳品質(zhì)[16-17]。白頭翁皂苷B4具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用[18],可顯著降低中性粒細(xì)胞數(shù)量[19],通過抑制炎癥信號通路中相關(guān)蛋白表達(dá),下調(diào)炎性因子含量,發(fā)揮抗炎作用[20]。本試驗(yàn)中,臨床型乳房炎奶牛經(jīng)白頭翁皂苷B4治療后,乳汁SCC、IL-1β、IL-6、IL-8 和TNF-α 含量顯著降低(P<0.05),并最終接近正常水平,與上述學(xué)者研究結(jié)果一致,說明白頭翁皂苷B4具有顯著抗炎效果,通過降低促炎因子含量,減輕乳腺炎癥反應(yīng),從而促進(jìn)乳房恢復(fù)健康,而炎性因子的減少又抑制巨噬細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞向乳腺損傷部位趨化和募集,降低乳汁SCC,形成良性循環(huán),最終恢復(fù)至健康水平。

    3.2 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳酶的影響

    奶牛乳酶參與乳汁產(chǎn)生和分泌,在乳腺先天性免疫和抗氧化過程中發(fā)揮重要作用,但當(dāng)奶牛發(fā)生乳房炎時,其活性顯著變化,因此乳酶活性對診斷奶牛乳房炎具有重要意義。其中LDH 和NAG 含量在乳房炎奶牛乳汁中顯著升高,反映白細(xì)胞聚集過程和乳腺組織損害程度,可作為乳房炎早期診斷指標(biāo)[4,21],乳房炎牛乳中ALP 和ACP 含量隨乳房炎嚴(yán)重程度增加而升高[22],而AST 和ALT 在一定程度上可判斷乳腺損傷和炎癥感染程度[23]。本試驗(yàn)中,臨床型乳房炎奶牛乳清NAG、LDH、AST、ALT、ALP 和ACP 含量均顯著高于健康奶牛(P>0.05),與上述研究結(jié)果一致,乳房炎導(dǎo)致乳腺上皮細(xì)胞和血乳屏障受損,血液中酶直接進(jìn)入乳中,同時體細(xì)胞中大量溶酶體發(fā)生溶解,進(jìn)一步使乳中酶活性升高。而使用白頭翁皂苷B4 治療后,臨床型乳房炎奶牛乳清NAG、LDH、AST、ALT 和ACP 含量均呈下降趨勢,并最終基本恢復(fù)至健康水平,與于文會等[24]和覃杰等[25]研究結(jié)果一致,白頭翁皂苷B4 修復(fù)受損血管內(nèi)皮細(xì)胞并增強(qiáng)中性粒細(xì)胞殺菌能力,抑制血液體細(xì)胞和溶酶體向乳汁轉(zhuǎn)移[26],并增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[27],促使奶牛乳酶恢復(fù)正常水平。

    3.3 白頭翁皂苷B4對臨床型乳房炎奶牛乳清抗氧化能力的影響

    炎癥發(fā)展過程中,免疫細(xì)胞產(chǎn)生活性氧(reactive oxygen species,ROS)清除病原體,機(jī)體耗氧量增加并產(chǎn)生過量超氧陰離子(superoxide anion,)。當(dāng)抗氧化能力不足以清除時,細(xì)胞發(fā)生氧化變化并誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化,從而損害奶牛乳腺組織[28]。反映機(jī)體抗氧化功能指標(biāo)主要有T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT和MDA 等,其中T-AOC 是衡量機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo),可判斷機(jī)體氧化應(yīng)激程度[29]。GSH-Px是重要的脂質(zhì)過氧化物分解酶,可衡量機(jī)體抗氧化能力[30]。SOD和CAT可通過清除和過氧化氫等強(qiáng)氧化性物質(zhì),減緩氧自由基對細(xì)胞氧化損傷[31]。MDA 則是機(jī)體脂質(zhì)受氧自由基攻擊損害程度的重要指標(biāo)之一[32]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,臨床型乳房炎奶牛乳清T-AOC、GSH-Px、SOD 和CAT含量顯著低于健康奶牛(P<0.05),MDA 顯著高于對照組(P<0.05),與尹柏雙等[33]研究結(jié)果一致,可能是機(jī)體為對抗炎癥反應(yīng),不斷產(chǎn)生和過氧化氫殺滅病原菌,但氧自由基過多引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng),使抗氧化酶活性降低,造成組織細(xì)胞損傷,最終導(dǎo)致奶牛氧化-抗氧化失衡。研究表明白頭翁、秦皮和杜仲混合提取物可提高麻鴨免疫功能和抗氧化能力[34]。白頭翁及皂苷B4可提高T-AOC和SOD含量,降低MDA含量[35-36]。本試驗(yàn)中,白頭翁皂苷B4 提高了臨床型乳房炎奶牛乳清T-AOC、GSH-Px、SOD 和CAT 含量,降低MDA 含量,與He等[8]研究結(jié)果一致,可能是白頭翁皂苷B4促進(jìn)奶牛機(jī)體T-AOC 和SOD 將過多的轉(zhuǎn)換為過氧化氫,并在GSH-Px 和CAT 作用下生成水和氧氣,從而減輕機(jī)體和MDA 堆積,避免細(xì)胞受損,恢復(fù)抗氧化功能[37]。

    白頭翁皂苷B4可顯著降低臨床型乳房炎奶牛炎癥反應(yīng)和乳汁SCC,促進(jìn)乳酶恢復(fù)正常水平,增強(qiáng)乳腺抗氧化能力,是治療奶牛臨床型乳房炎的理想藥物。

    猜你喜歡
    白頭翁乳清乳汁
    按摩推拿護(hù)理緩解哺乳期乳汁淤積諸癥的作用
    乳汁點(diǎn)目需謹(jǐn)慎
    白頭翁
    媽媽的奶為何變色了
    健康博覽(2018年12期)2018-01-03 09:18:28
    牛奶是從哪里來的?
    大灰狼(2015年1期)2015-06-10 21:17:00
    想改名的白頭翁
    透析乳清對雞生長和小腸對養(yǎng)分吸收的影響
    飼料博覽(2014年7期)2014-04-05 15:18:33
    乳清低聚肽的制備及其抗氧化活性
    乳清生物技術(shù)處理研究進(jìn)展
    白頭翁研究進(jìn)展
    中成藥(2014年11期)2014-02-28 22:30:03
    国产日韩欧美在线精品| 国产精品一区二区三区四区久久| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 不卡视频在线观看欧美| 晚上一个人看的免费电影| 欧美丝袜亚洲另类| 在线观看午夜福利视频| 日本av手机在线免费观看| 免费大片18禁| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 在线国产一区二区在线| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 中国美白少妇内射xxxbb| 在线播放国产精品三级| 日本爱情动作片www.在线观看| 99热网站在线观看| 久久久久久伊人网av| 最好的美女福利视频网| 日韩一本色道免费dvd| 中文欧美无线码| 此物有八面人人有两片| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美一级a爱片免费观看看| 99热精品在线国产| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 一级av片app| 干丝袜人妻中文字幕| 免费在线观看成人毛片| 久久九九热精品免费| 日本av手机在线免费观看| 久久综合国产亚洲精品| a级毛片免费高清观看在线播放| 黑人高潮一二区| 草草在线视频免费看| 在线观看66精品国产| 国产一级毛片七仙女欲春2| 91狼人影院| av在线老鸭窝| 国产成人精品一,二区 | 日韩av不卡免费在线播放| 国产一级毛片七仙女欲春2| 插逼视频在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲性久久影院| 国产精品永久免费网站| 干丝袜人妻中文字幕| 麻豆成人午夜福利视频| 国产一区二区在线av高清观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 免费看光身美女| 国产探花极品一区二区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲av成人精品一区久久| 免费av观看视频| 亚洲在线自拍视频| 中文在线观看免费www的网站| 99久久人妻综合| 老女人水多毛片| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 久久99热6这里只有精品| 青春草亚洲视频在线观看| 国产av在哪里看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 少妇的逼水好多| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 真实男女啪啪啪动态图| 国产精品久久久久久久久免| 国产麻豆成人av免费视频| 热99re8久久精品国产| 好男人在线观看高清免费视频| 夜夜爽天天搞| 变态另类丝袜制服| 精品久久国产蜜桃| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲美女视频黄频| 日日撸夜夜添| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲精品自拍成人| 午夜福利在线在线| 国产乱人视频| 久久国产乱子免费精品| 亚洲真实伦在线观看| 国产精品综合久久久久久久免费| 日韩人妻高清精品专区| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲成人av在线免费| 少妇的逼水好多| 欧美激情国产日韩精品一区| 午夜视频国产福利| 亚洲成av人片在线播放无| 国产欧美日韩精品一区二区| 中文字幕av在线有码专区| 成人美女网站在线观看视频| 观看免费一级毛片| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲av成人精品一区久久| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 晚上一个人看的免费电影| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 在线免费观看不下载黄p国产| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产人妻一区二区三区在| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲成人久久爱视频| 少妇人妻精品综合一区二区 | 免费搜索国产男女视频| 性插视频无遮挡在线免费观看| 成人午夜高清在线视频| 性色avwww在线观看| 老司机影院成人| 精品久久久久久成人av| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久人妻av系列| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 亚洲自偷自拍三级| av在线天堂中文字幕| 青春草亚洲视频在线观看| 夜夜爽天天搞| 免费在线观看成人毛片| 国产91av在线免费观看| 国产成人精品一,二区 | 精品久久国产蜜桃| 一本一本综合久久| 国产在视频线在精品| av在线亚洲专区| 成人毛片a级毛片在线播放| 午夜福利在线在线| 国产精品久久久久久av不卡| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 欧美精品国产亚洲| 极品教师在线视频| 欧美区成人在线视频| 在线免费观看的www视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 欧美另类亚洲清纯唯美| 成人特级黄色片久久久久久久| 黑人高潮一二区| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 身体一侧抽搐| а√天堂www在线а√下载| 又爽又黄无遮挡网站| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产av在哪里看| 哪里可以看免费的av片| 日韩av在线大香蕉| 亚洲三级黄色毛片| 国产不卡一卡二| 亚洲五月天丁香| 中文字幕久久专区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲高清免费不卡视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产真实伦视频高清在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 久久99热6这里只有精品| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 天堂av国产一区二区熟女人妻| 此物有八面人人有两片| 欧美zozozo另类| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 国产探花在线观看一区二区| 亚洲精品自拍成人| 日本一二三区视频观看| 国产在视频线在精品| 寂寞人妻少妇视频99o| 99在线人妻在线中文字幕| 国产中年淑女户外野战色| 国产成人一区二区在线| 午夜a级毛片| 精品欧美国产一区二区三| 国产精品野战在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产成人影院久久av| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 日韩一本色道免费dvd| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产精品.久久久| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产精品久久视频播放| 欧美色欧美亚洲另类二区| av专区在线播放| 成年女人看的毛片在线观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 色综合站精品国产| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久久久久久久中文| 干丝袜人妻中文字幕| 一本精品99久久精品77| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 日本成人三级电影网站| 日韩欧美精品v在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 久久99热6这里只有精品| 一级毛片aaaaaa免费看小| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 亚洲自偷自拍三级| 亚洲国产精品成人久久小说 | 少妇被粗大猛烈的视频| 欧美激情在线99| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久99热这里只有精品18| 丝袜美腿在线中文| 成年av动漫网址| 在线观看66精品国产| 久久久久久久久大av| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲色图av天堂| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲国产精品国产精品| 午夜福利高清视频| 男插女下体视频免费在线播放| 人人妻人人看人人澡| 少妇丰满av| 最近2019中文字幕mv第一页| .国产精品久久| 久久久精品欧美日韩精品| 内地一区二区视频在线| 午夜福利在线在线| 麻豆成人午夜福利视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产成人精品婷婷| 亚洲国产精品久久男人天堂| av在线观看视频网站免费| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲天堂国产精品一区在线| 成年版毛片免费区| 日韩精品有码人妻一区| 黄片wwwwww| 人妻久久中文字幕网| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 亚洲自偷自拍三级| 插阴视频在线观看视频| 国产真实乱freesex| 国产伦精品一区二区三区视频9| 午夜a级毛片| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产黄a三级三级三级人| 乱人视频在线观看| 一级毛片我不卡| 精品久久久久久久久久久久久| 麻豆一二三区av精品| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 最好的美女福利视频网| 麻豆国产97在线/欧美| 毛片女人毛片| 欧美潮喷喷水| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产成人精品婷婷| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 婷婷精品国产亚洲av| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | a级一级毛片免费在线观看| 特级一级黄色大片| 日本黄大片高清| 热99在线观看视频| 久久久久久国产a免费观看| 一本一本综合久久| 国产91av在线免费观看| 亚洲最大成人中文| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 深夜精品福利| 老司机影院成人| 看片在线看免费视频| 国产高潮美女av| 日韩强制内射视频| 国产亚洲欧美98| 国产成人午夜福利电影在线观看| 在线a可以看的网站| 亚洲自拍偷在线| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲国产精品合色在线| 色综合站精品国产| 国产精品野战在线观看| 免费人成在线观看视频色| 欧美日本亚洲视频在线播放| 春色校园在线视频观看| 亚洲,欧美,日韩| 男女边吃奶边做爰视频| 国产乱人偷精品视频| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 色哟哟·www| 精品久久久久久久久久久久久| 国产av在哪里看| 亚洲国产精品成人久久小说 | 国产老妇伦熟女老妇高清| 日韩国内少妇激情av| 99在线人妻在线中文字幕| 特大巨黑吊av在线直播| av在线观看视频网站免费| 最近手机中文字幕大全| 一个人看的www免费观看视频| 中文字幕熟女人妻在线| 日韩视频在线欧美| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | av在线观看视频网站免费| 久久九九热精品免费| 欧美激情久久久久久爽电影| 深爱激情五月婷婷| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲精品色激情综合| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲成人久久性| 最后的刺客免费高清国语| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产一区二区激情短视频| av黄色大香蕉| 日日撸夜夜添| 老女人水多毛片| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美区成人在线视频| 午夜亚洲福利在线播放| kizo精华| av在线天堂中文字幕| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国内揄拍国产精品人妻在线| 色视频www国产| 日本免费一区二区三区高清不卡| 成人无遮挡网站| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 久久6这里有精品| 欧美日韩国产亚洲二区| 日韩强制内射视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产精品一及| 男女那种视频在线观看| 99热网站在线观看| 精品久久久久久久久久久久久| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 午夜激情欧美在线| 亚洲精品自拍成人| 青春草国产在线视频 | 国产亚洲精品久久久com| 免费无遮挡裸体视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 啦啦啦韩国在线观看视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 久久精品国产亚洲网站| 我的老师免费观看完整版| 天天躁日日操中文字幕| 婷婷亚洲欧美| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲色图av天堂| 欧美激情在线99| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 人人妻人人看人人澡| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲av成人精品一区久久| avwww免费| 国产一级毛片在线| 在线观看一区二区三区| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产精品久久久久久精品电影小说 | 久久99热6这里只有精品| 国产高潮美女av| 国产真实乱freesex| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲五月天丁香| .国产精品久久| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 九草在线视频观看| 亚洲高清免费不卡视频| 黄色一级大片看看| 成人午夜高清在线视频| 黄色欧美视频在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲五月天丁香| 亚洲人成网站在线播| 欧美三级亚洲精品| 亚洲av一区综合| 亚洲丝袜综合中文字幕| av福利片在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 男人的好看免费观看在线视频| 联通29元200g的流量卡| 哪里可以看免费的av片| 国产片特级美女逼逼视频| 国产色爽女视频免费观看| 日韩人妻高清精品专区| 床上黄色一级片| 欧美成人免费av一区二区三区| av在线蜜桃| 卡戴珊不雅视频在线播放| 成人欧美大片| 久久久久久久久久久丰满| h日本视频在线播放| avwww免费| 最近视频中文字幕2019在线8| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产成人精品久久久久久| 中国国产av一级| 啦啦啦韩国在线观看视频| 两个人的视频大全免费| 免费看美女性在线毛片视频| 一级毛片aaaaaa免费看小| 最新中文字幕久久久久| 亚洲四区av| 在线a可以看的网站| 国产视频首页在线观看| 免费看日本二区| 91久久精品电影网| 91久久精品国产一区二区三区| 久久精品夜色国产| 国产熟女欧美一区二区| av在线天堂中文字幕| 精品久久久久久久久久久久久| 久久久久国产网址| 国产高清视频在线观看网站| 久久人人爽人人片av| 99久久精品一区二区三区| 久久人人精品亚洲av| 久久国内精品自在自线图片| www.av在线官网国产| 欧美性猛交黑人性爽| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 边亲边吃奶的免费视频| 一区二区三区四区激情视频 | 亚洲精品亚洲一区二区| 男女下面进入的视频免费午夜| avwww免费| 午夜激情欧美在线| 又爽又黄a免费视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 色哟哟哟哟哟哟| 国产精品久久久久久av不卡| 美女被艹到高潮喷水动态| 成人三级黄色视频| 亚洲成人久久爱视频| www.av在线官网国产| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产69精品久久久久777片| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久亚洲精品不卡| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 成年女人永久免费观看视频| 老司机影院成人| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 嫩草影院入口| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 乱系列少妇在线播放| 国产日韩欧美在线精品| 欧美日韩精品成人综合77777| av女优亚洲男人天堂| 级片在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 久久99热6这里只有精品| 精品熟女少妇av免费看| 一级毛片久久久久久久久女| 真实男女啪啪啪动态图| 五月伊人婷婷丁香| 免费看av在线观看网站| 国产极品精品免费视频能看的| 岛国在线免费视频观看| kizo精华| 国国产精品蜜臀av免费| 久久精品国产亚洲av天美| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久九九热精品免费| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美潮喷喷水| 哪里可以看免费的av片| 级片在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚洲成人久久爱视频| 九九在线视频观看精品| 久久6这里有精品| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲在线观看片| 久久中文看片网| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲成人精品中文字幕电影| 如何舔出高潮| 99热网站在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 天美传媒精品一区二区| 伦理电影大哥的女人| 日韩欧美精品免费久久| 身体一侧抽搐| 婷婷色av中文字幕| 久久久久久久久大av| 亚洲欧美日韩高清在线视频| a级毛片a级免费在线| 国产伦一二天堂av在线观看| av视频在线观看入口| 成人亚洲欧美一区二区av| 午夜精品在线福利| 国产一区二区三区av在线 | 国产男人的电影天堂91| 日韩欧美在线乱码| 丝袜美腿在线中文| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产美女午夜福利| 日韩精品有码人妻一区| 观看免费一级毛片| 欧美性感艳星| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产av在哪里看| 亚洲第一电影网av| 九九热线精品视视频播放| 亚洲在久久综合| 免费观看的影片在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 久久精品久久久久久久性| 亚洲精品成人久久久久久| av黄色大香蕉| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲国产精品合色在线| 国产精华一区二区三区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 成熟少妇高潮喷水视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲精品国产成人久久av| or卡值多少钱| 国产av麻豆久久久久久久| 国产精品,欧美在线| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久国产成人免费| 看免费成人av毛片| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲在久久综合| 淫秽高清视频在线观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产精品,欧美在线| 给我免费播放毛片高清在线观看| av视频在线观看入口| av在线老鸭窝| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲av电影不卡..在线观看| 日日啪夜夜撸| 人妻少妇偷人精品九色| 国产熟女欧美一区二区| 午夜福利在线观看吧| 婷婷亚洲欧美| 校园人妻丝袜中文字幕| 欧美+日韩+精品| 一个人观看的视频www高清免费观看| 看黄色毛片网站| 我的女老师完整版在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 欧美日韩在线观看h| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日韩 亚洲 欧美在线| 中文字幕av成人在线电影| 简卡轻食公司| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 乱系列少妇在线播放| 男女啪啪激烈高潮av片| 三级毛片av免费| 午夜福利在线在线| 久久草成人影院| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲国产精品国产精品| 日日撸夜夜添| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产精品日韩av在线免费观看| 久久这里有精品视频免费| 少妇的逼好多水| 国产亚洲精品av在线| 91久久精品国产一区二区三区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久精品影院6| 欧美高清成人免费视频www| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 99热全是精品| 丰满人妻一区二区三区视频av| 成人特级av手机在线观看| 内射极品少妇av片p| 性插视频无遮挡在线免费观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 午夜精品国产一区二区电影 | 欧美成人a在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 内地一区二区视频在线| 97在线视频观看| 高清午夜精品一区二区三区 | 亚洲av男天堂| 一个人看视频在线观看www免费| 99久国产av精品国产电影| 久久99蜜桃精品久久| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 九九热线精品视视频播放| 黄色日韩在线| 久久久国产成人精品二区| 久久中文看片网| 九草在线视频观看| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲综合色惰| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲国产精品成人久久小说 |