• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    冠心病患者血清lncRNA CHAST的表達(dá)和臨床意義

    2021-09-28 04:39:14曾偉雄曾金財(cái)方快發(fā)
    重慶醫(yī)學(xué) 2021年17期
    關(guān)鍵詞:心肌梗死冠心病血清

    曾偉雄,曾金財(cái),方快發(fā)

    (廣東省惠州市第六人民醫(yī)院心內(nèi)科 516200)

    冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)是影響人類健康的頭號(hào)殺手[1-2]。如不及時(shí)診斷和治療,病情會(huì)逐步進(jìn)展導(dǎo)致治療難度增大,死亡風(fēng)險(xiǎn)增加,部分患者極易發(fā)生猝死[3-4]。冠狀動(dòng)脈造影是目前臨床診斷冠心病的金標(biāo)準(zhǔn),但其屬于有創(chuàng)檢測(cè),且對(duì)冠心病早期診斷和病情嚴(yán)重程度評(píng)估價(jià)值不足,患者接受度不高,因此存在一定局限性[5-6]。

    最近研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)參與動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病和高血壓等心血管疾病的發(fā)生和進(jìn)展過程,其在循環(huán)中可穩(wěn)定存在并可被檢測(cè)[7-10]。lncRNA CHAST屬于最新鑒定的lncRNA之一,研究顯示其參與心力衰竭后左心室的重構(gòu)過程,參與冠心病患者缺血缺氧心肌細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)過程,可望成為參與冠心病發(fā)病過程的關(guān)鍵lncRNA分子[11-12]。絲氨酸蛋白酶抑制劑A3(serpina3)又稱作α-1抗糜蛋白酶,最先鑒定為急性期血漿蛋白酶抑制劑[13],其在先兆子癇患者循環(huán)中水平明顯增加,可能與慢性炎癥和孕婦血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷密切相關(guān)[14]。最近研究顯示serpina3是主動(dòng)脈鈣化的早期診斷標(biāo)志物[15]。盡管如此,目前尚無研究探討冠心病患者血清serpina3水平及其臨床意義。本研究探討冠心病患者循環(huán)中l(wèi)ncRNA CHAST和serpina3水平并分析其對(duì)冠心病的臨床診斷及在預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2018年7月至2019年7月本院心內(nèi)科收治的115例冠心病患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)[6]:(1)符合2020國(guó)際心臟病學(xué)會(huì)和世界衛(wèi)生組織(WHO)對(duì)冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)均行冠狀動(dòng)脈造影檢查,至少1支冠狀動(dòng)脈血管狹窄程度大于或等于50%;(3)不存在其他部位癌癥或血液系統(tǒng)惡性疾??;(4)臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)嚴(yán)重的肝、腎、肺等臟器功能障礙者;(2)合并惡性血液系統(tǒng)疾病或嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾病需要長(zhǎng)期藥物治療者;(3)嚴(yán)重精神疾病或存在溝通障礙;(4)既往有冠心病且接受過內(nèi)科血管重建或外科冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)者;(5)孕婦和哺乳期婦女。115例冠心病患者作為冠心病組,其中男65例,女50例,年齡44~72歲,平均(59.22±6.39)歲;疾病類型:穩(wěn)定型心絞痛66例,不穩(wěn)定型心絞痛34例,急性心肌梗死15例;單支、2支和多支血管病變分別有47、33和35例。從同期本院體檢科常規(guī)健康體檢人員中選取年齡和性別相匹配的健康體檢者65例為對(duì)照組,其中男43例,女22例,年齡44~73歲,平均(57.20±7.23)歲。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書,本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

    1.2 方法

    1.2.1分組

    根據(jù)冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果所得的Gensini評(píng)分對(duì)冠心病組進(jìn)行亞組分組。Gensini評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[16]:冠狀動(dòng)脈無狹窄為0分,冠狀動(dòng)脈狹窄程度在0~<26%為1分,26%~<51%為2分,51%~<76%為4分,76%~<91%為8分,91%~<100%為16分,而冠狀動(dòng)脈狹窄100%為32分。冠心病患者最終Gensini評(píng)分為每例患者的各個(gè)分支積分相加。Gensini評(píng)分0~25分為輕度病變組,26~49分為中度病變組,≥50分為重度病變組,115例冠心病患者中,輕度病變組32例、中度病變組45例、重度病變組38例。

    1.2.2臨床標(biāo)本收集

    兩組入選的研究對(duì)象均采集清晨空腹靜脈血,采血時(shí)保持平臥位,采集患者外周上肢靜脈血8 mL,3 000 r/min在5 ℃離心15 min,分離血清,-80 ℃冰箱保存待統(tǒng)一檢測(cè)。

    1.2.3循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平檢測(cè)

    實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)兩組循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平:按血清/血漿miRNA提取分離試劑盒說明書(德國(guó)Qiagen公司)進(jìn)行RNA提取后檢測(cè)RNA純度,選擇吸光度1.8~2.1的合格RNA標(biāo)本,使用QuantiTect逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(德國(guó)Qiagen公司),從1 μg總RNA中合成cDNA,并將標(biāo)本保存于-20 ℃冰箱中。采用RealQ Plus 2x Master Mix for Probe(無ROXTM)進(jìn)行3次重復(fù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。反應(yīng)在Rotor-Gene Q(德國(guó)Qiagen公司)上進(jìn)行,lncRNA CHAST正向引物為5′-TGC TGC ACT TTA CAA CCA CTG-3′,反向引物為5′-ATG GTG TCT TTG ATG TTG GGC-3′,PCR反應(yīng)參數(shù)如下:95 ℃預(yù)變性15 min,94 ℃ 20 s,60 ℃ 34 s,40個(gè)循環(huán)。于60 ℃時(shí)采集熒光信號(hào),以U6為內(nèi)參基因。采用2-ΔΔCt法計(jì)算lncRNA CHAST相對(duì)表達(dá)水平,每份標(biāo)本均連續(xù)測(cè)定3次,取平均值。

    1.2.4血清serpina3水平檢測(cè)

    采用ELISA檢測(cè)血清serpina3水平,試劑盒購(gòu)自北京優(yōu)爾生科技公司,嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作,所有標(biāo)本統(tǒng)一檢測(cè),最小的檢測(cè)水平為0.01 μg/mL,組間和組內(nèi)的變異系數(shù)分別為3.5%和5.0%。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    2 結(jié) 果

    2.1 兩組循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3水平比較

    冠心病組循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3水平明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    表1 兩組循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3水平比較

    2.2 不同嚴(yán)重程度冠心病組血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3水平比較

    輕、中、重度病變組血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    2.3 lncRNA CHAST、serpina3與Gensini評(píng)分的相關(guān)性分析

    Pearson相關(guān)性分析示:lncRNA CHAST與Gensini評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.783,P<0.05),serpina3與Gensini評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.726,P<0.05),lncRNA CHAST與serpina3也呈正相關(guān)(r=0.901,P<0.05),見圖1。

    表2 不同嚴(yán)重程度冠心病組血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3水平比較

    A:lncRNA CHAST與Gensini評(píng)分的相關(guān)性;B:serpina3與Gensini評(píng)分的相關(guān)性;C:lncRNA CHAST與serpina3的相關(guān)性。

    2.4 lncRNA CHAST、serpina3對(duì)冠心病的診斷價(jià)值分析

    ROC曲線分析顯示,當(dāng)lncRNA CHAST的最佳截?cái)嘀禐?.92時(shí),曲線下面積(AUC)為0.801(95%CI:0.765~0.847,P<0.001),靈敏度為75.1%,特異度為87.9%。當(dāng)serpina3的最佳截?cái)嘀禐?9.37 μg/mL時(shí),AUC為0.914(95%CI:0.876~0.946,P<0.001),靈敏度為87.1%,特異度為93.9%。二者聯(lián)合診斷冠心病的AUC為0.946(95%CI:0.897~0.982,P<0.001),靈敏度為91.1%,特異度為97.9%,見圖2。

    圖2 lncRNA CHAST、serpina3對(duì)冠心病診斷的ROC曲線

    3 討 論

    近年來我國(guó)冠心病發(fā)病率和病死率均逐年上升,且發(fā)病年齡更趨于年輕化[17]。鑒于我國(guó)人口基數(shù)巨大,研究顯示每年因冠心病死亡的人數(shù)高達(dá)700萬人,給家庭和社會(huì)造成巨大的負(fù)擔(dān)[18]。如何早期有效對(duì)冠心病患者進(jìn)行診斷,并對(duì)其病情進(jìn)展進(jìn)行有效監(jiān)測(cè)顯得尤為重要,是降低患者潛在血管事件發(fā)生及改善預(yù)后的重要途徑[18]。

    lncRNA可通過調(diào)控多種細(xì)胞的增殖、凋亡、損傷、自噬[19]和分化等過程[20],進(jìn)而在心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[21]。lncRNA CHAST定位在人類染色體7q32.2上,以細(xì)胞溶質(zhì)﹑核可溶物和染色質(zhì)相關(guān)形式廣泛存在[22]。也可被激活的T細(xì)胞信號(hào)的核因子所激活。缺血再灌注損傷和永久性梗死后,心肌細(xì)胞中活化T細(xì)胞核因子的核易位增加[11]。本研究顯示冠心病患者血清lncRNA CHAST表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,其表達(dá)水平在不同嚴(yán)重程度的冠心病患者中存在明顯差異,且隨著疾病的進(jìn)展,表達(dá)水平呈增加的趨勢(shì)。有研究報(bào)道,在急性心肌梗死患者血清lncRNA CHAST表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增加,特別是在心肌梗死早期改變最為明顯[12],提示可能和心肌缺血密切相關(guān),其水平和心肌梗死患者左心室射血分?jǐn)?shù)呈正相關(guān),在心肌梗死的恢復(fù)期,其表達(dá)水平逐步下降。盡管冠心病患者血清lncRNA CHAST表達(dá)水平增加的機(jī)制尚不清楚,推測(cè)可能為冠心病的心肌細(xì)胞在缺血缺氧刺激下導(dǎo)致其表達(dá)水平增高。

    serpina3是位于14q32上編碼的約為3.0×109的蛋白質(zhì),是由人體肝、心、肺和腎臟組織和細(xì)胞合成的急性期蛋白[23]。有研究顯示其可參與慢性阻塞性肺疾病、帕金森病、腦出血和多發(fā)性系統(tǒng)性萎縮疾病的發(fā)展[24]。有研究報(bào)道在動(dòng)脈粥樣硬化病變中,serpina3水平增加,在輕度卒中或短暫性腦缺血發(fā)作的患者中serpina3水平增加更為明顯[25]。本研究顯示冠心病患者血清serpina3水平高于對(duì)照組,隨著冠心病患者Gensini評(píng)分增加,serpina3水平明顯增加,在不同嚴(yán)重程度的冠心病患者中存在明顯差異,提示其可作為評(píng)估冠心病患者病情嚴(yán)重程度的有效指標(biāo)。文獻(xiàn)報(bào)道顯示,與對(duì)照組比較,急性心肌梗死患者基礎(chǔ)血漿serpina3水平升高[26]。急性心肌梗死后激活的嗜中性白細(xì)胞和肥大細(xì)胞衍生蛋白,產(chǎn)生炎性因子瀑布效應(yīng),可能調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞對(duì)于serpina3的表達(dá)[26]。在心肌梗死的血管平滑肌細(xì)胞中serpina3水平也明顯增加,其可能是在冠心病患者的缺血心肌細(xì)胞和供應(yīng)心臟血供的微循環(huán)中,血管平滑肌細(xì)胞serpina3水平增加導(dǎo)致冠心病患者血清循環(huán)的serpina3水平增加[27]。

    本研究發(fā)現(xiàn)隨著冠心病嚴(yán)重程度增加,冠狀動(dòng)脈造影所得的Gensini評(píng)分增加[28],發(fā)現(xiàn)冠心病患者循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3水平也逐漸增加,Gensini評(píng)分增加和循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3水平呈正相關(guān),同時(shí)冠心病循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3水平也呈正相關(guān),上述結(jié)果顯示冠心病循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3水平可作為評(píng)價(jià)冠心病嚴(yán)重程度的潛在的生物標(biāo)志物,臨床上可通過檢測(cè)循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3濃度來評(píng)估冠心病的嚴(yán)重程度。

    ROC曲線分析顯示通過檢測(cè)循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3濃度均能夠很好地區(qū)分是否為冠心病患者,二者診斷冠心病患者的ROC曲線的AUC值分別為0.801和0.914,而兩者聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線AUC值可達(dá)0.946,上述結(jié)果提示循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3濃度對(duì)冠心病具有較好的診斷效能,其相對(duì)于冠心病其他診斷手段如冠狀動(dòng)脈造影,具有無創(chuàng)的優(yōu)勢(shì)。

    綜上所述,冠心病患者循環(huán)血清lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3濃度均明顯高于健康對(duì)照人群,單獨(dú)和聯(lián)合檢測(cè)lncRNA CHAST表達(dá)水平和serpina3水平可對(duì)冠心病進(jìn)行早期診斷和病情嚴(yán)重程度評(píng)估,二者可能成為冠心病患者潛在的無創(chuàng)生物標(biāo)志物。

    猜你喜歡
    心肌梗死冠心病血清
    血清免疫球蛋白測(cè)定的臨床意義
    中老年保健(2021年3期)2021-08-22 06:50:04
    ADAMTs-1、 CF6、 CARP在冠心病合并慢性心力衰竭中的意義
    Meigs綜合征伴血清CA-125水平升高1例
    慢性鼻-鼻竇炎患者血清IgE、IL-5及HMGB1的表達(dá)及其臨床意義
    茶、汁、飲治療冠心病
    警惕冠心病
    智慧健康(2019年36期)2020-01-14 15:22:58
    冠心病室性早搏的中醫(yī)治療探析
    急性心肌梗死合并心力衰竭的護(hù)理
    中醫(yī)藥防治心肌梗死:思考與展望
    替格瑞洛在老年心肌梗死急診冠狀動(dòng)脈介入治療中的作用研究
    999精品在线视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| √禁漫天堂资源中文www| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产一区二区三区av在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 美女cb高潮喷水在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 99热这里只有精品一区| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲av国产av综合av卡| 午夜福利视频在线观看免费| 日本黄色片子视频| 国产精品一二三区在线看| a 毛片基地| 丝袜美足系列| 亚洲情色 制服丝袜| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 高清在线视频一区二区三区| 丰满饥渴人妻一区二区三| a级毛片黄视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 午夜激情久久久久久久| 五月玫瑰六月丁香| 搡女人真爽免费视频火全软件| 成人亚洲精品一区在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 日本黄色片子视频| 午夜激情av网站| 亚洲成人手机| 亚洲内射少妇av| 亚洲精品乱久久久久久| 精品久久蜜臀av无| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 日韩三级伦理在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 两个人的视频大全免费| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 欧美三级亚洲精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 久久久久久久久久成人| 岛国毛片在线播放| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 丰满少妇做爰视频| 久久久午夜欧美精品| 亚洲久久久国产精品| 插阴视频在线观看视频| 一级毛片我不卡| 最近的中文字幕免费完整| 日本黄色片子视频| 少妇的逼水好多| 看免费成人av毛片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 老司机影院毛片| 精品人妻偷拍中文字幕| 男人操女人黄网站| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲国产精品专区欧美| 久久久精品94久久精品| av在线播放精品| 国产精品嫩草影院av在线观看| 女人精品久久久久毛片| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产成人精品久久久久久| 18在线观看网站| 国产成人午夜福利电影在线观看| 一级爰片在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产乱来视频区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 丰满饥渴人妻一区二区三| av在线app专区| 国产色婷婷99| 岛国毛片在线播放| 制服诱惑二区| 久久久国产一区二区| 精品午夜福利在线看| 色94色欧美一区二区| 国产在线一区二区三区精| a级毛色黄片| 亚洲成人手机| 51国产日韩欧美| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产一级毛片在线| 亚洲精品一区蜜桃| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 国内精品宾馆在线| 69精品国产乱码久久久| 超色免费av| 亚洲国产精品999| 精品亚洲成a人片在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品欧美亚洲77777| 久久久久久久久大av| 一级毛片 在线播放| 国产欧美日韩综合在线一区二区| av.在线天堂| 观看av在线不卡| 精品久久久久久电影网| 久久热精品热| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久影院123| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品,欧美精品| 看免费成人av毛片| 在线观看一区二区三区激情| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日韩欧美精品免费久久| 国产综合精华液| 亚洲精品av麻豆狂野| 在线观看美女被高潮喷水网站| 五月伊人婷婷丁香| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲综合色惰| 观看美女的网站| 能在线免费看毛片的网站| 草草在线视频免费看| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲怡红院男人天堂| 亚洲欧洲国产日韩| 久久99精品国语久久久| 制服诱惑二区| 亚洲av福利一区| 亚洲伊人久久精品综合| 我的女老师完整版在线观看| 免费观看a级毛片全部| av免费观看日本| 久久99精品国语久久久| 久久99精品国语久久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲国产精品一区二区三区在线| av播播在线观看一区| 精品一区二区免费观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 2022亚洲国产成人精品| 国产 一区精品| 亚洲国产av新网站| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久精品国产自在天天线| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 99热网站在线观看| 亚洲av男天堂| 午夜激情久久久久久久| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲,一卡二卡三卡| 能在线免费看毛片的网站| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲美女视频黄频| 亚洲国产av新网站| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| videosex国产| 欧美日韩成人在线一区二区| 久久久久久伊人网av| 人人澡人人妻人| 午夜激情av网站| 少妇精品久久久久久久| 精品酒店卫生间| 免费人成在线观看视频色| 久久亚洲国产成人精品v| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 国产精品.久久久| 国产成人精品福利久久| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 男女啪啪激烈高潮av片| av.在线天堂| 成人黄色视频免费在线看| 搡老乐熟女国产| 狂野欧美激情性bbbbbb| 精品亚洲成a人片在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产一区二区三区av在线| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久久亚洲精品成人影院| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 青青草视频在线视频观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 三级国产精品片| av在线app专区| 在线观看人妻少妇| 国产在线免费精品| 母亲3免费完整高清在线观看 | 日日撸夜夜添| 久久久国产一区二区| 日韩av免费高清视频| 2018国产大陆天天弄谢| 青青草视频在线视频观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 欧美亚洲日本最大视频资源| 成人综合一区亚洲| 久久鲁丝午夜福利片| 久久热精品热| 成人国语在线视频| 成人漫画全彩无遮挡| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产在视频线精品| 欧美亚洲日本最大视频资源| 熟女av电影| videosex国产| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日本av免费视频播放| 成人国语在线视频| 亚洲精品国产av成人精品| 日本黄色片子视频| 中文字幕久久专区| 成年女人在线观看亚洲视频| 亚洲精品一二三| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久久久久伊人网av| 国模一区二区三区四区视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 超色免费av| 日韩中文字幕视频在线看片| av播播在线观看一区| 亚洲av男天堂| av一本久久久久| 毛片一级片免费看久久久久| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 中文字幕亚洲精品专区| av黄色大香蕉| 秋霞伦理黄片| 一个人看视频在线观看www免费| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 十分钟在线观看高清视频www| 国模一区二区三区四区视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 精品人妻在线不人妻| 中文天堂在线官网| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲欧美精品自产自拍| 黄片无遮挡物在线观看| 午夜日本视频在线| 成人手机av| 亚洲美女视频黄频| 综合色丁香网| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产色婷婷99| 制服丝袜香蕉在线| 久久久久久伊人网av| 丝袜美足系列| 如何舔出高潮| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 我的老师免费观看完整版| 又大又黄又爽视频免费| 色吧在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 成年人午夜在线观看视频| 精品一区二区三区视频在线| 欧美 日韩 精品 国产| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 亚洲av综合色区一区| 久久久久精品性色| 亚洲国产精品国产精品| 看免费成人av毛片| 日本av免费视频播放| 欧美性感艳星| 久久人人爽人人片av| 欧美97在线视频| 看免费成人av毛片| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 一级片'在线观看视频| 日韩强制内射视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 少妇 在线观看| 免费人成在线观看视频色| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 91aial.com中文字幕在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 天美传媒精品一区二区| 午夜福利影视在线免费观看| 国内精品宾馆在线| 国产日韩欧美在线精品| 制服丝袜香蕉在线| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日本欧美国产在线视频| 久久亚洲国产成人精品v| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国精品久久久久久国模美| 中文字幕亚洲精品专区| 最近中文字幕2019免费版| 欧美精品一区二区大全| 国产一区二区三区av在线| 久久人人爽人人爽人人片va| 简卡轻食公司| 久久婷婷青草| 久久人妻熟女aⅴ| 精品久久久久久久久亚洲| 一级二级三级毛片免费看| 欧美性感艳星| 热re99久久国产66热| 少妇人妻精品综合一区二区| 日韩视频在线欧美| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美性感艳星| 美女视频免费永久观看网站| 精品熟女少妇av免费看| 制服人妻中文乱码| 亚洲五月色婷婷综合| 99热这里只有是精品在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 十八禁高潮呻吟视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久久99精品国语久久久| 天美传媒精品一区二区| 国产精品久久久久久久久免| 国产在线免费精品| 亚洲av成人精品一二三区| 91在线精品国自产拍蜜月| 嘟嘟电影网在线观看| 国产精品人妻久久久久久| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲av中文av极速乱| 多毛熟女@视频| 久久国内精品自在自线图片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 熟女av电影| 欧美精品一区二区大全| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲欧美清纯卡通| 女的被弄到高潮叫床怎么办| .国产精品久久| 国产国语露脸激情在线看| 精品国产国语对白av| 妹子高潮喷水视频| 91精品三级在线观看| 国产av码专区亚洲av| 日韩精品有码人妻一区| 插阴视频在线观看视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久毛片免费看一区二区三区| 我的老师免费观看完整版| 亚洲av.av天堂| 一二三四中文在线观看免费高清| 秋霞在线观看毛片| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 成人国产麻豆网| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产av国产精品国产| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲av欧美aⅴ国产| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产一区有黄有色的免费视频| 欧美精品一区二区大全| 欧美精品国产亚洲| 五月天丁香电影| 日本91视频免费播放| 蜜臀久久99精品久久宅男| 高清av免费在线| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲精品成人av观看孕妇| 免费少妇av软件| 女性生殖器流出的白浆| 国产一区二区在线观看av| 青春草亚洲视频在线观看| 国产乱来视频区| 午夜影院在线不卡| 亚洲中文av在线| 3wmmmm亚洲av在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 日本黄色片子视频| 精品一品国产午夜福利视频| 久久99蜜桃精品久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 青春草视频在线免费观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 黄片无遮挡物在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| 男女无遮挡免费网站观看| 国产精品成人在线| 亚洲av免费高清在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 性高湖久久久久久久久免费观看| www.色视频.com| 高清欧美精品videossex| 亚洲国产精品国产精品| 满18在线观看网站| 久久久久视频综合| 亚洲四区av| 少妇人妻精品综合一区二区| 精品一品国产午夜福利视频| 少妇高潮的动态图| 精品久久久久久久久亚洲| 最近的中文字幕免费完整| 黑丝袜美女国产一区| 视频区图区小说| 一级a做视频免费观看| 人妻系列 视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 成人国产av品久久久| 久久精品久久久久久久性| 日本黄大片高清| 五月天丁香电影| 天天操日日干夜夜撸| 国产亚洲精品久久久com| 在线精品无人区一区二区三| 色婷婷av一区二区三区视频| 一本大道久久a久久精品| 亚洲人成网站在线播| 欧美人与善性xxx| 欧美日韩成人在线一区二区| 国模一区二区三区四区视频| 午夜免费观看性视频| 最黄视频免费看| 日韩亚洲欧美综合| 午夜福利,免费看| 亚洲综合色惰| 精品国产国语对白av| 熟妇人妻不卡中文字幕| 三级国产精品欧美在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 满18在线观看网站| 大片免费播放器 马上看| 免费人成在线观看视频色| a级毛片免费高清观看在线播放| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲av国产av综合av卡| 中文字幕av电影在线播放| 国产av一区二区精品久久| 亚洲伊人久久精品综合| 国产精品一二三区在线看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 黄色欧美视频在线观看| 国产成人精品无人区| 男女国产视频网站| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 91久久精品电影网| 国精品久久久久久国模美| 午夜视频国产福利| 婷婷色麻豆天堂久久| 大片免费播放器 马上看| 精品酒店卫生间| 日韩成人av中文字幕在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 777米奇影视久久| av线在线观看网站| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产av国产精品国产| 在线播放无遮挡| 高清av免费在线| 亚洲精品456在线播放app| 欧美最新免费一区二区三区| 成人影院久久| 亚洲av成人精品一区久久| 在线看a的网站| 亚洲综合精品二区| 精品酒店卫生间| 日韩成人av中文字幕在线观看| kizo精华| 成人影院久久| 日韩电影二区| 老司机影院毛片| 亚洲精品av麻豆狂野| 成年女人在线观看亚洲视频| 亚洲av.av天堂| 美女视频免费永久观看网站| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品一区www在线观看| 大陆偷拍与自拍| 日本av手机在线免费观看| 精品久久久噜噜| 亚洲av男天堂| 丝袜在线中文字幕| 人成视频在线观看免费观看| 午夜福利影视在线免费观看| 国产成人freesex在线| 少妇的逼好多水| 一级爰片在线观看| 国产一区二区在线观看av| 国产精品久久久久久久久免| 只有这里有精品99| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲av国产av综合av卡| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲成人av在线免费| 免费av中文字幕在线| 欧美一级a爱片免费观看看| 草草在线视频免费看| 久久久久久久久久久丰满| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | av国产精品久久久久影院| 99国产综合亚洲精品| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 日韩一区二区三区影片| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产黄色视频一区二区在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲情色 制服丝袜| 秋霞伦理黄片| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲中文av在线| av在线播放精品| 麻豆成人av视频| 国产成人av激情在线播放 | 九九在线视频观看精品| 精品国产国语对白av| 国产男女超爽视频在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 黄色一级大片看看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产深夜福利视频在线观看| 最新中文字幕久久久久| 欧美3d第一页| 18在线观看网站| 欧美日韩av久久| 高清午夜精品一区二区三区| 亚洲,一卡二卡三卡| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久ye,这里只有精品| 秋霞伦理黄片| 午夜久久久在线观看| av专区在线播放| 激情五月婷婷亚洲| 国产毛片在线视频| av国产精品久久久久影院| av有码第一页| 成人无遮挡网站| 国产免费现黄频在线看| 国产免费一区二区三区四区乱码| 99视频精品全部免费 在线| av国产精品久久久久影院| 91精品三级在线观看| 日本av手机在线免费观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲性久久影院| 国产视频首页在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 午夜免费男女啪啪视频观看| 丰满乱子伦码专区| 国产午夜精品一二区理论片| 丰满迷人的少妇在线观看| 看免费成人av毛片| 精品国产国语对白av| 久久99精品国语久久久| 久久久久久人妻| 亚洲综合色惰| av专区在线播放| 有码 亚洲区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 国产乱人偷精品视频| 亚洲精品乱久久久久久| 日韩视频在线欧美| 有码 亚洲区| 国产又色又爽无遮挡免| 青青草视频在线视频观看| 91精品三级在线观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲av男天堂| 日日啪夜夜爽| 中国三级夫妇交换| 午夜影院在线不卡| 久久久国产一区二区| 赤兔流量卡办理| 欧美性感艳星| 岛国毛片在线播放| 国产亚洲精品久久久com| 男女啪啪激烈高潮av片| 妹子高潮喷水视频| 亚洲怡红院男人天堂| 丝袜喷水一区| 精品久久久久久久久av| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久久久视频综合| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 国产熟女午夜一区二区三区 | av在线观看视频网站免费| 丝袜在线中文字幕| 美女国产视频在线观看| 国产色婷婷99| 免费av中文字幕在线| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 在线观看免费日韩欧美大片 | 最新中文字幕久久久久| 一级爰片在线观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 精品熟女少妇av免费看|