紅景天苷對(duì)高原凍傷大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放舒縮因子的影響研究

王洪瑾　馮艷萍　張科偉　武圳　李毅

[摘要]目的：研究紅景天苷對(duì)高原凍傷大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放舒縮因子的影響。方法：隨機(jī)選取健康雄性SD大鼠90只，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，模擬凍傷組30只，凍傷組30只，紅景天苷組30只。紅景天苷組定期給予腹腔注射紅景天苷20mg/kg，模擬凍傷組和凍傷組定期給予等體積生理鹽水注射，從凍傷當(dāng)日開始，各組均每日注射1次，直到取材截止。凍傷后第1天、第3天、第7天觀察各組創(chuàng)面情況，并進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血，測定血漿中一氧化氮（NO）、血漿內(nèi)皮素（ET）、血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1α（6-K-PGF1α）水平。結(jié)果：傷后第7天凍區(qū)創(chuàng)面情況觀察，凍傷組足部組織腫脹明顯，各趾遠(yuǎn)端出現(xiàn)干癟，近端和遠(yuǎn)端呈黑色干性壞死，部分壞死組織脫落，無滲出，紅景天苷組凍區(qū)足部組織和各趾近端腫脹明顯，僅遠(yuǎn)端部分呈黑色干性壞死，無壞死組織脫落，滲出量少。與模擬凍傷組比較，凍傷組NO水平呈先降低后升高再降低的變化，且在傷后第3天最高，第7天時(shí)各組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與凍傷組比較，紅景天苷組NO水平在第1天、第3天顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模擬凍傷組比較，凍傷組ET水平都先降低后升高的變化，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與凍傷組比較，紅景天苷組ET水平在各時(shí)間點(diǎn)均較凍傷組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與凍傷組比較，紅景天苷組NO/ET在第1天、第3天差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模擬凍傷組比較，凍傷組6-K-PGF1α水平呈先升高后降低再升高的變化，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與凍傷組比較，紅景天苷組6-K-PGF1α水平在各時(shí)間點(diǎn)顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模擬凍傷組比較，凍傷組TXB2水平呈先升高后降低的變化，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與凍傷組比較，紅景天苷組TXB2水平在各時(shí)相點(diǎn)均低于凍傷組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與凍傷組比較，紅景天苷組6-K-PGF1α/TXB2的比值在各時(shí)間點(diǎn)均高于凍傷組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：紅景天苷對(duì)凍區(qū)組織具有保護(hù)作用，與調(diào)節(jié)高原地區(qū)凍傷大鼠血液中NO/ET以及6-K-PGF1α/TXB2之間的平衡有關(guān)，為紅景天苷應(yīng)用于凍傷治療提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

[關(guān)鍵詞]紅景天苷;高原地區(qū);凍傷;NO/ET;6-K-PGF1α/TXB2

[中圖分類號(hào)]R645? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號(hào)]1008-6455（2021）08-0099-04

Effect of Salidroside on the Release of Vasomotor Factor from Vascular Endothelial Cells of Rats with Frostbite at High Altitude

WANG Hong-jin，F(xiàn)ENG Yan-ping，ZHANG Ke-wei，WU Zhen，LI Yi

（Department of Burns and Plastic Surgery，Qinghai University Affiliated Hospital，Xining 810001，Qinghai，China）

Abstract： Objective? To study the effect of salidroside on the release of cytokines by vascular endothelial cells in rats with frostbite at high altitude. Methods? Randomly selected 90 healthy male SD rats， divided into 3 groups according to the random numerical esqueer， 30 rats in the simulated frostbite group， 30 rats in the frostbite group， 30 rats in the salidroside group. The salidroside group regularly gave abdominal injection of salidroside 20mg/kg， the simulated frostbite group and the frostbite group regularly gave the same volume of physiological saline injection， from the date of frostbite， each group was injected once a day until the end of the material. On the 1st， 3rd and 7th days after frostbite， the groups were observed and blood was collected from the abdominal aorta to determine the levels of NO， ET， TXB2， 6-K-PGF1α in the plasma. Results? After the injury 7d frozen area of the wound surface observation， the frostbite group foot tissue swelling was obvious， the far end of each toe appears dry， near and far end of the black dry necrotasia， part of the necrotic tissue off， no seepage， the salidroside group frozen area foot tissue and the near end of the toe swelling obvious， only the far end of the black dry necrotasia， non-necrotic tissue shedding， oozing less. Compared with the simulated frostbite group， the NO level in the frostbite group showed a change of first decreasing， then increasing and then decreasing， and it was the highest at 3d after injury， and there was no statistically significant difference between each group at 7d （P>0.05）. Compared with the frostbite group， NO levels in the salidroside group were significantly increased on 1d and 3d， the differences were statistically significant （P<0.05）. Compared with the simulated frostbite group， ET levels in the frostbite group decreased first and then increased （P<0.05）. Compared with the frostbite group， ET level in the salidroside group was lower at each phase point than that in the frostbite group （P<0.05）. Compared with the frostbite group， the differences of NO/ET in the salidroside group on 1d and 3d were statistically significant （P<0.05）. Compared with the simulated frostbite group， the 6-K-PGF1α level in the frostbite group increased first， then decreased and then increased （P<0.05）. Compared with the frostbite group， the level of 6-K-PGF1α in the salidroside group was significantly increased at each phase point （P<0.05）. Compared with the simulated frostbite group， TXB2 level in the frostbite group increased first and then decreased （P<0.05）. Compared with the frostbite group， TXB2 level of the salidroside group was lower than that of the frostbite group at all time points （P<0.05）. Compared with the frostbite group， the ratio of 6-K-PGF1α/TXB2 in the salidroside group was higher than that in the frostbite group at each phase point （P<0.05）. Conclusion? Salidroside has a protective effect on frozen tissue， and is related to regulating the balance between NO/ET and 6-K-PGF1α/TXB2 in the blood of frostbite rats in the plateau area， providing experimental data for the application of salidroside? to treat frostbite.

Key words： salidroside; plateau area; frostbite; NO/ET; 6-K-PGF1α/TXB2

青藏高原特殊的地理環(huán)境和地貌特征造成了高原地區(qū)低氣壓、低溫、低氧、干燥、大風(fēng)、強(qiáng)日照輻射的環(huán)境特征，常有凍傷發(fā)生。凍傷患者由于冷凍因素的物理作用及凍融病理過程所引起的一系列生化改變，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及凝血系統(tǒng)的功能受到影響[1-3]。紅景天系景天科紅景天屬植物，在青海分布廣，蘊(yùn)藏量大，是青海省常用藏藥。目前紅景天苷在凍傷領(lǐng)域的相關(guān)研究鮮有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行紅景天苷對(duì)高原地區(qū)凍傷大鼠內(nèi)皮細(xì)胞釋放舒縮因子的影響。

1? 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：清潔級(jí)健康雄性成年SD大鼠90只（大鼠品系為SD大鼠），購自西安科奧生物科技有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK（陜）2018-001，體重（300±20）g，在恒溫（24±2）℃，恒濕（50±5）%條件下飼養(yǎng)兩周后送至澤庫縣（平均海拔3 500m）的實(shí)驗(yàn)點(diǎn)（海拔3 600m）適應(yīng)性飼養(yǎng)兩周，實(shí)驗(yàn)前24h禁食，4h禁飲。本研究經(jīng)過青海大學(xué)附屬醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)審批（AF-RHEC-0018-01）。

1.2 主要材料：Tecan Infinite F200/M200型多功能酶標(biāo)儀、紅景天苷、水合氯醛（索萊寶公司）、DC-2006低溫恒溫槽、低速自動(dòng)平衡離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠），NO、ET、TXB2、6-K-PGF1α酶聯(lián)免疫分析試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技有限公司）。

1.3 大鼠凍傷模型的構(gòu)建：將大鼠在海拔3 600m處實(shí)驗(yàn)場地適應(yīng)性飼養(yǎng)兩周后，按隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分組，用濃度為10%水合氯醛腹4ml/kg腔注射麻醉，起效后大鼠雙后肢給予脫毛處理形成裸露皮膚。將大鼠后肢浸入800ml水和400ml無水乙醇混合的-20℃的低溫恒溫槽內(nèi)，冷凍30s后取出，為Ⅲ度凍傷[1]，凍傷面積20%，凍傷大鼠造模完成[4]。Ⅲ度凍傷大鼠共60只，其中30只為凍傷組（腹腔注射生理鹽水），30只為紅景天苷組（腹腔注射紅景天苷）。30只大鼠雙下肢放入35℃生理鹽水中，浸泡30s后取出，為模擬凍傷組。凍傷大鼠分每籠5只飼養(yǎng)，避免互相撕咬造成損傷。實(shí)驗(yàn)過程中麻醉階段存在大鼠死亡情況，死亡2只，及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)充，后續(xù)給藥無死亡情況。

1.4 藥液的制備與給予：紅景天苷組腹腔注射紅景天苷劑量20mg/kg，于凍傷后2h注射一次，以后每日14：00注射一次，直到取材截止。模擬凍傷組和凍傷組大鼠腹腔注射等體積0.9%氯化鈉注射液，每日14：00注射一次，直到取材截止。

1.5 凍區(qū)創(chuàng)面情況觀察：各組在凍傷后第1天、第3天、第7天觀察凍區(qū)創(chuàng)面情況：滲出、水腫、結(jié)痂、壞死等。

1.6 NO、ET、TXB2、6-K-PGF1α水平測定：各組在凍傷后第1天、第3天、第7天取腹主動(dòng)脈采血，血液標(biāo)本室溫下靜置1h，3 000rmp，離心10min，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組取10只。血液經(jīng)離心取血清，分別按照一氧化氮（NO）、血漿內(nèi)皮素（ET）、血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1α（6-K-PGF1α）酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書操作，測定血清中NO、ET、TXB2、6-K-PGF1α水平。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x?±s）表示，血漿中各因子數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1 凍區(qū)創(chuàng)面情況觀察：傷后第1天、第3天、第7天模擬凍傷組凍區(qū)無紅腫，無滲出，無壞死;傷后第1天凍傷組與紅景天苷組凍區(qū)腳掌組織腫脹明顯，各趾遠(yuǎn)端腫脹不明顯，無滲出;傷后第3天凍傷組腳掌組織腫脹明顯，各趾遠(yuǎn)端腫脹不明顯，有少量滲出，紅景天苷組凍區(qū)足部組織和各趾遠(yuǎn)端腫脹明顯，滲出量較多;傷后第7天凍傷組足部組織腫脹明顯，各趾遠(yuǎn)端出現(xiàn)干癟，近端和遠(yuǎn)端呈黑色干性壞死，部分壞死組織脫落，無滲出，紅景天苷組凍區(qū)腳掌組織和各趾近端腫脹明顯，僅遠(yuǎn)端部分呈黑色干性壞死，無壞死組織脫落，滲出量少。見圖1。

2.2 NO、ET水平測定：與模擬凍傷組比較，凍傷組與紅景天苷組的NO水平呈先降低后升高再降低的變化，且在傷后第3天最高，第7天時(shí)各組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與凍傷組比較，紅景天苷組NO水平在第1天、第3天顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且第3天紅景天苷組NO水平最高。見表1。

與模擬凍傷組比較，凍傷組與紅景天苷組的ET水平都呈先降低后升高的變化，同時(shí)各時(shí)間點(diǎn)組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且在第7天最高。與凍傷組比較，紅景天苷組ET水平在各時(shí)間點(diǎn)均較凍傷組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

與模擬凍傷組比較，凍傷組與紅景天苷組的NO/ET比值呈先升高再降低的變化，且第3天最高，第7天時(shí)組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與凍傷組比較，紅景天苷組NO/ET在第1天、第3天差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且第3天紅景天苷組NO/ET比值最大。見表3。

2.3 6-K-PGF1α、TXB2水平測定：與模擬凍傷組比較，凍傷組與紅景天苷組的6-K-PGF1α水平呈先升高后降低再升高的變化，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與凍傷組比較，紅景天苷組6-K-PGF1α水平在各時(shí)間點(diǎn)顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

與模擬凍傷組比較，凍傷組與紅景天苷組的TXB2水平都呈先升高后降低的變化，同時(shí)各時(shí)間點(diǎn)組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與凍傷組比較，紅景天苷組TXB2水平在各時(shí)間點(diǎn)均低于凍傷組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表5。

凍傷組的6-K-PGF1α/TXB2比值在各時(shí)間點(diǎn)均低于模擬凍傷組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與凍傷組比較，紅景天苷組6-K-PGF1α/TXB2的比值在各時(shí)間點(diǎn)均高于凍傷組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表6。

3? 討論

凍傷導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能改變而使凝血系統(tǒng)功能改變，血栓形成，血管痙攣或狹窄，促使凍傷組織發(fā)生血液循環(huán)障礙，而這些改變最終造成組織破壞和細(xì)胞壞死。臨床上凍傷部位集中在肢體暴露部分，病情嚴(yán)重，情況特殊[5]。高海拔造成的凍傷具有低氧和低溫雙重打擊，治療較平原地區(qū)難度更大[1]。筆者單位收治的高原凍傷患者致殘率高，住院周期長，是臨床治療的難點(diǎn)。

血管內(nèi)皮細(xì)胞可分泌多種血管舒縮因子以調(diào)節(jié)血管正常的舒縮狀態(tài)，從而維持基礎(chǔ)張力的穩(wěn)定。NO是內(nèi)源性血管舒張因子的主要活性成分，ET是目前認(rèn)為收縮血管最強(qiáng)的因子，當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO減少時(shí)，又可進(jìn)一步促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞合成釋放ET增加，從而導(dǎo)致NO/ET比例失調(diào)，導(dǎo)致血管收縮功能障礙。TXB2、6-K-PGF1α是調(diào)節(jié)血管舒縮的重要因子，兩者比例失衡被認(rèn)為是導(dǎo)致機(jī)體高凝狀態(tài)形成關(guān)鍵原因。NO/ET、6-K-PGF1α/TXB2間的平衡被打破從而導(dǎo)致血栓形成和血管痙攣的發(fā)生[6-7]。

紅景天苷是紅景天的主要藥效成分，能促進(jìn)動(dòng)物體脂動(dòng)員和促進(jìn)膽固醇代謝，有效抑制二磷酸腺苷誘導(dǎo)的血小板聚集和抗體外血栓形成，紅景天苷還可通過擴(kuò)張阻力血管和容量血管，使動(dòng)脈血壓和左室舒張末壓下降，降低心臟的前后負(fù)荷，對(duì)心肌缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，同時(shí)，明顯降低心肌耗氧量，拮抗心律失常，這些對(duì)心血管有利的藥理作用使得紅景天有望成為抗心肌缺血的新藥之一。服用紅景天后偶有患者會(huì)出現(xiàn)過敏、胃腸道不適、頭痛以及惡心等，這些副作用一般都是比較溫和的，減量之后都能恢復(fù)正常[8-10]。

本研究顯示，紅景天苷組凍區(qū)組織存活較凍傷組多，表明紅景天苷對(duì)凍傷具有比較好的治療效果。凍傷組血清NO和ET水平與模擬凍傷組比較都呈現(xiàn)出先降低再升高，可能與凍傷后血管內(nèi)皮細(xì)胞代謝下降，導(dǎo)致NO和ET水平下降相關(guān)。紅景天苷組NO水平在第1天、第3天均高于凍傷組，提示紅景天苷可以通過增加凍傷大鼠血液中NO水平擴(kuò)張血管;與凍傷組比較，紅景天組ET水平在各時(shí)相點(diǎn)均較凍傷組低，提示紅景天苷可以降低凍傷大鼠血液中ET水平減輕血管收縮程度。進(jìn)一步分析NO/ET比值，紅景天苷組在第1天、第3天均大于凍傷組，證明紅景天苷可以通過調(diào)節(jié)NO/ET比值減輕凍傷大鼠血管收縮程度。與模擬凍傷組比較，凍傷組6-K-PGF1α呈先升高后降低再升高的變化，提示凍傷大鼠擴(kuò)張因素受到了影響。與凍傷組比較，紅景天苷組6-K-PGF1α水平在各時(shí)相點(diǎn)均升高，提示紅景天苷通過提高6-K-PGF1α水平促進(jìn)凍傷凍傷血管擴(kuò)張。凍傷組的TXB2水平呈先升高后降低的變化，提示凍傷后TXB2水平促血管收縮作用增強(qiáng)。紅景天苷組TXB2水平在各時(shí)相點(diǎn)均低于凍傷組，提示紅景天苷降低了凍傷大鼠血管收縮的因素。與凍傷組比較，紅景天苷組6-K-PGF1α/TXB2的比值在各時(shí)間點(diǎn)均高于凍傷組，再次證明了紅景天苷具有擴(kuò)張凍傷大鼠血管的作用。綜上，紅景天苷擴(kuò)張凍傷大鼠血管的作用效果是顯著的，對(duì)改善凍區(qū)組織血供有重要意義，從而起到減輕凍傷組織損傷的作用。

本次研究發(fā)現(xiàn)紅景天苷可以減輕高原地區(qū)凍傷大鼠凍傷組織損傷的作用，與其調(diào)節(jié)血液中的NO、ET、TXB2和6-K-PGF1α水平，進(jìn)而調(diào)控NO/ET、6-K-PGF1α/TXB2間的平衡影響血管的舒縮有關(guān)。為紅景天苷治療高原地區(qū)凍傷提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但其具體的機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究。

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[收稿日期]2020-10-23

本文引用格式：王洪瑾，馮艷萍，張科偉，等.紅景天苷對(duì)高原凍傷大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放舒縮因子的影響研究[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2021，30（8）：99-102.