白茅根炒炭前后多糖含量的變化研究

張麗宏

（山西藥科職業(yè)學院，山西太原 030020）

白茅根又名茅根、茅針、刀茅、地筋、白茅，是禾本科植物白茅Imperata cylindrica Beauv.var.Major （Nees）C.E.Hubb.的干燥根莖[1]。其在全國各地均有分布，但主要集中于華北地區(qū)。自古以來就被醫(yī)家所青睞，其用法在《神農本草經》《本草正義》《醫(yī)學衷中參西錄》等均有記載。白茅根性味甘、寒，能涼血止血、清肺胃熱、清熱利尿?？蓮V泛用于調理熱毒侵入所致的煩渴、嘔吐、熱淋痰多、尿血，以及小便功能障礙、腹部灼熱水腫、黃疸等；炒炭后，涼血作用減弱，止血作用增強，長于治療出血證。據相關文獻資料報道，白茅素、蘆竹素、羊齒醇等三萜類化合物，葡萄糖、蔗糖、淀粉等多糖類化合物為白茅根的主要有效成分，其中多糖類物質具有增強小鼠耐缺氧作用、增強免疫、降血脂等作用[2-3]。

目前，有關于白茅根的用藥歷史沿革、主要有效成分、提取工藝及質量標準、藥理作用、臨床使用情況等各個領域的研究都已經取得了一定的進展，但對其炮制前后化學成分含量的變化研究鮮有報道，尤其是有關多糖含量的變化，至今尚未見國內外相關報道。有文獻報道，糖類物質經炭化后可以增加止血效果[4]。因此選取白茅根中的有效成分多糖類化合物作為研究指標，測定了白茅根炒炭前后多糖類物質含量的變化，探討炒炭工藝是否會使多糖類物質發(fā)生轉化，推測多糖的炭化可能是增加茅根炭止血功效的重要作用機制，為進一步明確茅根炭的止血物質基礎提供研究基礎。

1 儀器與材料

1.1 主要儀器

FA1204N萬分之一電子天平（上海奔普儀器科技有限公司），UV-2600i型紫外分光光度計（日本島津Shimadzu公司），高速中藥粉碎機（400B型，200g，山東精誠醫(yī)藥裝備制造有限公司），中國藥典專用篩（1～9號篩，浙江省上虞市華康化驗儀器廠），HH-S型精密恒溫水浴鍋（中國江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠），DZF -6021型真空干燥箱（上海精密實驗設備有限公司）。

1.2 主要材料

白茅根藥材（批號：190910）產于河北省石家莊，購買于山西省太原市同仁堂藥店，并經山西藥科職業(yè)學院中藥鑒定教研室鑒定為白茅根的干燥根莖。茅根炭制品為同一批藥材按照2020版《中國藥典》中的炒炭法，于本校炮制教研室加工制得。將以上藥物粉碎，過4號篩，混合均勻，放入干燥箱內于50 ℃下干燥24h，取出后放入干燥器內，備用。

葡萄糖對照品購自中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司（分析純，批號200613），其余所用濃硫酸、無水乙醇、丙酮、乙醚、苯酚也均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結果

2.1 炮制前后粗多糖成分的制備

取經過前置處理的白茅根、茅根炭粉末各10g，分別加入10倍量體積的95%乙醇，回流2次，每次2h，濾出藥渣自然揮干至無醇味，60℃恒溫干燥后轉移至燒瓶內，加入10倍量體積的蒸餾水回流提取2h，趁熱過濾，重復兩次，合并兩次的濾液，濃縮至一定的體積。緩慢加入95%乙醇至醇濃度為80%，靜置過夜后。抽濾，濾渣依次經無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，50℃真空干燥即得粗多糖，稱重得白茅根粗多糖為1.77g，茅根炭粗多糖0.87g。白茅根與茅根炭圖片見圖1。

圖1 白茅根與茅根炭示意圖

2.2 供試品溶液制備

精密稱取白茅根、茅根炭的粗多糖各5mg，加蒸餾水溶解，稀釋定容于50mL量瓶中，搖勻，備用。

2.3 對照品溶液制備

精密稱取經105℃恒溫干燥至恒重的無水葡萄糖50mg，加蒸餾水溶解，定容于50mL容量瓶中，搖勻，備用。

2.4 苯酚-濃硫酸比色試劑的制備

苯酚溶液：取苯酚100g，加碳酸氫鈉0.05g和鋁片0.1g，蒸餾制取，收集于182℃的餾出成分。稱取此餾分5g，加入95mL蒸餾水，置于棕色試劑瓶內，得5%苯酚試液。硫酸為濃硫酸試劑。

2.5 方法學考察

2.5.1 波長選擇

采用苯酚-硫酸比色法，精密吸取對照品溶液、供試品溶液、蒸餾水各2mL，分別加入5%苯酚溶液1mL，然后快速垂直貼壁加入濃硫酸7mL，慢速振蕩均勻。在于60℃水浴中加熱30min，然后放至冰水中冷卻至室溫，取適量至比色皿中，按照紫外-可見分光光度法方法測定，在波長200～600nm進行掃描，結果表明，葡萄糖對照品溶液、供試品溶液在484nm處有最大吸收，且蒸餾水溶液（溶解溶液）在該波長下無干擾，因此，確定檢測波長為484nm。

2.5.2 標準曲線繪制

準確吸取對照品溶液0、1、2、3、4、5、6mL轉移至50mL容量中，加蒸餾水定容，得各濃度對照品溶液。精密移取上述溶液各2mL，按照2.5.1項中苯酚-硫酸比色法流程操作，于484nm波長處測定吸光度值。以對照品濃度X（mg/mL）為橫坐標，以吸光度Y為終坐標繪制標準曲線。建立的標準曲線的回歸方程為：Y=8.9853X+0.0637，R=0.9996（n=6），結果表在線性范圍為：0.0212～0.1232mg/mL，數據良好。

2.5.3 精密度實驗

精密吸取白茅根粗多糖供試液，按照2.5.1方法，連續(xù)6次測定該樣品的吸光度，結果RSD=0.12%，說明儀器精密度良好。

2.5.4 穩(wěn)定性實驗

精密稱取白茅根粗多糖5mg，加蒸餾水溶解，定容于50mL容量瓶中，搖勻。按照2.5.1方法，分別在0、10、20、30、60、90、120min時測定吸光度，結果RSD=0.26%，說明樣品溶液在2h內具有很好的穩(wěn)定性。

2.5.5 重復性實驗

精密稱取白茅根粗多糖5mg，各5份，加入蒸餾水溶解，并定容于50mL容量瓶中，搖勻。按照。按照2.5.1方法，測定吸光度，得RSD=2.19%，表明該方法重復性良好。

2.5.6 加樣回收率實驗

取白茅根粗多糖6份，每份5mg，精密稱定，分別精密加入葡萄糖如表1所示，加蒸餾水溶解，稀釋定容到50mL容量瓶中，搖勻。按2.5.1方法測定吸光度，計算回收率，結果見 表1。

表1 加樣回收率實驗結果表（n=6）

2.5.7 含量測定

準確吸取供試液各2mL，按照2.5.1方法操作，并于484nm出測定吸光度，得白茅根多糖含量為50.2%，得率為35.3%，茅根炭的多糖含量為43.6%，得率為19.9%，得率較白茅根多糖得率下降43.6%，結果見表2。

表2 樣品中多糖含量測定（n=3）

3 結論

在實驗過程中采用苯酚-濃硫酸比色法測定，分別考察了文獻報道和《中國藥典》采用的7% 與5% 苯酚溶液[4]，結果顯示7%的苯酚會降低樣品紫外吸光值，因此采用的5%苯酚濃度。

白茅根的多糖含量與地域和采摘季節(jié)密切相關[5]，本實驗所用白茅根生產于河北，與已有的文獻報道含量基本一致[6]。本實驗的多糖含量測定結果為白茅根大于茅根炭。原因可能是在炒碳炮制過程中，由于受熱溫度高，藥材部分炭化，多糖結構破壞劇烈，而造成含量顯著降低。另外，也有文獻報道[7]，白茅根炒碳后，5-HMF含量也有顯著地增加，已知5-HMF主要有已糖經加熱分解而得。白茅根碳炒后多糖含量變化，尤其是多糖含量的變化可能會增強凝血機制。通過本實驗的研究為可為制定白茅根炮制工藝及研究白茅根炮制機理提供新的思路與研究基礎。