高效液相色譜法測定那如三味丸中的沒食子酸的含量

格根塔娜，成志平，李 強，郝美玲

(1.包頭市藥物警戒中心，內(nèi)蒙古 包頭 014030；2.包頭市檢驗檢測中心，內(nèi)蒙古 包頭 014060；3.內(nèi)蒙古自治區(qū)藥品檢驗研究院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

那如三味丸為蒙藥制劑經(jīng)驗方，是由訶子、蓽茇、制草烏三味中藥組成。具有消“粘”，除“協(xié)日烏素”，祛風(fēng)，止痛，散寒。用于風(fēng)濕，關(guān)節(jié)疼痛，腰腿冷痛，牙痛，白喉等癥的作用。其中訶子是三味藥中的主要藥味之一，具有澀腸止瀉、斂肺止咳、降火利咽的功效[1]。據(jù)文獻(xiàn)[2]報道，訶子中的主要化學(xué)成分為鞣質(zhì)類、酚酸類、三萜類黃酮類等，酚酸類主要成分為沒食子酸。參照《中國藥典》2015年版一部“健民咽喉片”項下的含量測定方法，做了沒食子酸含量測定，經(jīng)分析方法驗證，表明該方法重現(xiàn)性好，專屬性強。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-10ATvp泵，SPD-10Avp型檢測器，島津SIL-10AF進(jìn)樣器，CLASS-VP工作站，sartorious BP211D型電子天平，METTLER TOLEDO AB104型電子天平，惠普6010紫外分光光度儀。

1.2 試劑與試藥

沒食子酸對照品(批號110831-200803，中國食品藥品檢定研究院)樣品收集了內(nèi)蒙古蒙藥股份有限公司(批號1709027、1703087)、烏蘭浩特中蒙藥制藥有限公司(批號1608029、1608030)、阜新蒙藥有限責(zé)任公司(批號20170627、20171006)和內(nèi)蒙古庫倫蒙藥公司(批號1608411、1608412)四個廠家共8批次，模擬樣品為自制。甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

采用Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，以甲醇-0.1%磷酸(2∶98)為流動相條件摸索。流速1.0mL/min，柱溫 30℃，進(jìn)樣量10μL，理論塔板數(shù)按沒食子酸峰計算應(yīng)不低于2000。

2.2 溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備

取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL含70μg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備

取本品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理(功率300W頻率40kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾取續(xù)濾液，即得。

2.3檢測波長的選擇

取沒食子酸對照品溶液，置紫外分光光度計上，在250nm～300nm波長范圍掃描。結(jié)果沒食子酸在273nm處有最大吸收，故選擇273nm作為檢測波長。

2.4線性關(guān)系考察

取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL含700μg的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(實際為：695.75μg/mL)。分別精密吸取上述對照品儲備溶液0.10mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL至10mL容量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10μL注入液相色譜儀測定，以峰面積對濃度進(jìn)行回歸分析，結(jié)果沒食子酸在0.069 6～1.739 4μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=32 166X+14 786，γ2=0.999 9

2.5 穩(wěn)定性試驗

取同一份供試品溶液，分別在0h、2h、4h、8h、12h、24h進(jìn)行測定，沒食子酸在24小時內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變，RSD為0.58%(n=6)。

2.6 重復(fù)性試驗

取同一份供試品6份，按供試品溶液制備方法處理并測定沒食子酸含量，6份供試品沒食子酸平均含量為7.314mg/g，RSD為0.46%，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 精密度

取沒食子酸對照品(濃度為0.092 767 mg/mL)，連續(xù)進(jìn)樣6次，其RSD為1.2%(n=6),表明方法的精密度良好。

2.8 準(zhǔn)確度試驗

取已測定含量的同一供試品(含量7.314mg/g)9份，每份約0.25g，精密稱定，分別置9個具塞錐形瓶中，分成三組，每組三份。每組分別精密加入濃度為4.552mg/mL(實際為：25.26mg×0.901/5mL =4.552μg/mL)的沒食子酸對照品溶液各0.2mL、0.4mL、0.6mL(約相當(dāng)于供試品含有量的50%、100%、150%)及50%甲醇各50mL，按供試品溶液制備方法處理并測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 沒食子酸加樣回收試驗結(jié)果

2.9 耐用性試驗

換不同廠家、不同型號的色譜柱，取同一份供試品2份，按供試品溶液制備方法處理，取供試品溶液和對照品溶液分別進(jìn)樣，耐用性較為理想。結(jié)果見表2。

表2 不同色譜柱的耐用性試驗

3 樣品含量測定

按供試品溶液制備方法處理測定含量，8批樣品和2批模擬樣品的測定結(jié)果見表3。

表3 樣品中沒食子酸的含量測定結(jié)果

綜上，結(jié)果表明本法簡便可靠、專屬性強、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可做為蒙藥成方制劑那如三味丸中沒食子酸含量的分析方法，同時，8批樣品和2批模擬樣品中沒食子酸含量測定結(jié)果為相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)中指標(biāo)成分的選擇及限度制定提供了參考。