云南貫眾提取物急性毒性試驗

楊美蘭 張愛平 呂瓊芬

摘要：為研究云南貫眾提取物的急性毒性作用，用云南貫眾提取物作為供試藥對昆明系小白鼠進行一次性灌胃給藥，測定藥物的半數(shù)致死量（LD50），用Wistar大鼠進行云南貫眾提取物的蓄積毒性試驗和亞慢性毒性試驗。結果表明云南貫眾提取物是一種低毒、可靠且可在安全用量范圍內(nèi)使用的中藥材。

關鍵詞：云南貫眾;提取物;急性毒性

中圖分類號：S853.7文獻標識碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2021.24.005

Acute Toxicity Test of Guanzhong Extract

YANG Meilan1，ZHANG Aiping2，LV Qiongfang3

（l.Qujing Veterinary Drug and Feed Supervision Institute，Qujing Yunnan 655000，China;2.Qujing Zhanyi District Animal husbandry and Veterinary Bureau，Qujing Yunnan 655000，China;3. Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Huize County，Qujing City，Qujing Yunnan 655000，China）

Abstract：In order to study the acute toxicity of Yunnan Guanzhong extract，a single gavage dose of Yunnan Guanzhong extract was administered to Kunming strain mice as the test drug，and the LD50 was determined. The results showed that the extract of Yunnan Guanzhong is a low-toxic，reliable and safe herb for use within the dosage range.

Keywords：Yunnan Guanzhong，extract，acute toxicity

0引言

有研究利用云南貫眾經(jīng)甲醇分離提取得到的化合物山奈酚-3-a-L-（4-O-乙?；┦罄钐腔?7-a-L-鼠李糖甘作為試驗用藥驅(qū)殺豬蛔蟲，用藥前后試驗動物的生理生化指標沒有明顯的差異，說明使用云南貫眾后沒有對動物機體的肝腎功能產(chǎn)生損傷。為更深入了解云南貫眾的毒性，特進行云南貫眾的急性毒性試驗[1-3]。

1材料與方法

1.1材料

（1）供試藥物。云南貫眾提取物：由中國科學院昆明植物研究所提供。

（2）供試動物。昆明系小白鼠（體重30±10 g）和6～7周Wistar大鼠：購自昆明醫(yī)學院實驗動物中心。

1.2方法

（1）藥物分離提取。云南貫眾用95%乙醇超聲振蕩提取，減壓回收得到總浸膏狀物后用環(huán)己烷、乙酸乙酯萃取，萃取液分別減壓回收溶劑至干，得到環(huán)己烷部位，乙酸乙酯部位，經(jīng)反復硅膠柱層析，分別用環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇、環(huán)己烷-三氯甲烷系統(tǒng)梯度洗脫，薄層檢測，合并相同組分。最后從乙酸乙酯部位得到一類黃酮類化合物，用化學方法和波普法鑒定該化合物為山奈素-3-a-L-鼠李糖基-7-a-L-鼠李糖甘。

（2）云南貫眾提取物半數(shù)致死量的測定。預試驗得出貫眾提取物的試驗小鼠全活和全死的劑量范圍在5 000～12 000 mg/kg。急性毒性試驗采用一次性灌胃給藥（給藥前禁食12h），灌胃給藥最小劑量為12 063 mg/kg，劑量間組距為1：1.45。取小鼠50只，雌雄各半，隨機分成5組。第1組至第5組分別灌胃給藥12 063 mg/kg，17 491 mg/kg，25 362 mg/kg，36 775 mg/kg，53 324 mg/kg，給藥后前6 h每小時觀察一次小鼠的反應情況，之后每天觀察1次，連續(xù)觀察7 d，記錄小白鼠毒性反應情況和死亡動物分布情況，記錄小鼠死亡數(shù)。及時解剖死亡小鼠，記錄病變情況，并計算其半數(shù)致死量（LD50）值和LD50的95%可信區(qū)間。

（3）云南貫眾提取物蓄積毒性試驗。取Wistar大鼠40只，體重120～150 g/只，雌雄各半，隨機分為試驗組和對照組，每組10只，按劑量遞增法給藥，第1天給予0.1 LD50劑量，每4天遞增1.5倍，試驗期為20 d，觀察動物情況，計算藥物蓄積系數(shù)K。

（4）亞慢性毒性試驗。取Wistar大白鼠40只，體重120～150 g/只，按照雌雄各半隨機分為4組，每組10只。I組為空白對照組。II、III、IV組為試驗組，試驗組分別以1/20 LD50、1/10 LD50和1/5 LD50的劑量灌服，連續(xù)給藥30 d。空白組給予相同劑量的蒸餾水。每天觀察、記錄動物的精神狀態(tài)、進食活動及兩便情況。每周稱重1次。

1.3半數(shù)致死量（LD50）計算

XK為最大質(zhì)量濃度的對數(shù)值;d為相鄰兩組的質(zhì)量濃度對數(shù)差;n為組數(shù);∑Pi為死亡率之和。

2結果

2.1試驗小鼠中毒癥狀

小鼠灌胃給藥后，高劑量組小鼠在給藥2 h后出現(xiàn)扎堆、不食、驚慌、呼吸困難等癥狀，5 h后陸續(xù)有小鼠死亡，在觀察期內(nèi)最低劑量組小鼠未見死亡，其余各劑量組都有部分小鼠死亡，最高劑量組在試驗期內(nèi)全部死亡。剖檢死亡小鼠偶見心肺腫大，其余內(nèi)臟器官未見肉眼可見的明顯病理變化，其余存活小鼠不適癥狀逐漸減輕并恢復正常。

2.2急性毒性試驗

通過小鼠灌胃試驗，計算出云南貫眾提取物的半數(shù)致死量（LD50），結果見表1。根據(jù)公式，計算得出云南貫眾提取物的半數(shù)致死量（LD50）為22 617 mg/kg，LD50的95%可信區(qū)間為18 514 ～26 720 mg/kg。

2.3云南貫眾提取物蓄積毒性試驗

給藥期間，試驗動物的采食量、活動量、精神狀態(tài)均無明顯異常，至試驗期結束，體重有明顯增長。整個試驗期未觀察到動物有較明顯且異常的表現(xiàn)，也未表現(xiàn)出明顯的中毒癥狀。至20 d試驗結束，試驗動物無死亡，動物給藥總劑量已達LD50的5.1倍，即藥物蓄積系數(shù)K大于5，表明云南貫眾提取物在動物體內(nèi)無明顯蓄積毒性作用。

2.4云南貫眾亞慢性毒性試驗

各組給藥試驗動物行為活動均正常，試驗（II、III）組與對照組（I）相比體重增長正常，平均增重無明顯差異（P>0.05），而試驗IV組與對照組相比平均體重增長存在明顯差異（P<0.05）。各試驗組大鼠增重情況見表2。

3討論

（1）試驗用云南貫眾提取物為試驗用藥，進行小鼠急性毒性試驗，最終云南貫眾提取物的半數(shù)致死量（LD50）為22 617 mg/kg，LD50的95%可信區(qū)間為18 514～26 720 mg/kg。

（2）云南貫眾提取物蓄積毒性試驗表明，在一定的給藥范圍內(nèi)云南貫眾未表現(xiàn)出明顯的毒性。在亞慢性毒性試驗中，大劑量使用云南貫眾提取物雖然試驗動物沒有明顯的行為活動異常，但是試驗大鼠平均增重明顯低于不用藥組，解剖試驗大鼠發(fā)現(xiàn)部分大鼠心臟和肺臟出現(xiàn)腫大，表明大劑量使用云南貫眾對部分臟器有損傷。

（3）近年，綠色生態(tài)養(yǎng)殖技術得到了較大發(fā)展，無論是中草藥飼料添加劑還是作為臨床用藥治療動物疾病都被大力關注和發(fā)展。云南貫眾作為藥用植物具有低毒、無副作用、無污染等優(yōu)點，可深入研究加以開發(fā)利用。

4結束語

本試驗利用具有驅(qū)蟲活性的云南貫眾粗提物作為供試藥物，研究云南貫眾粗提物的急性毒性，以弄清云南貫眾的藥物毒性。通過小鼠急性毒性試驗研究得到了該藥物的半數(shù)致死量，經(jīng)過藥物蓄積毒性試驗和亞慢性毒性試驗表明在安全的用藥范圍內(nèi)試驗動物沒有出現(xiàn)明顯的藥物中毒癥狀。由于試驗條件有限，未能進行試驗動物機體組織的藥物殘留檢測及用藥后對試驗動物的生理生化指標的檢測，對徹底弄清云南貫眾的藥物毒性留下了遺憾，同時也給后續(xù)的研究提供了思路。在當前國家禁用抗生素的大背景下，研究、開發(fā)、利用高效、低毒、無殘留、無污染的中草藥飼料添加劑將會得到大力發(fā)展，可加大對貫眾的研究利用。

參考文獻

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