不同等級亳白芍藥材及飲片的質(zhì)量評價研究

李 芳 黃衛(wèi)鋒 汪海斌 周建理 黃艷梅 王德勝

1.國家中藥材產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（安徽）儀器分析室，安徽亳州 236800；2.安徽省亳州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所質(zhì)量技術部，安徽亳州 236800；3.安徽德昌藥業(yè)股份有限公司質(zhì)量部，安徽亳州 236800

白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactifloraPall.的干燥根[1]。白芍歷來以安徽亳州、浙江杭州、四川中江為三大道地主產(chǎn)區(qū)，習稱亳白芍、杭白芍、川白芍[2-5]。其中亳白芍種植產(chǎn)量大，且在栽培、采收、加工等有多方面研究，所以在臨床上廣泛使用[6-10]。將中藥材及飲片分規(guī)格等級是中藥材市場長期存在的現(xiàn)象[11-15]，根據(jù)藥材與飲片的外觀性狀、規(guī)格，可將亳白芍按4 個等級（1～4 級）進行分類。本研究采用高效液相色譜法對4 個等級的亳白芍藥材與飲片進行含量測定，結(jié)合理化指標與薄層鑒別對其進行質(zhì)量評價，對合理規(guī)范亳白芍藥材及飲片的生產(chǎn)與市場流通具有重要意義。

1 儀器與試藥

Waters e2695 高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；ATS 4 薄層色譜儀（瑞士CAMAG 公司）。所購買的樣品經(jīng)國家中藥材產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（安徽）周建理教授鑒定均為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的根。芍藥苷（批號：110736-201943，中國食品藥品檢定研究院）；硅膠G 板（青島海洋化工有限公司）；甲醇和乙腈均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 亳白芍藥材及飲片不同等級的劃分

參照文獻[2,16-17]要求并結(jié)合市場情況，將亳白芍藥材按中部直徑劃分不同等級，一級品＞1.5 cm，二級品1.2～1.5 cm，三級品0.8～＜1.2 cm，四級品＜0.8 cm。將亳白芍飲片按片徑劃分不同等級，一級品＞1.8 cm，二級品1.4～1.8 cm，三級品1.0～＜1.4 cm，四級品＜1.0 cm。

2.2 亳白芍藥材及飲片理化指標分析

水分、總灰分、水溶性浸出物、二氧化硫殘留量按照《中華人民共和國藥典》（2020 年版）一部和四部[1,18]規(guī)定進行測定?！吨腥A人民共和國藥典》（2020 年版）一部[1]中規(guī)定白芍的水分不得過14.0%、總灰分不得過4.0%、二氧化硫殘留量不得過400 mg/kg、浸出物不得少于22.0%、藥材中芍藥苷含量不少于1.6%、飲片中芍藥苷含量不少于1.2%。結(jié)果表明，不同等級亳白芍藥材及飲片的理化指標均符合規(guī)定。見表1～2。

表1 亳白芍藥材檢測結(jié)果

表2 亳白芍飲片檢測結(jié)果

2.3 不同等級亳白芍藥材的薄層色譜鑒別

按照《中華人民共和國藥典》（2020 年版）一部[1]要求，取本品粉末0.5 g，加乙醇10 ml，振搖5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 ml 使溶解，為供試品溶液。取芍藥苷對照品，加乙醇制成1 mg/ml 的溶液，為對照品溶液。按照《中華人民共和國藥典》（2020 年版）薄層色譜法（四部通則0502）[18]，吸取上述兩種溶液各10 μl，點于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果顯示，樣品與對照品相應位置上顯相同顏色斑點。見圖1。

圖1 不同等級的亳白芍藥材薄層色譜圖

2.4 不同等級的亳白芍飲片的薄層色譜鑒別

處理方法同“2.3”項下。結(jié)果顯示，樣品與對照品相對應位置上顯相同顏色斑點。見圖2。

圖2 不同等級的亳白芍飲片薄層色譜圖

2.5 亳白芍中芍藥苷的含量測定

2.5.1 色譜條件 色譜柱：Waters XBridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：230 nm，柱溫：30℃；進樣量：10 μl。

2.5.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品，加甲醇溶解制成31.19 μg/ml 的對照品溶液，濾過，即得。

2.5.3 供試品溶液的制備 稱取白芍中粉約0.1 g，精密稱定，置50 ml 量瓶中，加稀乙醇35 ml，超聲處理30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.6 方法學考察

2.6.1 標準曲線與線性范圍考察 精密稱取芍藥苷對照品，置于量瓶中，用甲醇溶解定容，并分別逐級稀釋制備成10、20、50、100、200 μg/ml 的對照品溶液，濾過進樣，測定峰面積。以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，得線性回歸方程：Y=9859.7X+52660，r=0.9998，表明其在10～200 μg/ml 濃度范圍內(nèi)線性關系良好。

2.6.2 精密度試驗 取“2.5.2”項下的對照品溶液，連續(xù)進樣6 次，測定峰面積，計算相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）值為0.23%，表明精密度良好。

2.6.3 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，制備方法同“2.5.3”項下，分別于0、2、6、10、12、24 h 進樣，測定峰面積，計算RSD 值為0.74%，表明該溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.4 重復性試驗 精密稱取樣品6 份，按照“2.5.3”中方法制備供試品溶液，測定峰面積，計算RSD 值為0.93%，表明該方法重復性良好。

2.6.5 加樣回收率試驗 稱取已知含量的同一批樣品6 份，分別按50%、100%、150%的3 個水平精密加入芍藥苷。按“2.5.3”中方法制備供試品溶液，測定峰面積，計算平均加樣回收率為100.64%，平均RSD 值為1.07%。見表3。表明該方法回收率較好。

表3 加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

2.7 不同等級亳白芍藥材的含量測定

按照《中華人民共和國藥典》（2020 年版）一部[1]白芍含量測定項下方法，對不同等級亳白芍藥材進行含量測定。按照“2.5.1”中色譜條件測定，結(jié)果表明亳白芍藥材的芍藥苷含量有一定差異，其中二級品含量最高，一級品因存在嚴重硫熏現(xiàn)象，導致含量降低。見表1。

2.8 不同等級亳白芍飲片的含量測定

按照《中華人民共和國藥典》（2020 年版）一部[1]白芍含量測定項下方法，對不同等級亳白芍藥材進行含量測定。按照“2.5.1”中色譜條件測定，結(jié)果表明不同等級亳白芍飲片的芍藥苷含量差異不大，說明不同等級亳白芍飲片可能是同一等級亳白芍藥材的不同部位加工而來，導致含量變化小。見表2。

3 討論

本研究對亳白芍的外觀性狀進行數(shù)字量化后劃分了分級并進行質(zhì)量評價。不同等級亳白芍藥材浸出物與芍藥苷含量存在一定差異，而不同等級亳白芍飲片浸出物有一定差異，與芍藥苷含量沒有直接相關性，這與相關文獻[19-22]的內(nèi)容是一致?？赡芘c同一等級的亳白芍藥材加工后分成不同等級的飲片有關。

本研究中一級品亳白芍藥材二氧化硫殘留量較高，提示市場上存在硫熏現(xiàn)象。有文獻[23-25]提到亳白芍主成分的主要影響因素是栽培品種和采收年限，栽培品種和采收年限的不同導致亳白芍在生長過程中淀粉等的積累不同，導致含量有所差異。目前存在不同栽培品種混種的現(xiàn)象，而且有種植2～3 年就采收藥材加工后進入市場。因此，栽培品種、采收年限和硫磺熏制等問題也會造成亳白芍的等級與樣品中有效成分含量存在差異。

本研究亳白芍藥材及飲片的樣本量較少，而亳白芍化學成分復雜，因此不免存在一定的局限性。今后應從多指標成分含量測定、體內(nèi)藥效實驗等多方面結(jié)合起來進一步研究。