孕婦外周血胎兒游離DNA產(chǎn)前檢測臨床探討

慕曉瓊 王光彥 胡玉

【摘要】目的：探討孕婦外周血胎兒游離DNA產(chǎn)前檢測（無創(chuàng)DNA）的臨床應(yīng)用。方法：回顧分析2015年6月至2018年4月本院收治的2603例行無創(chuàng)DNA檢測孕婦（全部是單胎）為研究對象。結(jié)合孕婦年齡、血清檢查結(jié)果、超聲篩查信息等將孕婦分為五組。所有孕婦均進行無創(chuàng)DNA檢測，結(jié)果不正常者需要實施羊水或臍血穿刺，并進行胎兒染色體核型分析，檢查結(jié)果是（-）者需要實施電訪了解新生兒分娩后的具體狀況。結(jié)果：所有孕婦都接受無創(chuàng)DNA檢測，發(fā)現(xiàn)染色體異常兒是26例，其中：唐氏綜合征、愛德華綜合征、帕陶氏綜合征、性染色體及其它異常者分別是4、2、0、11、9例。對于這26例孕婦而言，共有15例孕婦進行了侵入性產(chǎn)前診斷。2例確診為47，XN，+21；1例為47，XN，+18；1例為47，XXY；1例為47，XXX；1例為45，X；1例為45，X/46，Xi（Y）；2例為其他染色體異常，其余6例為46，XN。無創(chuàng)結(jié)果陰性者電訪并沒有出現(xiàn)染色體異常兒。結(jié)論：孕婦外周血胎兒游離DNA產(chǎn)前檢測針對胎兒染色體異常的篩查率非常高，具備較強的靈敏性與特異性，作為胎兒染色體非整倍體疾病的產(chǎn)前無創(chuàng)輔助檢查具有很好的推廣價值。但仍存在一定的假陽性，且對性染色體異常及染色體微缺失/微重復(fù)檢出的準(zhǔn)確性較低，需結(jié)合其他產(chǎn)前診斷方法做出正確診斷。

【關(guān)鍵詞】無創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測；產(chǎn)前診斷；染色體非整倍體；21-三體綜合征

[中圖分類號]R714.5 [文獻標(biāo)識碼]A [文章編號]2096-5249（2021）09-0237-03

Clinical application of Prenatal Detection of Fetal Free DNA in Peripheral Blood of Pregnant Women

MU Xiao-qiong， WANG Guang-yan， HU Yu （Medical Laboratory Department， Peoples Hospital of Chuxiong Yi Autonomous Prefecture， Chuxiong Yunnan 675000， China）

[Abstract] Objective： To explore the clinical application of prenatal detection of fetal free DNA in peripheral blood of pregnant women（non-invasive DNA）. Methods： 2603 pregnant women （all singletons） with noninvasive DNA detection in our hospital from June 2015 to April 2018 were retrospectively analyzed. The pregnant women were divided into 5 groups according to their age， serum examination results and ultrasound screening information. All pregnant women underwent non-invasive DNA testing. If the results were abnormal， amniotic fluid or cord blood puncture should be carried out， and fetal chromosome karyotype analysis should be carried out. If the examination result is （-）， telephone interview should be carried out to understand the specific situation of newborns after delivery. Results： All pregnant women underwent non-invasive DNA testing， and 26 cases of chromosomal abnormalities were found， including 4， 2， 0， 11 and 9 cases of Downs syndrome， Edwards syndrome， padaos syndrome， sex chromosome and other abnormalities. For these 26 pregnant women， a total of 15 pregnant women had invasive prenatal diagnosis. 2 cases were diagnosed as 47， xn， + 21； 1 case was 47， xn， + 18； 1 case was 47， XXY； 1 case was 47， XXX； 1 case was 45， X； 1 case was 45， X / 46， Xi （y）； 2 cases were other chromosome abnormalities， the remaining 6 cases were 46， xn. No chromosomal abnormalities were found in those with negative results. Conclusion： Prenatal detection of fetal free DNA in peripheral blood of pregnant women has a high screening rate for fetal chromosomal abnormalities， with strong sensitivity and specificity. As a non-invasive prenatal auxiliary examination of fetal chromosomal aneuploidy diseases， it has a good promotion value. However， there are still some false positive， and the accuracy of re detection of sex chromosome abnormality and chromosome microdeletion / duplication is low， so it is necessary to make a correct diagnosis combined with other prenatal diagnosis methods.

[Key words] DNA non-invasive prenatal detection； Prenatal diagnosis； Chromosomal aneuploidy； Trisomy 21

中國是出生殘障胎兒的高發(fā)國家之一，其概率一般是5.7 %。胎兒染色體異常是造成胎兒分娩異常的重要原因之一。唐氏綜合征、愛德華綜合征、帕陶氏綜合征、性染色體異常等屬于現(xiàn)階段發(fā)病率比較高的基因病，約占新生兒所有染色體異常的65%～80%[1]。胎兒染色體疾病主要通過二級預(yù)防手段進行干預(yù)。現(xiàn)今最常見的是妊娠中期三聯(lián)血清學(xué)檢測技術(shù)，不過因為其作用原理的局限性，檢測結(jié)果不夠精準(zhǔn)，假（+）率、假（-）率的概率非常高[2]，侵入性產(chǎn)前篩查技術(shù)一般有三種：絨毛穿刺、羊水穿刺、臍帶血穿刺等，盡管這些已經(jīng)被廣大醫(yī)護稱作為篩查染色體病的重要方法[3]，不過因為篩查流程繁瑣，耗費時間長，甚至?xí)?dǎo)致流產(chǎn)風(fēng)險加大，造成孕婦及其家屬面臨巨大的思想壓力，臨床配合性不強。胎兒染色體異常的無創(chuàng)產(chǎn)前篩查（英文簡稱是NIPT），也可以將其簡稱為“無創(chuàng)DNA技術(shù)”，是利用母體外周血中少量的胎兒游離DNA進行檢測，對唐氏綜合征檢出率達到99 %[4]，且有無創(chuàng)的優(yōu)點，作為一種新的近似診斷水平[5]的篩查胎兒染色體非整倍體的技術(shù)，已被越來越廣泛的應(yīng)用于臨床[6-7]。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性納入2015年6月至2018年4月來我院進行無創(chuàng)DNA檢測的孕婦2 603例，均為單胎，孕周12～24周，孕婦及家屬簽署知情同意書。

1.2研究對象分組 根據(jù)孕婦的預(yù)產(chǎn)年齡、血清檢查結(jié)果、超聲篩查信息等，將其劃分成5小組，其分別是：唐篩高風(fēng)險組（21-三體風(fēng)險值≥1/270，18-三體風(fēng)險值≥1/350）：117例；唐篩臨界風(fēng)險組（唐氏綜合征風(fēng)險值在1/1500～1/270范圍內(nèi)，1/1500≤愛德華綜合征風(fēng)險值在1/1500～1/350范圍內(nèi)）：367例；高齡妊娠組（孕婦預(yù)產(chǎn)年齡不低于35周歲）：1 177例；超聲異常組（胎兒頸部透明層增厚、鼻骨發(fā)育受限等）：44例；其他原因組（預(yù)產(chǎn)年齡<35周歲，包括試管嬰兒、異常孕產(chǎn)史、主動參與篩查等）：898例。唐篩高風(fēng)險組、高齡妊娠組的例數(shù)一共有1 314例，均因擔(dān)心侵入性產(chǎn)前診斷手術(shù)風(fēng)險或因孕周較大等原因，未直接行侵入性產(chǎn)前診斷。

1.3研究方法 ①無創(chuàng)DNA檢測：孕婦知情同意后，于孕12～24周無菌抽取外周血10 mL于K牌采血管中，常溫保存，96h內(nèi)分離血漿，由深圳華大基因研究所做進一步檢測，基本處理過程包括：DNA提取-文庫構(gòu)建-文庫定量-測序-信息分析。檢測儀器為華大基因的BGISEQ-500，原理為聯(lián)合探針錨定聚合技術(shù)，通過生物信息軟件分析測序結(jié)果。②染色體核型分析：無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果異常者建議轉(zhuǎn)診到上級醫(yī)院進行羊水或臍血穿刺，并進行實驗室培養(yǎng)，通過G顯帶技術(shù)對胎兒染色體核型實施檢測，追蹤檢測結(jié)果。對檢測結(jié)果陰性者行電話隨訪。

1.4數(shù)據(jù)處理 通過SPSS21.0統(tǒng)計軟件展開研究，其中，計數(shù)指標(biāo)給予%闡釋，組間率的比較用fisher確切概率法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1孕婦無創(chuàng)DNA檢查 所有孕婦全部接受無創(chuàng)DNA篩查，其結(jié)果不正常者共有26例，高危胎兒檢出率為1.00 %。5組檢出率差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，詳見表1。

2.2無創(chuàng)DNA檢測異常與侵入性產(chǎn)前診斷結(jié)果比較26例無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果異常者均建議行侵入性產(chǎn)前診斷，實際行產(chǎn)前診斷者共15例。核型分析結(jié)果顯示有9例確實存在不同染色體異常，無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果與侵入性產(chǎn)前診斷結(jié)果總體符合率為60 %，詳見表2。

2.3隨訪 對無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果為陰性的孕婦均實施電訪，其內(nèi)容主要有：妊娠期胎兒發(fā)育、胎兒分娩后生長狀況。隨訪率是95 %，不存在染色體異常兒。沒有參加電訪的5 %孕婦未有染色體異常胎兒的信息反饋。

3 討論

胎兒染色體非整倍體的無創(chuàng)產(chǎn)前檢測（無創(chuàng)DNA）是通過大量的平行測序方法（英文簡稱：MPS）對孕婦外周血游離DNA實施深度檢查，獲得胎兒染色體數(shù)據(jù)的一個高新技術(shù)[8]。胎盤的滋養(yǎng)層細胞是cffDNA的主要來源，調(diào)查得出，懷孕5周后能夠在孕婦外周血中發(fā)現(xiàn)胎兒DNA，同時其含量在妊娠期延增的條件下在不斷提升[9-10]。孕中期檢測準(zhǔn)確性較孕早期高，因此納入本研究的所以孕婦均在孕12周后進行無創(chuàng)DNA檢測。母血中的胎兒DNA半衰期為16.3 min[11]，其在胎兒出生后會很快被清除，故前次妊娠不會影響本次妊娠無創(chuàng)DNA結(jié)果。本研究結(jié)果表明無創(chuàng)DNA檢測對21-三體、18-三體的檢出率均為100 %，對21-三體檢出的準(zhǔn)確性達到100 %，18-三體檢出的準(zhǔn)確性為50 %，這和文獻報道的大規(guī)模平行測序技術(shù)對這兩種疾病產(chǎn)前診斷的特異性和敏感度均可達到99 %有差異[12]，這可能與本研究的樣本例數(shù)偏少有關(guān)，還需進一步積累病例再行分析。本次研究中5組不同原因進行無創(chuàng)DNA檢測的孕婦，異常檢出率并無差異，這表明無創(chuàng)DNA檢測對染色體異常的檢出率并不受其他孕期檢查的影響。本次研究中無創(chuàng)DNA檢測未發(fā)現(xiàn)13-三體高風(fēng)險者，有關(guān)該檢測對13-三體的檢出率及準(zhǔn)確性也有待進一步探討。

無創(chuàng)DNA檢測對性染色體異常和染色體結(jié)構(gòu)異常也有一定的提示作用。本研究中無創(chuàng)DNA檢測對性染色體的檢出率為100 %，但準(zhǔn)確性僅有42.9 %，之前有關(guān)無創(chuàng)DNA檢測的文獻報道也有類似的數(shù)據(jù)顯示其對性染色體異常較低的準(zhǔn)確性[13]。對大片段的染色體結(jié)構(gòu)異常的檢出率為100 %，準(zhǔn)確性40 %。這也是導(dǎo)致此次研究無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果與侵入性產(chǎn)前診斷結(jié)果總體符合率偏低（60%）的原因之一。除此之外，無創(chuàng)DNA對染色體三體疾病中存在的部分嵌合體，或≥2胎中任一胎兒存在唐氏綜合征，但是其它胎兒無異常，該技術(shù)的靈敏度、精準(zhǔn)性會減弱；孕婦的染色體不正常、孕婦近段時間進行異體輸血、器官移植、細胞治療等等有可能會影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性等局限性。因此邊旭明同時也提出無創(chuàng)DNA檢測法需要和當(dāng)前的產(chǎn)前篩查技術(shù)全面融合，然后精準(zhǔn)確定適用范圍[5]。

綜上所述，胎兒染色體非整倍體的無創(chuàng)產(chǎn)前檢測應(yīng)用來檢測胎兒染色體非整倍體疾病，具體無創(chuàng)、高效、靈敏度高、準(zhǔn)確率高及特異性強等其他檢測技術(shù)不可比擬的優(yōu)勢，它的臨床應(yīng)用價值已經(jīng)的到充分的肯定。但同時，我們也不能忽視該方法存在的局限性和假陽性，在應(yīng)用中應(yīng)該聯(lián)合其他產(chǎn)前檢測手段，取長補短，為孕婦提高最佳的產(chǎn)前檢查方案，最終達到降低出生缺陷患兒出生的目的。

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作者簡介：慕曉瓊（1988-），女，云南楚雄人，碩士研究生，主治醫(yī)師，研究方向：遺傳咨詢、分子生物學(xué)。E_mail：aakli889@163.com