血小板反應(yīng)蛋白-1和I型纖溶酶原激活物抑制因子在系膜增生性腎小球腎炎患者中的表達(dá)及臨床意義

王勤超，仇 琳

(寶雞市中心醫(yī)院，陜西 寶雞 721008)

系膜增生性腎小球腎炎的主要特征是腎小球彌漫性系膜細(xì)胞增生和(或)系膜基質(zhì)增多[1]，是我國(guó)常見的腎小球疾病病理類型。近年來，有大量研究表明Ⅰ型纖溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)可影響腎小球內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成及降解平衡，促使腎小球硬化[2-4]，血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)具有致纖維化作用[5-6]，兩者對(duì)本病的發(fā)生具有一定的作用。為此，本研究選取了我院腎內(nèi)科2013年5月～2018年5月收治的46例系膜增生性腎小球腎炎患者腎組織，探討血小板反應(yīng)蛋白-1(TSP-1)和I型纖溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)在系膜增生性腎小球腎炎患者中的表達(dá)及臨床意義?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：研究對(duì)象選取2013年5月～2018年5月本院腎內(nèi)科收治的系膜增生性腎小球腎炎患者46例，行腎穿刺活檢取標(biāo)本固定、石蠟包埋，所有患者均經(jīng)腎活檢組織病理檢查確診。其中男28例，女18例，年齡19～56歲，平均(34.75±6.24)歲，病程1個(gè)月～9年，平均(14.5±6.31)個(gè)月；其中有16例患者表現(xiàn)為腎病綜合征，25例為慢性腎小球腎炎，5例為隱匿性腎炎；伴有血尿8例，伴血壓升高20例，伴水腫37例，伴納呆6例，伴腰酸乏力16例；發(fā)病前無誘因16例，有上呼吸道感染26例，尿路感染4例。

對(duì)照組選取2013年5月～2018年5月意外身亡的尸檢腎組織標(biāo)本8例，本組研究對(duì)象均無腎組織病變及損害、腎功能正常，且符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求。其中男5例，女3例，年齡23～59歲，平均(36.00±5.96)歲。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2研究方法

1.2.1主要試劑：兔抗TSP-1一抗、鼠抗人PAI-1一抗及免疫組化染色試劑盒(即用型)均購(gòu)自武漢博士德公司。

1.2.2方法：對(duì)46例系膜增生性腎小球腎炎患者腎穿取活檢標(biāo)本行TSP-1、PAI-1免疫組織化學(xué)染色，采用SABC染色法[7]。組織切片常規(guī)脫蠟、沖洗，加3%甲醇過氧化氫靜置20 min。將相同病例標(biāo)本行TSP-1免疫組織化學(xué)染色與PAI-1免疫組化染色，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。分別以已知系膜增生性腎小球腎炎TSP-1、PAI-1陽性結(jié)果作為陽性參考，以PBS液代替一抗、二抗的結(jié)果作為陰性參考。

1.3病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：參照1982年WHO關(guān)于腎小球病理學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)[8]。腎小球病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：從系膜細(xì)胞增殖、基質(zhì)增寬、硬化改變?nèi)齻€(gè)方面評(píng)估，按正常、輕度、中度、重度分別記為0～3分。其中，系膜細(xì)胞輕度增殖、毛細(xì)血管袢無明顯影響、<30%的腎小球硬化為輕度；系膜細(xì)胞中度增殖、50%以下毛細(xì)血管袢狹窄閉鎖、30%～60%腎小球硬化為中度；系膜細(xì)胞重度增殖、50%以上毛細(xì)血管袢狹窄閉鎖、>60%腎小球硬化為重度。腎小管間質(zhì)病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：從腎小管變性、萎縮、間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)纖維化四個(gè)方面評(píng)估，其中腎小管輕度受損及小灶狀腎小管萎縮、間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)纖維化為輕度；腎小管中度受損及片灶狀腎小管萎縮、間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)纖維化為中度；腎小管重度受損及彌漫性腎小管萎縮、間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、間質(zhì)纖維化為重度。按正常、輕度、中度、重度分別記為0～3分。腎小球病理按總評(píng)分1～4分為輕度、5～8分中度、9～12分重度，腎間質(zhì)病理損傷程度按總評(píng)分1～4分為輕度損傷、5～8分中度、9～12分重度。

2 結(jié)果

2.1系膜組織增生程度與臨床指標(biāo)的關(guān)系：重度系膜組織增生患者24 h尿蛋白定量、三酰甘油、總膽固醇水平均明顯高于輕度、中度系膜組織增生患者，血清白蛋白低于后兩者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。中度系膜組織增生患者24 h尿蛋白定量高于輕度系膜組織增生患者、白蛋白水平低于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。三酰甘油、總膽固醇比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，三組患者肌酐清除率(Ccr)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 系膜組織增生程度與臨床指標(biāo)的關(guān)系

2.2腎間質(zhì)病變與腎功能關(guān)系：有腎間質(zhì)病變的患者24 h尿蛋白定量、尿a-1微球蛋白水平均高于無腎間質(zhì)病變者、Ccr水平低于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 腎間質(zhì)病變與腎功能關(guān)系

2.3系膜增生性腎小球腎炎患者腎組織標(biāo)本與正常腎組織標(biāo)本TSP-1的表達(dá)情況比較：TSP-1在對(duì)照組標(biāo)本腎小球和腎小管中均無陽性表達(dá)，在不同程度系膜增生、不同腎小管損傷程度中的表達(dá)水平為輕度<中度<重度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。①腎小球：對(duì)照組8例，TSP-1表達(dá)水平0；輕度系膜增生23例，TSP-1表達(dá)水平0.38±0.08；中度系膜增生13例，TSP-1表達(dá)水平0.49±0.10；重度系膜增生10例，TSP-1表達(dá)水平0.97±0.14[F(后三組)=121.48，P(后三組)<0.001]。②腎小管：對(duì)照組8例，TSP-1表達(dá)水平0；輕度損傷10例，TSP-1表達(dá)水平0.76±0.18；中度損傷5例，TSP-1表達(dá)水平1.05±0.19；重度損傷6例，TSP-1表達(dá)水平2.10±0.25[F(后三組)=83.03，P(后三組)<0.001]。

2.4系膜增生性腎小球腎炎患者腎組織標(biāo)本和正常腎組織標(biāo)本PAI-1的表達(dá)情況比較：PAI-1在對(duì)照組標(biāo)本腎小球和腎小管中均無陽性表達(dá)，在不同程度系膜增生、不同腎小管損傷程度中的表達(dá)水平為輕度<中度<重度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。①腎小球：對(duì)照組8例，PAI-1表達(dá)水平0；輕度系膜增生23例，PAI-1表達(dá)水平0.15±0.10；中度系膜增生13例，PAI-1表達(dá)水平0.23±0.12；重度系膜增生10例，PAI-1表達(dá)水平0.41±0.09[F(后三組)=21.75，P(后三組)<0.001]。②腎小管：對(duì)照組8例，PAI-1表達(dá)水平0；輕度損傷10例，PAI-1表達(dá)水平0.70±0.18；中度損傷5例，PAI-1表達(dá)水平0.94±0.20；重度損傷6例，PAI-1表達(dá)水平1.42±0.24[F(后三組)=23.70，P(后三組)<0.001]。

3 討論

系膜增生性腎小球腎炎是腎小球腎炎的病理類型之一，在我國(guó)與澳大利亞較常見[9]，多發(fā)生于青少年，多數(shù)患者預(yù)后良好，部分患者可出現(xiàn)腎功能衰退，甚至進(jìn)展為終末期腎功能衰竭[10]。本病多由上呼吸道感染誘發(fā)，臨床表現(xiàn)多樣，多表現(xiàn)為原發(fā)性腎病綜合征[11]、無癥狀性血尿、蛋白尿等癥狀，無特異性，臨床診斷及預(yù)后判斷較為困難。目前本病的病因、病理及發(fā)病機(jī)制尚不明確，為此，醫(yī)學(xué)工作者致力于尋求敏感、特異的蛋白分子作為本病病理改變程度的標(biāo)志，以指導(dǎo)臨床診療。多數(shù)研究表明腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮損傷、凝血功能障礙是本病發(fā)生的重要因素[12-14]，其致腎小球內(nèi)彌漫性血栓形成，造成腎小球硬化，其中纖溶酶系統(tǒng)失衡造成ECM沉積是腎小球硬化的關(guān)鍵因素[15-16]。PAI-1是調(diào)節(jié)纖溶酶原激活物(PA)的重要分子，與u-PA[17]等結(jié)合可抑制PA活性，從而促使ECM合成、降解紊亂。TSP-1是一種內(nèi)源性血管新生抑制物，可抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生、誘導(dǎo)系膜細(xì)胞的增生和遷移、激活TGF-β[18-19]，促進(jìn)腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化。既往研究表明本病腎小球系膜區(qū)、腎小管間質(zhì)可發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的PAI-1和TSP-1[20]，提示兩者與系膜增生性腎小球腎炎發(fā)病密切相關(guān)。

本組研究表明，重度系膜組織增生患者24 h尿蛋白定量、三酰甘油、總膽固醇水平均明顯高于輕度、中度系膜組織增生患者，血清白蛋白低于后兩者；中度系膜組織增生患者24 h尿蛋白定量高于輕度系膜組織增生患者、白蛋白水平低于后者，三酰甘油、總膽固醇比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；三組患者Ccr差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。有腎間質(zhì)病變的患者24 h尿蛋白定量、尿a-1微球蛋白水平均高于無腎間質(zhì)病變者、Ccr水平低于后者。由此可見，患者腎小球病理改變?cè)絿?yán)重，24 h尿蛋白定量、三酰甘油、總膽固醇、血清白蛋白等臨床實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與正常范圍相差越大，出現(xiàn)腎間質(zhì)病變患者甚至可出現(xiàn)腎功能損害，提示病理改變程度可反映患者病情程度，因此，臨床上對(duì)于腎小球、腎間質(zhì)病理改變程度的判斷具有重要意義。TSP-1、PAI-1在正常腎組織標(biāo)本中均無陽性表達(dá)，在不同程度系膜增生、不同腎小管損傷程度中的表達(dá)水平為輕度<中度<重度。由此可見，TSP-1、PAI-1與腎小球系膜增生、腎小管間質(zhì)損傷等病理改變密不可分，可促進(jìn)系膜增生性腎小球腎炎的發(fā)病，兩者水平高低間接反映了本病病情進(jìn)展。

綜上所述，系膜增生性腎小球腎炎的病理改變與臨床指標(biāo)24 h尿蛋白定量、三酰甘油、總膽固醇水平、尿a-1微球蛋白、Ccr水平等有一定關(guān)系，TSP-1、PAI-1在其腎小球和腎小管間質(zhì)中的表達(dá)顯著升高，隨病情嚴(yán)重程度增加而升高，提示TSP-1、PAI-1在系膜增生性腎小球腎炎發(fā)生、發(fā)展中有重要作用。