餌料種類(lèi)、配比及投喂方式對(duì)單環(huán)刺螠幼蟲(chóng)生長(zhǎng)和變態(tài)的影響

胡麗萍，姜黎明，張建柏，趙強(qiáng)，黃華，王力勇

(煙臺(tái)市海洋經(jīng)濟(jì)研究院，山東 煙臺(tái) 264000)

單環(huán)刺螠Urechisunicinctus俗稱(chēng)海腸子，隸屬于螠蟲(chóng)動(dòng)物門(mén)Echiurioidea螠綱Echiurida無(wú)管螠目Xenopneusta刺螠科Urchidae刺螠屬Urechis。單環(huán)刺螠自然分布于俄羅斯、朝鮮、日本等國(guó)海域，以及中國(guó)的黃、渤海沿岸，是生活在海邊潮間帶泥性底質(zhì)或珊瑚礁區(qū)中的管狀螠蟲(chóng)動(dòng)物[1]，因其肉味鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，被稱(chēng)為“裸體海參”[2]，具有較大的養(yǎng)殖開(kāi)發(fā)前景。有研究發(fā)現(xiàn)，單環(huán)刺螠體內(nèi)存在多種生物活性物質(zhì)，可為開(kāi)發(fā)海洋生物藥品、保健品提供新資源[3]。目前，單環(huán)刺螠的供應(yīng)絕大部分依賴(lài)采捕野生資源，隨著價(jià)格不斷提高，采捕強(qiáng)度越來(lái)越大，野生資源衰退嚴(yán)重。因此，生產(chǎn)過(guò)程中非常有必要開(kāi)展苗種規(guī)?；瘮U(kuò)繁和增養(yǎng)殖工作。

目前，中國(guó)學(xué)者已在單環(huán)刺螠生態(tài)學(xué)[4-8]、繁殖發(fā)育生物學(xué)[9-10]等方面開(kāi)展了相關(guān)研究，為開(kāi)展養(yǎng)殖生產(chǎn)奠定了一定理論基礎(chǔ)。一些科研單位和企業(yè)也嘗試進(jìn)行了單環(huán)刺螠的人工苗種繁育[2,11-13]及養(yǎng)殖試驗(yàn)[14-15]，并獲得了一定的養(yǎng)殖參數(shù)數(shù)據(jù)。常林瑞等[16]報(bào)道了餌料對(duì)單環(huán)刺螠幼體生長(zhǎng)的影響，而有關(guān)餌料對(duì)單環(huán)刺螠幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育及變態(tài)的影響研究尚未見(jiàn)報(bào)道。

餌料是動(dòng)物生長(zhǎng)與發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)基礎(chǔ)，餌料品種的選擇與科學(xué)投喂是經(jīng)濟(jì)物種苗種繁育成功與否的核心技術(shù)。本研究中，比較了不同餌料品種、餌料配比及餌料投喂方式對(duì)單環(huán)刺螠幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育和變態(tài)的影響，旨在確定適宜幼蟲(chóng)生長(zhǎng)和發(fā)育的最佳餌料系列及投喂方法，為單環(huán)刺螠規(guī)?；斯び缟a(chǎn)提供餌料參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用單環(huán)刺螠親體取自“煙臺(tái)海腸”地理標(biāo)志保護(hù)范圍內(nèi)的煙臺(tái)海域。為取得發(fā)育起點(diǎn)較同步的幼蟲(chóng)，本試驗(yàn)中通過(guò)解剖人工暫養(yǎng)的親體獲取精子和卵子，經(jīng)人工授精并孵化，獲得同源初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)。

1.2 方法

1.2.1 幼蟲(chóng)培養(yǎng) 幼蟲(chóng)培育容器為玻璃水槽(50 cm×30 cm×40 cm)，水深為33 cm，底面積為0.15 m2，試驗(yàn)水體體積為50 L。試驗(yàn)期間連續(xù)充氣，水溫控制在15.8～20.6 ℃，鹽度為27.3～30.2，pH為7.8～8.2，光照強(qiáng)度為500 lx以下。幼蟲(chóng)初始培育密度為0.25 ind./mL。每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)3個(gè)重復(fù)。每天上午換水1次，換水量為總水量的 1/2。在換水后進(jìn)行投餌，日投喂2～3次。換水前觀(guān)察幼蟲(chóng)攝食及活動(dòng)情況。

投餌量的確定方法：投喂前檢測(cè)水中存留餌料細(xì)胞的密度和幼蟲(chóng)胃飽滿(mǎn)程度，以幼蟲(chóng)胃飽滿(mǎn)時(shí)水中餌料細(xì)胞密度達(dá)到1×104cells/mL左右為標(biāo)準(zhǔn)，確定適宜的投喂量。

變態(tài)底質(zhì)的處理與投放：海沙曝曬2～3 d后，使用350 μm篩網(wǎng)過(guò)濾，去掉雜質(zhì)和大顆粒物質(zhì)；加入質(zhì)量濃度為5×10-6mg/L的高錳酸鉀溶液浸泡12 h；反復(fù)用過(guò)濾海水沖洗干凈后備用。在空水槽底部投放經(jīng)處理的海沙作為變態(tài)底質(zhì)，鋪設(shè)厚度為2～3 cm，當(dāng)幼體發(fā)育至蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)階段時(shí)，對(duì)幼蟲(chóng)進(jìn)行收集并移入該水槽。

1.2.2 餌料種類(lèi) 試驗(yàn)餌料包括活性餌料和人工代用餌料兩大類(lèi)，活性餌料為球等鞭金藻Isochrysisgalbana(編號(hào)A)、小球藻Chlorellavulgaris(編號(hào)B)、小新月菱形藻Nitzschiaclosteriumf.minutissima(編號(hào)C)和海洋紅酵母(大連益參寶飼料有限公司)(編號(hào)D)，人工代用餌料為活性干酵母(安琪酵母，湖北武漢)(編號(hào)E)。

1.2.3 單一餌料和混合餌料投喂試驗(yàn) 試驗(yàn)共設(shè)置11個(gè)試驗(yàn)組，分別記為A、B、C、D、E、A+B、B+C、D+E、A+B+C、A+B+D、A+B+E，分別投喂5種單一餌料和6種混合餌料?；旌橡D料投喂組中各組分均按細(xì)胞數(shù)等量使用，最終使每組細(xì)胞數(shù)量相同。試驗(yàn)幼蟲(chóng)種類(lèi)包括從初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)的各階段。

1.2.4 餌料配比及投喂方式試驗(yàn) 根據(jù)混合餌料投喂試驗(yàn)結(jié)果，確定最佳混合餌料品種。按照表1中的餌料配比和投喂方式設(shè)置各試驗(yàn)組，依據(jù)幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)速度與變態(tài)率確定最佳投喂方式和各發(fā)育階段幼蟲(chóng)的適宜投喂量。試驗(yàn)幼蟲(chóng)種類(lèi)包括從初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)的各階段。

表1 餌料配比及投喂方式試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.5 幼蟲(chóng)的收集與計(jì)數(shù) 單環(huán)刺螠擔(dān)輪幼蟲(chóng)和體節(jié)幼蟲(chóng)均為浮游狀態(tài)，使用75 μm篩絹獲??；蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)為底棲生活，獲取方法如下：用水流沖擊水槽底部，使幼苗與底質(zhì)分離，將浮起的幼蟲(chóng)連同槽內(nèi)海水一起倒入106 μm的網(wǎng)箱中，反復(fù)操作至底質(zhì)內(nèi)無(wú)幼苗為止，收集網(wǎng)箱內(nèi)的幼苗并沖洗干凈，瀝水后測(cè)量體長(zhǎng)并稱(chēng)其質(zhì)量。隨機(jī)取樣3次，取平均值并計(jì)算出該水槽內(nèi)的幼苗總數(shù)。

1.2.6 生長(zhǎng)速度的測(cè)定 試驗(yàn)期間，使用目微尺分別檢測(cè)初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)和后期體節(jié)幼蟲(chóng)(12體節(jié))的體長(zhǎng)。每組隨機(jī)抽取30個(gè)個(gè)體，并計(jì)算其平均值。體長(zhǎng)日增長(zhǎng)率計(jì)算公式為

體長(zhǎng)日增長(zhǎng)率=(后期體節(jié)幼蟲(chóng)體長(zhǎng)-初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)體長(zhǎng))/(初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)體長(zhǎng)×生長(zhǎng)時(shí)間)×100%。

1.2.7 幼蟲(chóng)成活率及變態(tài)成活率的測(cè)定 當(dāng)幼蟲(chóng)全部發(fā)育到體節(jié)幼蟲(chóng)時(shí)，測(cè)定幼蟲(chóng)成活率；當(dāng)在水中無(wú)浮游幼蟲(chóng)5 d后，從底質(zhì)中分離出蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)幼苗，測(cè)定幼蟲(chóng)變態(tài)率。計(jì)算公式為

1.2.8 幼蟲(chóng)發(fā)育齊整度的測(cè)定 通過(guò)計(jì)算組內(nèi)水中無(wú)浮游幼蟲(chóng)時(shí)間與最早出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)間之差，評(píng)估組內(nèi)幼蟲(chóng)發(fā)育的整齊程度。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 19.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因子方差分析，檢驗(yàn)方差齊性，采用Duncan法進(jìn)行組間多重比較，顯著性水平設(shè)為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)幼蟲(chóng)的形態(tài)特征

受精約24 h后觀(guān)察到早期擔(dān)輪幼蟲(chóng)，營(yíng)浮游生活(圖1(a))，此時(shí)幼蟲(chóng)呈梨形，身體分上下兩個(gè)半球，上半球頂部具頂纖毛束，在體圍最大處有兩個(gè)纖毛環(huán)，在蟲(chóng)體下半球靠近末端處，還有一圈尾端纖毛環(huán),此時(shí)幼蟲(chóng)長(zhǎng)×寬約144 μm×168 μm。

受精后8～15 d，發(fā)育至體節(jié)幼蟲(chóng)，幼蟲(chóng)陸續(xù)下沉并在底質(zhì)表面爬行(圖1(b))，后期體節(jié)幼蟲(chóng)體長(zhǎng)896.5～939.2 μm不等。

當(dāng)水體中基本無(wú)浮游幼蟲(chóng)時(shí)，從水槽底部沙床中收集的幼蟲(chóng)主要為蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)，蟲(chóng)體呈透明狀，消化道清晰可見(jiàn)(圖1(c))，此時(shí)幼蟲(chóng)體長(zhǎng)為2.1～5.0 mm，體質(zhì)量為1.29～2.15 mg。

2.2 不同種類(lèi)餌料對(duì)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育和存活的影響

不同種類(lèi)餌料投喂對(duì)單環(huán)刺螠初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至體節(jié)幼蟲(chóng)期間的體長(zhǎng)日增長(zhǎng)率、體節(jié)幼蟲(chóng)體長(zhǎng)和幼蟲(chóng)成活率(表2)，以及對(duì)初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)的時(shí)間和幼蟲(chóng)變態(tài)率(表3)等均存在一定的影響。在單一餌料投喂組中，小球藻(B)和球等鞭金藻(A)投喂組幼蟲(chóng)體長(zhǎng)日增長(zhǎng)率顯著高于其他單一餌料投喂組(P<0.05)，但A組和B組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，在海洋紅酵母(D)單一餌料投喂組中，單環(huán)刺螠初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)未能成功發(fā)育成為體節(jié)幼蟲(chóng)；所有餌料投喂組幼蟲(chóng)生長(zhǎng)的多重比較分析結(jié)果顯示，A+B混合餌料和A+B+E(酵母粉)混合餌料組的初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至后期體節(jié)幼蟲(chóng)時(shí)的體長(zhǎng)日增長(zhǎng)率顯著高于其他餌料組(P<0.05)，但A+B組和A+B+E組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)(表2)。

從整個(gè)浮游期幼蟲(chóng)的成活率來(lái)看，A、B單一餌料投喂組的體節(jié)幼蟲(chóng)成活率顯著高于其他單一餌料投喂組(P<0.05)，但A、B餌料組間幼蟲(chóng)成活率無(wú)顯著性差異(P>0.05);所有餌料投喂組幼蟲(chóng)成活率的多重比較分析結(jié)果顯示，A、B餌料組及所有包含A+B的混合餌料組中體節(jié)幼蟲(chóng)成活率均在67%以上，且顯著高于其他餌料組(P<0.05)，其中，A+B混合餌料組的幼蟲(chóng)成活率最高(72.96%±1.27%)，但與A+B+C、A+B+D和A+B+E混合餌料組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)(表2)。

表2 不同餌料投喂組后期體節(jié)幼蟲(chóng)體長(zhǎng)、初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至后期體節(jié)幼蟲(chóng)體長(zhǎng)的日增長(zhǎng)率及體節(jié)幼蟲(chóng)成活率

從初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)的發(fā)育時(shí)間分析，A和B兩個(gè)單一餌料投喂組的初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)的時(shí)間顯著短于其他單一餌料投喂組(P<0.05)，但A、B組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，D單一投喂餌料組中，單環(huán)刺螠初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)未能成功發(fā)育成為蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng);所有餌料投喂組幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)間的多重比較分析結(jié)果顯示，含有A和/或B的單一及混合餌料組的初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)間均顯著短于其他餌料組(P<0.05)，尤其是A+B和A+B+E混合餌料組的初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)間分別為(16.00±0.03)、(17.30±0.03)d，顯著短于其他餌料組(P<0.05)(表3)。

表3 不同餌料投喂組初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)的時(shí)間及幼蟲(chóng)變態(tài)率

從幼蟲(chóng)變態(tài)率來(lái)看，A、B兩個(gè)單一餌料投喂組的幼蟲(chóng)變態(tài)率顯著高于其他單一餌料投喂組(P<0.05)，且A、B組間幼蟲(chóng)變態(tài)率有顯著性差異(P<0.05);所有餌料投喂組幼蟲(chóng)變態(tài)率的多重比較分析結(jié)果顯示，A、B及所有包含A+B的混合餌料組中幼蟲(chóng)變態(tài)率均在15%以上，且顯著高于其他餌料組(P<0.05)，其中，A+B+E投喂組幼蟲(chóng)變態(tài)率最高(21.72%±0.85%)，顯著高于其他餌料組(P<0.05)。

2.3 餌料配比和投喂方式對(duì)幼蟲(chóng)變態(tài)的影響

參考“2.2節(jié)”試驗(yàn)結(jié)果，綜合考慮幼蟲(chóng)成活率和變態(tài)率情況，結(jié)果表明，小球藻+球等邊金藻+酵母粉的混合餌料投喂組整體培育效果最佳。在此基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了該組3種餌料在不同配比和投喂方式下對(duì)幼蟲(chóng)變態(tài)的影響試驗(yàn)。結(jié)果顯示，不同餌料配比和投喂方式對(duì)單環(huán)刺螠組內(nèi)幼蟲(chóng)發(fā)育齊整度(水中無(wú)浮游幼蟲(chóng)時(shí)間與最早出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)間差)和變態(tài)率存在顯著影響(表4)。從幼蟲(chóng)變態(tài)率來(lái)看，當(dāng)投喂方式相同(即同時(shí)搭配投喂或分期投喂)、餌料配比不同時(shí)，小球藻、球等鞭金藻、酵母粉3種餌料按照2∶1∶1比例混合投喂試驗(yàn)組(Ⅱ、Ⅴ組)的幼蟲(chóng)變態(tài)率顯著高于同種投喂方式下其他比例試驗(yàn)組(P<0.05);所有試驗(yàn)組幼蟲(chóng)變態(tài)率的多重比較分析結(jié)果顯示,小球藻、球等鞭金藻、酵母粉3種餌料按照2∶1∶1比例混合，在擔(dān)輪幼蟲(chóng)前期只投喂小球藻+金藻，至擔(dān)輪幼蟲(chóng)中后期增加投喂酵母粉的試驗(yàn)組(V組)的幼蟲(chóng)變態(tài)率最高(24.73%±0.78%)，且顯著高于其他各組(P<0.05)(表4)。

表4 小球藻、球等鞭金藻、酵母粉3種餌料配比和2種投喂方式對(duì)初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)至出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)的時(shí)間、水中無(wú)浮游幼蟲(chóng)時(shí)間與最早出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)間差及幼蟲(chóng)變態(tài)率的影響

從水中無(wú)浮游幼蟲(chóng)時(shí)間與最早出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)間差來(lái)看，當(dāng)投喂方式相同，餌料配比不同時(shí)，小球藻、球等鞭金藻、酵母粉3種餌料按照2∶1∶1比例混合投喂試驗(yàn)組(II和V組)的水中無(wú)浮游幼蟲(chóng)時(shí)間與最早出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)間差顯著小于同種投喂方式下的其他比例試驗(yàn)組(P<0.05);所有試驗(yàn)組水中無(wú)浮游幼蟲(chóng)時(shí)間與最早出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)間差的多重比較分析結(jié)果顯示，II組和V組的水中無(wú)浮游幼蟲(chóng)時(shí)間與最早出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)間差分別為(2.8±0.31)、(3.0±0.21)d，兩者均顯著小于其他各組(P<0.05)，但I(xiàn)I和V組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。水中無(wú)浮游幼蟲(chóng)時(shí)間與最早出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)間差越小，表明組內(nèi)幼蟲(chóng)發(fā)育齊整程度越好。

2.4 不同發(fā)育階段幼蟲(chóng)的適宜投喂量

參考“2.2節(jié)”和“2.3節(jié)”試驗(yàn)結(jié)果，綜合考慮成活率和變態(tài)率均較高的投喂組為小球藻、球等鞭金藻、酵母粉3種餌料按照2∶1∶1比例混合，在擔(dān)輪幼蟲(chóng)前期只投喂小球藻+金藻，至擔(dān)輪幼蟲(chóng)中后期增加投喂酵母粉的試驗(yàn)組。進(jìn)一步根據(jù)試驗(yàn)過(guò)程中對(duì)水中存留餌料細(xì)胞密度測(cè)量及對(duì)幼蟲(chóng)胃飽滿(mǎn)程度觀(guān)察，獲得幼蟲(chóng)不同培育階段適宜餌料日投喂量及投喂方法(表5)。初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)期餌料日投喂量為2×104cells/mL，隨著幼蟲(chóng)發(fā)育餌料投喂量逐漸增加，當(dāng)出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)，餌料投喂數(shù)量增加至10×104～12×104cells/mL。

表5 幼蟲(chóng)不同培育階段的餌料日投喂量及投喂方法

3 討論

3.1 搭配小球藻和球等鞭金藻的餌料更適合單環(huán)刺螠幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育

動(dòng)物幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育受許多因素影響，合適的餌料是幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育和提高存活率的重要影響因子

之一。餌料品種不適宜，會(huì)大大降低幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育速度，甚至導(dǎo)致幼蟲(chóng)變態(tài)失敗和發(fā)育終止[17]。本研究結(jié)果顯示，單一餌料投喂時(shí)，小球藻投喂組與球等鞭金藻投喂組的體節(jié)幼蟲(chóng)體長(zhǎng)日增長(zhǎng)率和幼蟲(chóng)成活率均顯著高于其他單一餌料投喂組；混合餌料投喂結(jié)果顯示，含有小球藻和/或球等鞭金藻的餌料混合組中體節(jié)幼蟲(chóng)的成活率和蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)的變態(tài)率均顯著高于其他餌料投喂組，其中，小球藻+球等邊金藻+酵母粉的混合餌料投喂組整體培育效果最佳，這表明小球藻和球等鞭金藻是單環(huán)刺螠幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育的較好鮮活餌料品種，同時(shí)考慮混合餌料可以更全面地提供幼蟲(chóng)發(fā)育所需要的營(yíng)養(yǎng)，以及降低育苗成本，建議在單環(huán)刺螠苗種大規(guī)模繁育中使用小球藻+球等鞭金藻+酵母粉或其他低成本餌料。本研究中，混合餌料投喂可以更有效地促進(jìn)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)和發(fā)育的結(jié)論與常林瑞等[16]報(bào)道的餌料對(duì)單環(huán)刺螠幼螠生長(zhǎng)影響的研究結(jié)果一致。

3.2 不同發(fā)育階段幼蟲(chóng)對(duì)餌料的選擇不同

不同生物種類(lèi)幼蟲(chóng)發(fā)育對(duì)餌料的選擇是不同的，同種生物幼蟲(chóng)不同發(fā)育階段對(duì)餌料的種類(lèi)要求也不一樣。如大多數(shù)貝類(lèi)剛孵化的幼蟲(chóng)因口徑較小，開(kāi)口餌料一般會(huì)選擇細(xì)胞較小的金藻或者小球藻等，當(dāng)幼蟲(chóng)發(fā)育到口徑較大的殼頂初期后，可投喂細(xì)胞較大的扁藻[18]。方格星蟲(chóng)的孵化幼蟲(chóng)因口徑比較大，目前人工育苗常用的十幾種單細(xì)胞藻類(lèi)均可作為其開(kāi)口餌料，但進(jìn)一步研究顯示，作為開(kāi)口餌料投喂時(shí)，金藻試驗(yàn)組要比扁藻試驗(yàn)組獲得的方格星蟲(chóng)日增長(zhǎng)率更高[18]。本研究中單一餌料投喂結(jié)果顯示，小球藻與球等鞭金藻投喂組的單環(huán)刺螠體節(jié)幼蟲(chóng)成活率和體長(zhǎng)日增長(zhǎng)率相當(dāng)，但小球藻投喂組的蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)變態(tài)率要顯著高于球等鞭金藻投喂組，故用單一餌料投喂時(shí)，小球藻是作為單環(huán)刺螠開(kāi)口餌料更好的選擇。不同餌料配比及投喂方式對(duì)幼蟲(chóng)變態(tài)影響的試驗(yàn)結(jié)果顯示，將小球藻、球等鞭金藻、酵母粉3種餌料按照2∶1∶1的比例混合搭配，在擔(dān)輪幼蟲(chóng)前期只投喂小球藻+球等鞭金藻，至擔(dān)輪幼蟲(chóng)中后期增加投喂酵母粉，能夠獲得較高的幼體成活率和變態(tài)率，故將其確定為單環(huán)刺螠幼蟲(chóng)不同發(fā)育階段的最佳餌料投喂方案。

另外，本研究中不同餌料配比及投喂方式對(duì)幼蟲(chóng)發(fā)育和變態(tài)時(shí)間影響的試驗(yàn)結(jié)果顯示，餌料中小球藻的投喂比例偏高或偏低時(shí)，水中無(wú)浮游幼蟲(chóng)時(shí)間與最早出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)間差均會(huì)延長(zhǎng)，即幼蟲(chóng)發(fā)育齊整度會(huì)降低，將不利于幼蟲(chóng)變態(tài)集中進(jìn)行；相同的餌料配比時(shí)，推遲使用酵母粉，幼蟲(chóng)發(fā)育及變態(tài)時(shí)間會(huì)有所延長(zhǎng)；增加酵母粉使用比例，幼蟲(chóng)發(fā)育及變態(tài)時(shí)間也會(huì)相對(duì)延長(zhǎng)。因此，合理控制餌料中小球藻的使用比例，并適時(shí)增加投喂酵母粉，對(duì)提高幼蟲(chóng)發(fā)育的齊整度及幼蟲(chóng)變態(tài)率可起到促進(jìn)作用。以上研究結(jié)果均表明，餌料的營(yíng)養(yǎng)效果與幼蟲(chóng)發(fā)育的階段性需求有很大的關(guān)系[18]。建議在進(jìn)行幼蟲(chóng)培育時(shí)，有必要根據(jù)幼蟲(chóng)的不同發(fā)育階段適當(dāng)調(diào)整餌料的品種和配比。

3.3 適宜投餌量應(yīng)根據(jù)幼蟲(chóng)培育密度確定

除餌料品種外，餌料數(shù)量也是關(guān)系到幼蟲(chóng)培育成功的又一關(guān)鍵要素。幼蟲(chóng)發(fā)育進(jìn)入一個(gè)新階段，需要消耗大量的體能。在單環(huán)刺螠幼蟲(chóng)培育過(guò)程中，足量投喂適宜的餌料是苗種繁育工作成功的關(guān)鍵。本研究結(jié)果顯示，當(dāng)餌料品種適宜，但投喂量不足時(shí)，會(huì)致使幼蟲(chóng)生長(zhǎng)緩慢，成活率與變態(tài)率大幅降低，在發(fā)育進(jìn)入下一個(gè)階段時(shí)，極易出現(xiàn)大量死亡甚至全部死亡的情況。這應(yīng)該與幼蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)儲(chǔ)備不足有著直接關(guān)系。這與蘭國(guó)寶等[18]對(duì)方格星蟲(chóng)幼體餌料研究的結(jié)果一致。但是，餌料密度并非越高越好，本研究中餌料數(shù)量對(duì)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育影響的試驗(yàn)結(jié)果，以及蘭國(guó)寶等[18]對(duì)方格星蟲(chóng)幼體餌料研究的結(jié)果均表明，當(dāng)投餌密度過(guò)高時(shí)，幼蟲(chóng)存活率也會(huì)下降。一般情況下，投餌量的多少應(yīng)與幼蟲(chóng)培育密度有關(guān)。在人工培育過(guò)程中，幼蟲(chóng)的培育密度不宜過(guò)大，本研究中采取綜合考慮培育水體中餌料細(xì)胞的數(shù)量和幼蟲(chóng)攝食情況兩個(gè)方面，通過(guò)對(duì)投喂前水中存留的餌料細(xì)胞密度的測(cè)量及對(duì)幼蟲(chóng)胃飽滿(mǎn)程度的觀(guān)察，以幼蟲(chóng)胃飽滿(mǎn)時(shí)水中餌料細(xì)胞密度達(dá)到1×104cells/mL左右為標(biāo)準(zhǔn)，確定了不同幼蟲(chóng)生長(zhǎng)階段的餌料適宜日投喂量。

4 結(jié)論

本研究中通過(guò)一系列的對(duì)比試驗(yàn)，根據(jù)餌料品種及餌料配比對(duì)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)及變態(tài)率等的影響進(jìn)行了分析，首次總結(jié)形成了單環(huán)刺螠幼蟲(chóng)培育的最佳餌料系列和最佳投喂方案，并確定了幼蟲(chóng)培育適宜的餌料投喂量，為單環(huán)刺螠規(guī)模化苗種繁育生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。

1)單一餌料投喂時(shí)，小球藻是單環(huán)刺螠幼蟲(chóng)培育較好的開(kāi)口餌料。

2)混合餌料投喂時(shí)，小球藻+球等邊金藻+酵母粉的餌料組合對(duì)單環(huán)刺螠幼蟲(chóng)培育效果最佳。

3)綜合考慮成活率和變態(tài)率情況，單環(huán)刺螠幼蟲(chóng)培育的最佳餌料投喂方案為，將小球藻、球等鞭金藻、酵母粉3種餌料按照2∶1∶1比例混合，在擔(dān)輪幼蟲(chóng)前期只投喂小球藻+球等鞭金藻，至擔(dān)輪幼蟲(chóng)中后期增加投喂酵母粉。

4)不同發(fā)育階段幼蟲(chóng)的適宜投喂量確定為:初孵擔(dān)輪幼蟲(chóng)期餌料日投喂量為2×104cells/mL，隨著幼蟲(chóng)發(fā)育餌料投喂量逐漸增加，當(dāng)出現(xiàn)蠕蟲(chóng)狀幼蟲(chóng)時(shí)日投喂量應(yīng)增加至10×104～12×104cells/mL。