3項(xiàng)血清腫瘤標(biāo)志物、SAA及DCLK1聯(lián)合檢測(cè)在非小細(xì)胞癌患者預(yù)后判斷中的價(jià)值

韓蕃頡，王海濱，蘇新云，郭 冉

濟(jì)南市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，山東濟(jì)南 271100

肺癌是臨床常見(jiàn)的呼吸道惡性腫瘤之一，其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占比最高[1]。近年來(lái)，隨著自然環(huán)境的污染加重、人口老齡化進(jìn)程加快，NSCLC發(fā)病率和死亡率有逐年上升趨勢(shì)[2]。NSCLC早期臨床特征缺乏特異性，確診時(shí)大多已經(jīng)進(jìn)展到中晚期，喪失最佳治療時(shí)機(jī)，因此及早診斷能有效進(jìn)行干預(yù)治療、降低病死率和改善預(yù)后。目前已經(jīng)有多種血清腫瘤標(biāo)志物逐漸應(yīng)用于NSCLC的早期篩查，如神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)等，但單純采用腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)特異度和靈敏度有限[3]。隨著臨床對(duì)肺癌發(fā)病機(jī)制、分子生物學(xué)研究發(fā)的持續(xù)進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)血清淀粉樣蛋白A(SAA)、雙皮質(zhì)素樣激酶1(DCLK1)也在肺癌患者體內(nèi)表達(dá)水平升高，推測(cè)可能也參與了NSCLC發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[4-5]。本次研究旨在探討常見(jiàn)血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合SAA、DCLK1在NSCLC中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后判斷價(jià)值，以期為NSCLC早期診斷、病情評(píng)估和預(yù)后判斷提供新的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年5月到2019年5月本院收治的156例NSCLC患者作為NSCLC組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)影像學(xué)、痰涂片及病理檢查確診為NSCLC，參考2015年WHO提出的肺腫瘤分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；(2)患者臨床資料完整且能完成隨訪；(3)患者知情并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)入組前已接受過(guò)手術(shù)、放化療、藥物等相關(guān)治療；(2)合并肺部感染、哮喘等其他肺部病變；(3)合并急慢性感染、血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、甲狀腺疾病等；(4)合并其他良、惡性腫瘤。另選取70例良性病變者(肺纖維瘤、肺氣腫、肺炎等)和72例于本院體檢健康人員分別作為良性病變組和健康組。NSCLC組男82例，女74例，年齡(67.40±12.37)歲；良性病變組男37例，女33例，年齡(67.14±12.52)歲；對(duì)照組男43例，女29例，年齡(67.52±12.34)歲。3組患者間一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2方法 采集所有納入對(duì)象清晨空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min取上清液于—80 ℃凍存?zhèn)溆?。采用全自?dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(瑞士羅氏公司，e601型)檢測(cè)血清NSE、CEA、CYFRA21-1、DCLK1水平，試劑盒購(gòu)自北京科美生物技術(shù)有限公司，質(zhì)控品購(gòu)自英國(guó)朗道公司，判斷標(biāo)準(zhǔn)為Westgard多規(guī)則分析。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)血清SAA水平，試劑盒購(gòu)自上海雙贏生物科技有限公司。所有操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。比較NSCLC組和健康組的NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1表達(dá)水平不同，然后按照TNM臨床分期[7]將NSCLC組患者分為Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期兩類，分析不同分期NSCLC患者以上血清指標(biāo)表達(dá)水平。隨訪1年，分析各指標(biāo)水平與NSCLC患者生存時(shí)間關(guān)系及對(duì)預(yù)后不良(生存時(shí)間<1年)的診斷價(jià)值。

2 結(jié) 果

2.1各組血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較 NSCLC組血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平均高于良性病變組和健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較

2.2不同臨床分期患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較 臨床分期Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平均低于Ⅲ～Ⅳ期者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 不同臨床分期患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較

2.3不同預(yù)后NSCLC患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較 隨訪1年，以患者死亡為隨訪終止，中位隨訪時(shí)間為0.74年。生存時(shí)間≥1年NSCLC患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平低于生存時(shí)間<1年患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 不同預(yù)后NSCLC患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平比較

2.4血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1聯(lián)合對(duì)預(yù)后的診斷價(jià)值 繪制血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1預(yù)測(cè)預(yù)后不良(生存時(shí)間<1年)的ROC曲線，其AUC分別為0.514、0.525、0.673、0.648、0.762，聯(lián)合診斷的曲線下面積(AUC)為0.824，診斷效能高于單一診斷方式(P<0.05)，見(jiàn)表4、圖1。

表4 血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1聯(lián)合對(duì)預(yù)后的診斷價(jià)值

圖1 血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1聯(lián)合診斷預(yù)后的ROC曲線

3 討 論

NSCLC具有惡性程度高、轉(zhuǎn)移早的特點(diǎn)，其發(fā)病率、死亡率居呼吸道腫瘤首位。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，NSCLC患者5年生存率不到20%，可對(duì)患者生命健康造成較大威脅[8-9]。NSCLC患者常在中晚期確診，此時(shí)大多數(shù)甚至已經(jīng)處于擴(kuò)散轉(zhuǎn)移期，不利于患者預(yù)后轉(zhuǎn)歸。早期診斷和手術(shù)干預(yù)治療對(duì)改善患者預(yù)后具有重要意義，目前臨床上主要采用影像學(xué)、痰涂片作為篩查標(biāo)準(zhǔn)，但陽(yáng)性率低[10]。病理學(xué)檢查肺癌特異度高，但作為一種侵入性操作，存在患者耐受較差、取材難度較大且檢測(cè)結(jié)果靈敏度較低等問(wèn)題[11]。近年來(lái)，隨著NSCLC發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展，多種血清指標(biāo)檢測(cè)逐漸應(yīng)用于臨床，對(duì)NSCLC的輔助診斷、病情評(píng)估和預(yù)后預(yù)測(cè)等方面提供了重要參考價(jià)值。

NSE是分布于神經(jīng)組織和內(nèi)分泌組織中的烯醇化酶，與神經(jīng)內(nèi)分泌組織起源的腫瘤發(fā)生密切相關(guān)[12]。目前已經(jīng)將NSE作為甲狀腺乳頭狀癌、肝癌等惡性腫瘤的高靈敏度和特異度的血清標(biāo)志物，在惡性腫瘤的輔助診斷、療效檢測(cè)中起到一定意義。已有研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者血清NSE明顯升高，且與患者病情嚴(yán)重程度相關(guān)[13-14]。CEA是一種酸性糖蛋白，多表達(dá)在內(nèi)胚層起源的消化道惡性腫瘤和正常胚胎的腸道中，在細(xì)胞從正常向癌變的轉(zhuǎn)化過(guò)程中，由于細(xì)胞基因調(diào)控受到損傷，胚胎細(xì)胞基因失調(diào)從而產(chǎn)生大量CEA釋放到血液中[15]。CYFRA21-1是存在肺上皮細(xì)胞中的可溶性蛋白，當(dāng)肺細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)CYFRA21-1可被釋放到血液組織液中，且其水平持續(xù)升高提示腫瘤的廣泛轉(zhuǎn)移[16]。本次研究中NSCLC患者血清NSE CEA、CYFRA21-1水平高于肺部良性病變者和健康人群，而良性病變組和健康組上述標(biāo)志物比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示NSE、CEA、CYFRA21-1對(duì)NSCLC的臨床輔助診斷具有重要鑒別意義。此外，血清NSE、CEA、CYFRA21-1水平與TNM分期相關(guān)，提示NSE、CEA、CYFRA21-1參與了NSCLC的發(fā)病發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，且與腫瘤病理進(jìn)展相關(guān)。NSE、CEA、CYFRA21-1作為常見(jiàn)腫瘤標(biāo)志物，目前已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)室診斷NSCLC的主要參考指標(biāo)，但其陽(yáng)性檢出率目前分別只有65%～75%、60%～70%、50%～65%等，因此尋找靈敏度、特異度更高的生物指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)具有重要意義[17]。SAA是體內(nèi)出現(xiàn)炎性反應(yīng)時(shí)水平異常升高的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，部分腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可通過(guò)釋放SAA重塑腫瘤微環(huán)境，從而促進(jìn)惡性腫瘤進(jìn)展[18]。SAA目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在多發(fā)性骨髓瘤、直腸癌等惡性腫瘤的分化、轉(zhuǎn)移、預(yù)后預(yù)測(cè)中起到一定作用[19]。DCLK1是一種微管相關(guān)激酶，其高表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞具有腫瘤肝細(xì)胞特性。有文獻(xiàn)報(bào)道，有一半以上的NSCLC患者血清中DCLK1的基因啟動(dòng)子甲基化，還能通過(guò)參與上皮-間質(zhì)化、增加腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療藥物敏感性等多個(gè)途徑影響腫瘤形成和發(fā)展[20]。本次研究中NSCLC組血清SAA、DCLK1水平均高于良性病變組和健康組，而良性病變組和健康組上述標(biāo)志物比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示SAA、DCLK1對(duì)NSCLC的臨床輔助診斷具有重要鑒別意義，且其表達(dá)水平與NSCLC臨床分期相關(guān)。此外，本次隨訪1年發(fā)現(xiàn)，生存時(shí)間≥1年NSCLC患者血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1水平低于生存時(shí)間<1年患者，提示血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1表達(dá)水平與NSCLC患者預(yù)后相關(guān)。繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)，血清NSE、CEA、CYFRA21-1、SAA、DCLK1預(yù)測(cè)預(yù)后不良(生存時(shí)間<1年)的AUC分別為0.514、0.525、0.673、0.648、0.762，聯(lián)合診斷的AUC為0.824，診斷效能高于單一診斷方式，且具有較高的靈敏度和特異度，提示聯(lián)合檢測(cè)對(duì)預(yù)測(cè)NSCLC預(yù)后具有重要臨床價(jià)值。

綜上所述，血清腫瘤標(biāo)志物NSE、CEA、CYFRA21-1及SAA、DCLK1在NSCLC患者中表達(dá)上調(diào)，且其聯(lián)合檢測(cè)對(duì)輔助NSCLC預(yù)后判斷有一定價(jià)值。