非布司他片原輔料相容性研究

方娟，叢茜

(1.昆明醫(yī)科大學(xué)，云南 昆明 650500；2.昆藥集團(tuán)股份有限公司，云南 昆明 650100)

0 引言

非布司他是一種非嘌呤類(lèi)黃嘌呤氧化還原酶選擇性抑制劑，能通過(guò)降低血尿酸鹽濃度發(fā)揮療效，且降尿酸效果優(yōu)于別嘌醇[1-3]。有研究[4-6]表明在療效及安全性方面，非布司他對(duì)于輕度、中度腎功能不全患者與別嘌醇相比更強(qiáng)效安全，不良反應(yīng)較別嘌醇更輕，多數(shù)停藥后可自行恢復(fù)。非布司他屬于BCSⅡ類(lèi)(難溶解高滲透性藥物)，分子式為C16H16N2O3S，熔點(diǎn)209℃，無(wú)吸濕性，性狀為白色結(jié)晶粉末，折射率為1.605，不含手性中心，不具有異構(gòu)體，具有pH依賴(lài)性[7]。非布司他的藥物半衰期在4.4~6.8 h之間，并且具有線(xiàn)性藥代動(dòng)力學(xué)特征[8]，非布司他是通過(guò)肝臟代謝而發(fā)揮作用的，在機(jī)體內(nèi)分別可通過(guò)二磷酸尿苷葡萄糖苷酸轉(zhuǎn)移酶的共價(jià)結(jié)合和細(xì)胞色素P450和非P450酶氧化廣泛代謝，進(jìn)而發(fā)揮作用[9]。目前非布司他除適用于輕度、中度腎功能不全高尿酸血癥患者之外，還可用于治療2型糖尿病腎病合并高尿酸血癥患者[10]，用于預(yù)防腫瘤溶解綜合征[11]，非布司他能降低合并高尿酸血癥的老年心力衰竭患者的血清尿酸水平，并可顯著改善心功能[12]。非布司他具有良好的市場(chǎng)前景及臨床療效，本文進(jìn)行非布司他原料與擬用輔料相容性研究，目的是考察在較苛刻的高溫、高濕及光照條件下，各擬用輔料是否與原料產(chǎn)生理化反應(yīng)，輔料是否影響主藥的檢測(cè)等。原輔料相容性試驗(yàn)是處方前研究的重要內(nèi)容，是處方篩選合理性的前提，為自制非布司他片的處方工藝研究提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器、藥品與試劑

非布司他對(duì)照品(中檢院，批號(hào)：101278-201502)；非布司他原料藥(昆藥集團(tuán)股份有限公司自制，批號(hào)：FB-20190704-1[過(guò) 200 目篩 ])；乳糖 (DFE，批號(hào)：659113，型號(hào)：200M)；部分預(yù)膠化淀粉(日本旭化成，批號(hào)：8103，型號(hào)：PC-10)；羥丙基纖維素(日本曹達(dá)，批號(hào)：NBI-2221，型號(hào)：SL)；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉 (日本旭化成，批號(hào)：X7G325，型號(hào)：ND-2HS)；硬脂酸鎂(曲阜天利，批號(hào)：190505)；薄膜包衣預(yù)混劑(上海卡樂(lè)康，批號(hào)：THL61603，型號(hào)：03F69012-CN 透明 )；乙腈 (MENCK，批號(hào)：TA087830)；十二烷基硫酸鈉，無(wú)水醋酸鈉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑科技有限公司，批號(hào)：20170118，20170303)；冰醋酸，氯化鈉，十二水磷酸氫二鈉，檸檬酸(一水)(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，批號(hào)：20180901，20191108，20181203，20120904)；鹽酸(云南楊林工業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)汕滇制藥有限公司，批號(hào)：20160906)；磷酸二氫鉀(西隴科學(xué)股份有限公司，批號(hào)：190222)，UP水(昆藥集團(tuán)股份有限公司自制)。

1.2 樣品制備

參照《中國(guó)藥典》(2015版第四部)9001原料藥物與制劑穩(wěn)定性指導(dǎo)原則進(jìn)行原輔料相容性試驗(yàn)，供試品可以用1批原料藥進(jìn)行，將供試品置適宜的開(kāi)口容器中(稱(chēng)量瓶)，攤成≦3mm厚的薄層，進(jìn)行試驗(yàn)。根據(jù)處方大致比例，相容性試驗(yàn)原料和輔料比例大致為 1：1，1：5，1：20，分別稱(chēng)量后，再分別在高溫(60℃±2℃)、高濕(濕度92.5%±5%)、光照(總照度不低于1.2×106Lux.hr、近紫外能量不低于200w.hr/m2)的條件下放置30天，分別于第0、5、10、30天取樣，考察物理性狀、含量、有關(guān)物質(zhì)、吸濕增重、高溫失重等項(xiàng)目的變化。同時(shí)做輔料空白對(duì)照和原料藥對(duì)照。擬使用以下輔料與非布司他原料藥進(jìn)行相容性試驗(yàn)，樣品制備見(jiàn)表1。

表1 樣品準(zhǔn)備表

上述樣品按順序稱(chēng)量后過(guò)60目篩混合均勻，每一樣品分為10份，將每一份樣品置于適合的開(kāi)口容器中(稱(chēng)量瓶或培養(yǎng)皿)，攤成≦3mm厚的薄層，疏松物料攤成≦5mm厚的薄層，最后將高溫與光照的樣品密封。

1.2.1 高溫試驗(yàn)

將上述所制得的原輔料相容性樣品在60℃±2℃烘箱中放置30d，分別于第0天、第5天、第10天、第30天取樣，以外觀性狀、非布司他含量、高溫失重及有關(guān)物質(zhì)為指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 高濕試驗(yàn)

將上述所制得的原輔料相容性樣品在濕度為92.5%±5%恒溫密閉容器中放置30d，分別于第0天、第5天、第10天、第30天取樣，以外觀性狀、非布司他含量、吸濕增重及有關(guān)物質(zhì)為指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 強(qiáng)光照射試驗(yàn)

將上述所制得的原輔料相容性樣品于光照箱中放置30d，分別于第0天、第5天、第10天、第30天取樣，以外觀性狀、非布司他含量、有關(guān)物質(zhì)及重量為指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 色譜條件

含量測(cè)定：色譜柱為Kromasil-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈 - 水 - 冰醋酸溶液 (600：400：2)，流速為1.5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為317nm，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為20μl。

有關(guān)物質(zhì)檢查：色譜柱為反相柱TSK gel ODS-80Ts(4.6×250mm，5μm)，以 0.02% 冰醋酸溶液為流動(dòng)相 A，以0.02%冰醋酸乙腈溶液為流動(dòng)相B；柱溫40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)217nm。進(jìn)行一定的梯度洗脫，進(jìn)樣量40μl。

1.4 樣品溶液的制備

含量測(cè)定：1對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取非布司他對(duì)照品約20mg，移至 100mL容量瓶中，加溶劑 (乙腈：水 =60：40)溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。再移取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL至10mL容量瓶中，加溶劑(乙腈：水=60：40)稀釋至刻度，制成每1mL中約含20μg的溶液，即得。2供試品溶液：分別按比例稱(chēng)取上述原輔料相容性樣品(約含非布司他200mg)，分別置于500mL容量瓶中，加溶劑(乙腈：水=60：40)適量，振搖30min，超聲處理10min，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1mL至20mL容量瓶中，用溶劑稀釋制成每1mL約含20μg的溶液，即得。

有關(guān)物質(zhì)：1供試品溶液：精密稱(chēng)定取原輔料相容性樣品(約含非布司他200mg)，置500mL量瓶中，加乙腈-水(95：5)溶液適量，超聲處理15min，用乙腈-水(95：5)溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1mL至20mL容量瓶中，用溶劑稀釋制成每1mL約含20μg的溶液，即得。2對(duì)照品溶液：取非布司他對(duì)照品20mg，精密稱(chēng)定，置100mL量瓶中，加乙腈-水(95：5)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL，置10mL量瓶中，用乙腈-水(95：5)溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2 結(jié)果

根據(jù)《化學(xué)藥物制劑研究基本技術(shù)指導(dǎo)原則》、中國(guó)藥典2015年版9001《原料藥與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》及非布司他片進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)(JX20130055)，原料藥的“顯著變化”包括性狀、有關(guān)物質(zhì)、含量測(cè)定等幾個(gè)方面的變化，雜質(zhì)限度為單個(gè)雜質(zhì)不得過(guò)0.2%，雜質(zhì)總量不得過(guò)0.5%。

由表2可知，高溫條件下，原輔料樣品性狀、含量和有關(guān)物質(zhì)均無(wú)明顯變化，說(shuō)明非布司他與輔料在高溫條件下穩(wěn)定。

由表3可知原輔料相容性樣品在高濕條件下以預(yù)膠化淀粉為輔料的樣品、非布司他與空白輔料樣品、空白輔料樣品吸濕增重明顯，非布司他原料藥樣品吸濕增重較低，說(shuō)明非布司他無(wú)吸濕性。

由表4可知，原輔料相容性樣品在光照條件下性狀發(fā)生明顯變化，粉末由白色變微黃，非布司他含量有所下降，雜質(zhì)A含量明顯增加，總雜亦增加，說(shuō)明非布司他在光照條件下不穩(wěn)定，會(huì)降解，需避光保存。

表4 原輔料相容性試驗(yàn)(光照)結(jié)果

續(xù)表3

3 討論

一般選擇藥用輔料時(shí)，輔料必須符合藥用要求，所用輔料不應(yīng)與主藥發(fā)生不良相互作用，不影響制劑的含量測(cè)定及有關(guān)物質(zhì)檢查。了解輔料與輔料，原料與輔料相互作用情況，進(jìn)行原輔料相容性研究，可避免處方設(shè)計(jì)時(shí)選擇不宜的輔料。選擇適宜的輔料，對(duì)后期處方篩選和優(yōu)化，初步確定處方有著重要作用。

續(xù)表4

從上述所得的數(shù)據(jù)看，在光照條件下，非布司他原料藥含量明顯下降，性狀從白色變?yōu)槲ⅫS色，有關(guān)物質(zhì)也顯著增加。非布司他結(jié)構(gòu)中含有氰基和羧基，光照下雙分子非布司他中的氰基、羧基分別均裂后彼此發(fā)生自由基反應(yīng)得雙分子環(huán)合產(chǎn)物[13]。在強(qiáng)光照射的條件下原輔料可能發(fā)生物理與化學(xué)反應(yīng)也導(dǎo)致雜質(zhì)含量增加。預(yù)膠化淀粉的部分游離支鏈淀粉的親水性使得部分支鏈淀粉快速濕潤(rùn)吸水而膨脹[14]，在高濕條件下，以部分預(yù)膠化淀粉為輔料的溶液中，預(yù)膠化淀粉會(huì)吸水，具有優(yōu)良的膨脹性，吸濕增重顯著。分別以羥丙基纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉為輔料的相容性樣品在高濕條件下重量也有所增加，羥丙基纖維素為親水性高分子，可以從空氣中吸收水分，具有吸潮性，但性質(zhì)穩(wěn)定，是一種具有溫度敏感性的纖維素衍生物[15]，交聯(lián)羧甲纖維素鈉是羧甲基纖維素鈉的交聯(lián)聚合物，當(dāng)與水接觸后，能溶脹[16]。試驗(yàn)結(jié)果表明：非布司他片應(yīng)在常溫條件下避光密閉保存。綜上所述，非布司他與乳糖、部分預(yù)膠化淀粉、羥丙基纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂以及薄膜包衣劑相容性好。