腦梗死患者PEAR1、PTGS1基因交互作用與阿司匹林抵抗的相關(guān)性分析

王玲玲，楊 華，高 妍

(北華大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132011)

有研究[1]顯示：動(dòng)脈粥樣硬化是缺血性腦梗死(cerebral infaction，CI)最常見的病因.在動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成的過程中，血小板在發(fā)病機(jī)制中起核心作用，可引起血流剪切力重構(gòu)，促使血小板活化與聚集.因此，抗血小板藥物治療在缺血性腦卒中患者的急性期治療及Ⅱ級預(yù)防中具有重要作用.在《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》中推薦，缺血性腦卒中患者應(yīng)在明確診斷后盡早給予口服阿司匹林150～300 mg/d治療(Ⅰ級推薦，A級證據(jù))[2].目前，已有大約100個(gè)隨機(jī)臨床試驗(yàn)證實(shí)了阿司匹林在預(yù)防缺血性卒中方面的有效性和安全性[3].然而，由于個(gè)體差異，患者應(yīng)用阿司匹林后，仍有缺血性腦卒中事件發(fā)生，即阿司匹林抵抗(Aspirin resistance，AR).因此，為提高阿司匹林的治療效果，探討阿司匹林抵抗的機(jī)制尤為重要.本研究以缺血性腦卒中患者尿液11-DH-TXB2含量(2 500 pg/mg)為阿司匹林抵抗的界定標(biāo)準(zhǔn)，探討PEAR1和PTGST基因型與缺血性腦卒中患者阿司匹林抵抗的關(guān)系，為缺血性腦卒中患者應(yīng)用合理的Ⅰ級和Ⅱ級防治提供參考.

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2019年8月—2020年9月在北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的100例患者為研究對象，所有患者均符合《中國急性缺血性卒中診治指南2018》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)過頭部CT及MRI明確有新發(fā)病灶且滿足規(guī)律服用阿司匹林(100 mg/d)單抗治療.尿液11-DH-TXB2含量小于2 500 pg/mg為活性正常，即阿司匹林敏感(Aspirin sensitivity，AS)組(85例，其中，男57例，女28例；年齡30～89歲，平均(63.31±11.26)歲)；尿液11-DH-TXB2含量大于2 500 pg/mg為活性異常，即阿司匹林抵抗(AR)組(15例，其中，男13例，女2例；年齡43～84歲，平均(63.28±10.18)歲).本研究納入的患者均經(jīng)北華大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，并簽署知情同意書.

1.2 研究方法

記錄所有入組患者一般情況和既往病史，包括性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、吸煙史、飲酒史、高血壓病史、糖尿病史.

尿液11-DH-TXB2測定及判斷標(biāo)準(zhǔn)：所有入組患者入院次日清晨留取中段尿液，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定11-DH-TXB2.

基因型多態(tài)性檢測：應(yīng)用熒光檢測儀及測序反應(yīng)通用試劑盒(博奧生物科技有限公司)進(jìn)行基因型分析.檢測樣本要求2～3 mL靜脈全血(空腹及進(jìn)食均可)，使用一次性真空抽血管采集，于4 ℃低溫保存，保存時(shí)間不宜超過24 h.

數(shù)據(jù)賦值：將所有入組患者的物理指標(biāo)及尿液11-脫氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)結(jié)果進(jìn)行賦值，計(jì)數(shù)變量包括性別(男：1、女：2)、高血壓病史、糖尿病史、吸煙史、飲酒史(均為否：0、是：1)，尿液11-脫氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)(質(zhì)量分?jǐn)?shù)小于2 500 pg/mg：0、大于2 500 pg/mg：1).

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 20.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用百分率(%)或構(gòu)成比表示，組間差異采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法；將單因素分析P<0.05的變量納入多因素logistic回歸分析，兩因素交互作用的研究采用相加模型，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié) 果

2.1 一般資料及基因型與阿司匹林抵抗的單因素分析

兩組基線臨床資料比較，結(jié)果顯示：PEAR1基因型、性別、BMI、高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒史兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).阿司匹林抵抗組PTGS1基因GG比例高于敏感組，兩組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).見表1.

表1 一般資料Tab.1 General data

2.2 PEAR1、PTGS1基因型與阿司匹林抵抗的Logistic回歸分析

PEAR1、PTGS1基因型與阿司匹林抵抗的Logistic回歸分析結(jié)果顯示：PTGS1與AR呈正相關(guān)，GG基因型患者發(fā)生AR的概率是AG/AA基因型的16.495倍(95%CI 4.076～66.754)，因此，基因PTGS1 GG型是AR的危險(xiǎn)因素.PEAR1基因與AR無相關(guān)性(P>0.05).見表2.

表2 PEAR1、PTGS1基因型與阿司匹林抵抗的Logistic回歸分析Tab.2 Logistic analysis between genotype of PEAR1，PTGS1 and Aspirin resistance

2.3 PEAR1、PTGS1兩基因型交互作用與阿司匹林抵抗的關(guān)系

以干擾因素陰性(-/-)為對照度分析其交互作用，取OR值為1，結(jié)果顯示：PTGS1基因多態(tài)性為GG型且PEAR1基因多態(tài)性為AG/AA時(shí)，OR值增加，兩基因?qū)Π⑺酒チ值挚沟陌l(fā)生存在交互作用，RERI=9.343，API=17.628%.見表3.

表3 基因型PEAR1與PTGS1的交互作用Tab.3 Interaction between PEAR1 and PTGS1

3 討 論

目前，缺血性腦卒中呈日益漸增的趨勢，且越發(fā)年輕化，因此，缺血性腦卒中的Ⅰ級和Ⅱ級預(yù)防顯得尤為需要.阿司匹林是一種較為常見的抑制血小板聚集藥物，目前，被普遍用于腦梗死的防治中，可有效改善腦梗死的發(fā)生和再發(fā)率，降低死亡率[4-5].據(jù)報(bào)道[6]，有部分患者服用阿司匹林的患者對阿司匹林敏感性降低，導(dǎo)致血小板聚集不能被有效抑制，再次發(fā)生臨床血栓事件.根據(jù)臨床觀察及研究發(fā)現(xiàn)，部分患者雖然規(guī)律口服常規(guī)劑量阿司匹林，仍然不能達(dá)到預(yù)期的療效，即產(chǎn)生阿司匹林抵抗.近年來，關(guān)于阿司匹林抵抗的機(jī)制備受關(guān)注，但尚不清楚其具體的發(fā)生機(jī)制，這可能與患者使用藥物的依從性、年齡、性別、BMI、藥物劑量、同時(shí)服用其他藥物等因素有關(guān).有研究[7]顯示：基因多態(tài)性在AR過程中具有關(guān)鍵性作用.

目前，探討阿司匹林抵抗的研究方法不一，尚未得到一致的診斷標(biāo)準(zhǔn).尿液中11-DH-TXB2含量檢測是目前臨床針對阿司匹林代謝較為便捷的檢測方法.血栓素(TX)A2是阿司匹林發(fā)揮藥效的作用主體，但TXA2是一種不穩(wěn)定的化合物，其血漿半衰期短于30 s，很難測量[8].TXA2迅速失活為TXB2，進(jìn)一步脫氫為11-DH-TXB2，11-DH-TXB2是一種尿液中穩(wěn)定的代謝物.大量研究[9-11]顯示：11-DH-TXB2含量檢測可反應(yīng)體內(nèi)TXA2總含量，并以尿液11-DH-TXB2含量2 500 pg/mg為界值劃分是否存在阿司匹林抵抗.

本研究納入100例腦梗死患者，其中，阿司匹林敏感組85例，阿司匹林抵抗組15例，比較分析兩組的一般資料，結(jié)果顯示：PEAR1基因型、性別、BMI和高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒史兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).阿司匹林抵抗組PTGS1基因GG比例高于敏感組，兩組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明缺血性腦卒中患者PTGS1基因型GG與AR有關(guān)聯(lián).有研究[12-15]認(rèn)為，PEAR1的一個(gè)基因變異位點(diǎn)(rs12041331)等位基因A的患者血小板聚集率相對減低；還有研究[16-17]也證實(shí)，GG基因型是阿司匹林抵抗的獨(dú)立危險(xiǎn)因素.而患者的性別、BMI、高血壓史、糖尿病史、吸煙史及飲酒史對AR并不存在影響.將兩組間PEAR1、PTGS1基因型與阿司匹林抵抗進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示：PTGS1是AR的影響因素，并且GG基因型患者發(fā)生AR的概率是AG/AA基因型的24.489倍(95%CI 4.910～122.150)，說明通過多因素分析排除了多種混雜危險(xiǎn)因素對統(tǒng)計(jì)結(jié)果的影響，PTGS1基因型GG在AR中具有獨(dú)立的影響作用，在病因中占比較大(OR=24.489).

VOORA等[18]的研究通過對規(guī)律服用阿司匹林6個(gè)月后的患者進(jìn)行隨訪，結(jié)果顯示多個(gè)基因與體外阿司匹林抵抗相關(guān).本研究并未發(fā)現(xiàn)PEAR1基因型與阿司匹林抵抗之間的關(guān)系(P>0.05)，AR是多種危險(xiǎn)因素交互作用下的結(jié)果，各因素間既各自獨(dú)立，但又相互協(xié)同或拮抗影響.為進(jìn)一步探討基因多態(tài)性與AR之間的關(guān)系，本研究分析了PEAR1與PTGS1基因型之間的交互作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PTGS1基因型為GG且PEAR1基因型為AG/AA時(shí)，RERI為9.343，API為17.628%，說明兩基因多態(tài)性之間存在交互作用，提示當(dāng)這兩個(gè)因素共存時(shí)，17.628%的阿司匹林抵抗是由于兩基因型交互協(xié)同作用所致，進(jìn)一步說明PTGS1基因型為GG且PEAR1基因型為AG/AA共存時(shí)，阿司匹林抵抗的發(fā)生大于其他基因類型單獨(dú)因素存在時(shí)所致的效應(yīng)之和.