妊娠期高血壓疾病血白細(xì)胞水平與胎盤FaS基因表達(dá)的相關(guān)性研究

楊微微，梅麗娜，王家建，陸艷

有研究表明妊娠期高血壓疾?。℉DCP）患者胎盤中Fas的表達(dá)顯著高于正常孕婦[1-2]。外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)水平升高與高血壓患病和發(fā)生風(fēng)險有關(guān)，慢性炎癥參與高血壓的發(fā)生和發(fā)展[3]，但關(guān)于各類外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)對HDCP疾病影響的研究較少，關(guān)于外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)和Fas基因相關(guān)性的研究更少。本研究擬通過檢測白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及胎盤組織中Fas 基因miRNA的表達(dá)量情況，進(jìn)一步探討各類外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)水平和Fas 基因表達(dá)對HDCP的影響及相關(guān)性，旨在為HDCP的防治提供參考。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2017 年1—6 月浙江省湖州市婦幼保健院收治的妊娠期高血壓（HDP）患者和重度子癇前期患者各30例，分別納入HDP 組和重度子癇前期組，HDP及重度子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn)參照第9 版《婦產(chǎn)科學(xué)》診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。另納入同期30例無妊娠合并癥且選擇擇期剖宮產(chǎn)的正常妊娠孕婦作為對照組。排除：多胎妊娠、糖尿病、慢性高血壓、心腦血管病、自身免疫性疾病、慢性腎臟病史、甲狀腺功能亢進(jìn)、妊娠并發(fā)癥（前置胎盤、胎盤早剝、母兒血型不合）、復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)、長期吸煙及孕期或長期特殊用藥者。本研究方案經(jīng)湖州市婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（倫理批號：2021-013）。所有納入研究的孕婦均簽署知情同意書。

1.2 方法 入院第2天清晨空腹?fàn)顟B(tài)下，在肘靜脈處采集1～2 ml 靜脈血置于抗凝管中，用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝，采用希森美原裝標(biāo)準(zhǔn)試劑經(jīng)XN9000 全自動血液細(xì)胞分析儀檢測患者血液指標(biāo)，包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)?；颊咂蕦m產(chǎn)術(shù)中胎盤娩出后，立即在胎盤母體面正中近臍帶處取250～500 mg的組織，避開出血、壞死組織及鈣化部位，立即置入液氮浸沒以便迅速降溫，液氮運(yùn)輸。標(biāo)本離體取樣后立即保存在－80℃中。采用美國Applied Biosystems 公司訂制莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物、熒光PCR 引物和探針，取10 ng RNA采用AppliedBiosystems 公司的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（TaqMan?MicroRNAReverseTranscription Kit）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，熒光定量PCR法檢測各組胎盤組織中的Fas 基因miRNA 表達(dá)情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-檢驗(yàn)；采用Spearman 相關(guān)性分析。＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組一般資料比較 3 組年齡及孕次差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＞0.05），3 組孕周差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05），見表1。

表1 3 組一般資料比較

2.2 3 組血白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)比較 3 組血白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＜0.05），重度子癇前期組血白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于對照組（均＜0.05），HDCP 組白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于對照組（均＜0.05），重度子癇前期組淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)高于HDCP 組（＜0.05），見表2。

表2 3 組血白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)比較 ×109/L

2.3 3 組Fas 基因miRNA 表達(dá)情況 HDP組和重度子癇前期組Fas 基因miRNA 表達(dá)量均高于對照組（均＜0.05），見圖1及表3。

表3 3 組Fas 基因miRNA 表達(dá)情況

圖1 Fas 基因miRNA的熒光定量PCR 溶解曲線圖

2.4 相關(guān)性分析 外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與胎盤中Fas表達(dá)均呈正相關(guān)（=0.400、0.421、0.277，均＜0.05）。

3 討論

HDCP 發(fā)生的重要環(huán)節(jié)在于血管內(nèi)皮的損傷和免疫功能的失調(diào)，其體內(nèi)的多種炎癥因子與正常孕婦存在明顯差異[5]。白細(xì)胞是人體血液中非常重要的一類血細(xì)胞，參與機(jī)體的免疫炎癥反應(yīng)。當(dāng)病菌侵入人體體內(nèi)時，白細(xì)胞能通過變形而穿過毛細(xì)血管壁，集中到病菌入侵部位，將病菌包圍和吞噬。近年來研究表明，白細(xì)胞計(jì)數(shù)與高血壓的發(fā)生風(fēng)險存在相關(guān)性[6]；Kim等[7]對韓國15654 名健康體檢者進(jìn)行橫斷面研究，結(jié)果提示白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞計(jì)數(shù)水平升高與高血壓患病風(fēng)險增加有關(guān)。本研究結(jié)果顯示外周血白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞與HDCP的發(fā)生存在密切關(guān)系，且隨疾病嚴(yán)重程度的增加而升高。Amidu 等[8]研究顯示淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)增加與HDCP的嚴(yán)重程度相關(guān)；本研究也進(jìn)一步證實(shí)不同血白細(xì)胞參數(shù)對HDCP的發(fā)生和發(fā)展有一定的預(yù)測價值，重度子癇前期組白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)高于對照組（均＜0.05），這說明炎癥反應(yīng)是引起HDCP特別是重度子癇前期的一個重要因素。

Fa（sCD95/APO-1）是一種I類跨膜蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體（TNF/NGF）超家族[9]。Fas/FasL系統(tǒng)的通過清除過多的活化淋巴細(xì)胞以維持免疫系統(tǒng)的內(nèi)穩(wěn)定[10]。有研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)免疫組化分析檢測HDCP 胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞Fas表達(dá)明顯升高[11]；Fas的異常表達(dá)在子癇前期的發(fā)病過程中也扮演著重要角色[12]。本研究結(jié)果顯示Fas 基因miRNA 表達(dá)量水平在HDP 組及重度子癇前期組中明顯高于對照組，且在重度子癇前期組中Fas 基因miRNA的表達(dá)量高于HDP 組（均＜0.05）；這證實(shí)Fas基因miRNA的表達(dá)量與HDCP的發(fā)生及發(fā)展有密切關(guān)系。HDCP的基本病理改變是全身小血管的痙攣，Allaire等[13]發(fā)現(xiàn)HDCP患者胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞FaS 表達(dá)顯著高于正常組，分析認(rèn)為滋養(yǎng)細(xì)胞Fas高表達(dá)致使孕婦循環(huán)血中白細(xì)胞凋亡延遲。本研究結(jié)果顯示外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與胎盤中Fas 表達(dá)均呈正相關(guān)性（均＜0.05）。因此，白細(xì)胞計(jì)數(shù)水平檢測作為基層水平的普遍檢測手段，對HDCP的診斷及病情進(jìn)展有較高的臨床應(yīng)用價值。