對一例草魚細(xì)菌性“三爛病”診斷及藥物治療技術(shù)的介紹

○陳昌福周鑫軍油九菊夏楓峰

（1 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢 430070；2 武漢科研時代生物技術(shù)有限公司，武漢 430418；3 浙江省舟山市海洋與漁業(yè)局，浙江 舟山 316000）

草 魚（Ctenopharyngodon idella）因為其肉味鮮美而深受我國水產(chǎn)品消費者的歡迎。多年來，在我國的主要的淡水水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)域，草魚的養(yǎng)殖產(chǎn)量幾乎都是最高的。近年來，也許是由于單位面積內(nèi)草魚養(yǎng)殖密度大幅度增加等原因，人工養(yǎng)殖草魚細(xì)菌性“三爛病”（圖1）日趨嚴(yán)重，有效治療還比較困難，已經(jīng)給不少的草魚養(yǎng)殖業(yè)者造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

圖1 處于不同病理發(fā)展時期的草魚細(xì)菌性“三爛病”癥狀

2021年7月14日，湖北省武漢市新洲區(qū)汪集鎮(zhèn)草魚養(yǎng)殖業(yè)者陶華剛先生送來幾尾患病草魚，尋求診治草魚疾病的方法與措施。

為了滿足草魚養(yǎng)殖業(yè)者陶華剛先生的要求，我們對送來的患病草魚在完成疾病診斷的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了從患病魚體內(nèi)的致病菌分離，并且在針分離菌株完成了治病藥物篩選后，最終完成了藥物治療效果試驗。取得了良好的藥物治療效果，現(xiàn)將診治過程介紹如下，僅供廣大的草魚養(yǎng)殖業(yè)者參考。

1 材料與方法

1.1 患細(xì)菌性“三爛病”草魚癥狀描述

經(jīng)過對送診者陶華剛先生問診關(guān)于養(yǎng)殖草魚的患病情況，以及對患病草魚的肉眼、顯微鏡檢查，得知這些患病草魚發(fā)病過程及呈現(xiàn)有如下主要疾病癥狀。

根據(jù)陶華剛先生對其飼養(yǎng)草魚患病過程的敘述，在7月初，養(yǎng)殖面積為8.3畝的池塘中出現(xiàn)有個別草魚身體發(fā)黑、遛邊、攝食量出現(xiàn)下降的現(xiàn)象，隨著時間的推移，少數(shù)患病草魚體表還出現(xiàn)了點狀或塊狀紅斑并開始出現(xiàn)每天數(shù)尾乃至數(shù)十尾的死亡。從7月6日開始，養(yǎng)殖業(yè)者開始采用碘制劑、苯扎溴銨等消毒劑全池潑灑消毒，并且先后使用多種抗生素類漁藥制劑拌飼料投喂。結(jié)果是經(jīng)過幾天時間的連續(xù)用藥，沒有出現(xiàn)可見的藥物治療效果，死魚數(shù)量呈現(xiàn)與日俱增的趨勢，至7月11日，死亡數(shù)量高達(dá)每天1250多尾。

對送來實驗室的幾尾患病草魚進(jìn)行肉眼觀察，發(fā)現(xiàn)患病魚體表有潰瘍癥狀（圖1）。取少量鰓絲制作成水浸片，在顯微鏡下檢查時，僅觀察到為數(shù)不多的車輪蟲。對患病草魚體內(nèi)外其他器官與組織進(jìn)行寄生蟲檢查時，也未觀察到其他的寄生蟲。因此，認(rèn)為這些草魚的疾病不是由某種寄生蟲引起的。

解剖患病草魚觀察其內(nèi)部臟器時，可見患病魚體全部腸道呈現(xiàn)明顯出血癥狀（圖2），腸道內(nèi)充氣而沒有食物。其他臟器未觀察到異常癥狀。

圖2 對患細(xì)菌性“三爛病”草魚解剖后的肉眼觀察

1.2 致病菌株的分離

在無菌條件下，用接種環(huán)從患病草魚腎臟中采樣，在腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基（BHIA，Difco）平板上作劃線分離，在28℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時后，從培養(yǎng)皿中挑取單個菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。用純化培養(yǎng)獲得的5個分離菌株（菌株編號分別為：CYS01、CYS02、CYS03、CYS04和 CYS05）做藥物敏感性檢測。同時，分別將不同分離菌株轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，低溫保存。

1.3 供試藥物

本次選擇的8種抗菌藥物原料藥分別是，氨芐西林鈉（Ampicillin，湖北威德利化學(xué)科技有限公司，含量99.8%，批號：20210418），恩諾沙星（Enrofloxacin，華北制藥有限公司，含量：98.5%，批號：20210312），鹽酸土霉素（Oxytetracycline，華北制藥有限公司，含量：96.5%，批號：20210205），硫酸新霉素（Neomycin sulphate，華北制藥有限公司，批號：20210324），強力霉素（Hydramycin，華北制藥有限公司，批號：20210105），甲砜霉素（Thiamphenicol，華北制藥有限公司，批號：20210211），氟苯尼考（Florfenicol，華北制藥有限公司 ，批 號 ：20210209），金 霉素（Chlortetracycline，華北制藥有限公司，批號：20210307）等8種抗菌素藥物用于對分離菌的藥物敏感性試驗。

1.4 最小抑菌濃度（MIC）的測定

依日本化學(xué)療法學(xué)會制定的標(biāo)準(zhǔn)法進(jìn)行。首先將供試藥物用適宜的容媒預(yù)溶后，在無菌條件下，取定量的藥液，在盛有滅菌腦心浸液（BHI，Difco）培養(yǎng)基試管中，做2倍系列的稀釋。制作成藥物濃度分別為 100.0μg/L、50.0μg/L、25.0μg/L、12.5μg/L、6.25μg/L、3.13μg/L、1.56μg/L、0.78μg/L、0.39μg/L、0.20μg/L 和0.10μg/L的藥物系列培養(yǎng)基試管。最后，定量吸取0.1mL的活菌液加入上述每支試管中，搖勻。置于28℃條件下培養(yǎng)78小時，經(jīng)肉眼觀察證實無細(xì)菌生長試管中的最低藥物濃度，即為藥物的最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）。

1.5 對治療用藥物的選擇建議

根據(jù)對分離菌株進(jìn)行的藥物敏感性試驗結(jié)果，選擇金霉素作為拌餌口服藥物，以抑制或者殺滅病魚體內(nèi)的致病菌。在投喂口服抗菌素類藥物的同時，采用二氧化氯（ClO2，從武漢市新洲區(qū)黃集鎮(zhèn)漁藥市場上購買某公司生產(chǎn)的產(chǎn)品，生產(chǎn)批號為20210402，含量為6.8%）作為外用藥物，采取全池潑灑法用藥，以控制養(yǎng)殖池水中的致病菌。

根據(jù)養(yǎng)殖池塘內(nèi)養(yǎng)殖草魚及其它吃飼料魚類的數(shù)量，計算出養(yǎng)殖池塘內(nèi)藥物用量后，首先將金霉素采用食用醋預(yù)溶后，在混合于面粉糊中，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，再潑灑在顆粒飼料上混合均勻，在陰涼處晾干后投喂。按照藥物敏感性檢測結(jié)果，確定金霉素的投喂量為18.0mg/kg魚體重。每天投喂藥物餌料1次，連喂5天為一個療程。

在投喂藥物餌料的當(dāng)天，在試驗池塘中潑灑ClO2，臨用前剪開ClO2的包裝袋，并準(zhǔn)確稱取所需量，用適量水將ClO2溶解后，在試驗池塘內(nèi)全池潑灑，使飼養(yǎng)池水中的ClO2濃度達(dá)到0.40mg/L，間隔1天后再潑灑1次，連續(xù)潑灑2次。

1.6 療效判定

當(dāng)用藥開始后，每天統(tǒng)計各個飼養(yǎng)池中的死亡草魚的數(shù)量，直到最后1次用藥結(jié)束后的第7天為止。參照用藥后的有效率，對藥物防治細(xì)菌病的效果進(jìn)行評價。

2 結(jié)果

2.1 抗生素對分離菌株的最小抑菌濃度（MIC）

8種抗菌藥物在試管內(nèi)對從患病草魚體內(nèi)分離的5個菌株的MIC測定結(jié)果如表1所示。

由表1所示結(jié)果可以看出，在8種供試藥物中，以金霉素和鹽酸土霉素對幾個分離菌株的抑菌活性最強，其他幾種抗菌藥物對分離菌株的抑菌效果均相對較差。

表1 各種抗抗菌素類藥物對分離菌株的最小抑菌濃度

2.2 藥物治療效果

選擇對分離菌株具有較好抑菌和殺菌效果的金霉素作為本試驗的治療藥物。在患病草魚養(yǎng)殖池塘用藥。根據(jù)全池吃飼料魚體的重量，計算用藥量（按照18.0mg/kg魚體重，如何根據(jù)獲得的藥敏試驗結(jié)果，計算用藥量的方法，請參照我們以往發(fā)布的多篇文章）后，將每天全部用藥量拌和在草魚飼料中投喂，每天投喂1次藥物餌料，連續(xù)用藥5天。

用金霉素作為治療藥物，對患病草魚的藥物治療效果如表2所示。由表2所示試驗結(jié)果可以看出，用藥后的治療效果是很明顯的。

表2 投喂金霉素制備藥物餌料后患病草魚死亡數(shù)量的變化

3 討論

關(guān)于引起草魚細(xì)菌性“三爛病”的致病菌，已經(jīng)在過去的研究中獲得了明確的結(jié)論。我們雖然從患病草魚體內(nèi)分離到了5個菌株，但是，我們尚未對分離菌株完成種類鑒定。不過，根據(jù)對分離菌株完成的藥物敏感性試驗結(jié)果，選擇對分離菌株具有良好抑制和殺菌效果的抗菌類藥物，拌和在草魚的餌料中連續(xù)投喂5天，能有效地控制住草魚細(xì)菌性“三爛病”的蔓延。所以，藥物治療疾病的結(jié)果間接地證明了引起草魚“三爛病”的病原可能是些致病細(xì)菌。

由細(xì)菌性病原引起的水產(chǎn)動物疾病，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)者除了可以采用細(xì)菌性疫苗提前預(yù)防外，一旦疾病發(fā)生后，大都只能依靠采用各種抗菌藥物進(jìn)行治療。但是，如果使用者對抗菌類藥物的選擇或者使用不當(dāng)，如用藥劑量不足或者沒有按照藥物適應(yīng)癥用藥，以及隨意混用各種抗菌素類藥物的話，不僅難以獲得理想的藥物治療效果，還可能會導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生耐藥性。本研究采取從患病魚體中分離致病菌株，在完成藥物敏感性試驗后，選擇對分離菌株具有良好抑制和殺滅效果的藥物用于治療疾病，有效地避免了上述現(xiàn)象的發(fā)生。

這次成功地治療草魚細(xì)菌性“三爛病”的實例，再一次告訴我們，草魚的細(xì)菌性疾病是可以有效地治療的。但是，前提就是要利用實驗結(jié)果，找到適宜的抗生素類藥物并且根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，真正做到精準(zhǔn)用藥。