雞新城疫抗體檢測(cè)技術(shù)在診斷中的應(yīng)用

文│李媛（廣西壯族自治區(qū)北海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

雞新城疫（Newcastle Disease，以下簡(jiǎn)稱ND）是副黏病毒引起的一種傳染性疾病，病雞以消化道和呼吸道癥狀為主，可導(dǎo)致病雞死亡。此病無(wú)明顯季節(jié)性特征，也沒(méi)有年齡特征，四季均可發(fā)病，尤其是氣候寒冷或者季節(jié)交替時(shí)節(jié)，任何階段的雞都可能發(fā)病，且死亡率較高。由于此病的感染性較強(qiáng)，一旦發(fā)病往往難以有效控制，從而導(dǎo)致雞大面積死亡，因此日常的防疫和監(jiān)測(cè)是關(guān)鍵。采用雞新城疫抗體檢測(cè)技術(shù)可以準(zhǔn)確評(píng)估免疫抗體水平，從而判斷雞群對(duì)雞新城疫的抵抗能力，及早預(yù)防（Newcastle Disease Virus，以下簡(jiǎn)稱NDV）。

一、病例情況

2019年3月，某雞場(chǎng)的雞突然發(fā)病，病雞主要癥狀為呼吸困難，發(fā)熱，嗉囊積液，下痢，糞便為黃白色、綠色或者黃綠色，口角分泌酸臭液體，雙腿麻痹，無(wú)法正常站立。該雞場(chǎng)為50日齡肉雞，存欄量2100只，常規(guī)免疫。發(fā)病后，該養(yǎng)雞場(chǎng)采取了無(wú)害化處理措施，但仍有大量雞只死亡，發(fā)病率超過(guò)85%，死亡1400余只，死亡率70%以上，經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重。

二、剖檢變化

病雞喉頭、氣管出血，氣管中有少量黏液；小腸前端、十二指腸以及盲腸扁桃體有點(diǎn)狀或斑狀出血，部分病雞腸道潰瘍，脾腫大有白色壞死點(diǎn)，肺、肝和腎無(wú)明顯病變；病雞體內(nèi)多部位黏膜與漿膜出血，盲腸以及盲腸扁桃體腫脹出血，心冠脂肪以及心外膜點(diǎn)狀出血。

三、雞新城疫實(shí)驗(yàn)室診斷

1.細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)。隨機(jī)取病死雞解剖，取心臟、肝和脾制作組織觸片，分別做革蘭氏染色和美藍(lán)染色鏡檢，未見(jiàn)病原菌。采用上述病料分別接種血瓊脂平板、普通瓊脂平板和SS瓊脂平板，置恒溫箱37℃，培養(yǎng)24小時(shí)，無(wú)菌落，重復(fù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)仍無(wú)菌落，提示病原與細(xì)菌無(wú)關(guān)，考慮進(jìn)行病毒分離試驗(yàn)。

2.病毒分離試驗(yàn)。無(wú)菌操作取病死雞脾以及腦組織，碾碎研磨后經(jīng)2次凍融，配置青霉素與鏈霉素含量為1000毫升的無(wú)菌生理鹽水，按照1∶5的比例進(jìn)行稀釋，然后以4000轉(zhuǎn)/分的速率離心處理15分鐘，靜置后取上清液，放置在冰箱中4～12小時(shí)，冰箱溫度控制在4℃。

（1）雞胚接種。選取11日齡SPE雞胚30枚，將處理后的上清液經(jīng)尿囊腔接種，每個(gè)雞胚接種0.2毫升，然后采用石蠟進(jìn)行封存并繼續(xù)孵化，24小時(shí)內(nèi)若雞胚死亡則予以剔除，此后每間隔2～4小時(shí)照蛋1次，死亡的雞胚放置在冰箱中備用，冰箱溫度控制在4℃。

（2）病毒鑒定。病毒血凝試驗(yàn)：收獲新鮮感染雞胚尿囊液進(jìn)行血凝試驗(yàn)，以微量法在血凝板上進(jìn)行2倍比稀釋，同時(shí)設(shè)置生理鹽水作為對(duì)照孔，每孔加入1%雞紅細(xì)胞并振蕩均勻，靜置20℃環(huán)境下40分鐘，觀察試驗(yàn)結(jié)果。對(duì)照孔雞紅細(xì)胞呈紐扣狀沉底，病毒有凝集性，表明該病毒有血凝性特征。抗NDV陽(yáng)性血清血凝抑制試驗(yàn)，操作如上，試驗(yàn)結(jié)果如表1所示。前4孔有凝集現(xiàn)象，因ND陽(yáng)性血清的效價(jià)較低、病毒濃度偏高所致；第3孔往后病毒對(duì)雞紅細(xì)胞的凝集作用完全被ND陽(yáng)性血清抑制。試驗(yàn)表明，從病死雞身上提取的脾以及腦組織分離出的病毒，對(duì)雞紅細(xì)胞具有凝集作用，而凝集作用可以完全被ND陽(yáng)性血清抑制，表明該病毒與NDV存在相關(guān)性。

表1 抗NDV陽(yáng)性血清血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果

（3）抗體檢測(cè)。對(duì)雞進(jìn)行ND抗體檢測(cè)，運(yùn)用血凝和血凝抑制試驗(yàn)（GB/T16550-2020），檢測(cè)抗體是否異常升高，結(jié)合臨床癥狀、剖檢變化和病毒分離鑒定，綜合診斷為ND感染。對(duì)該雞場(chǎng)按不少于10%的比例隨機(jī)抽取30只雞做ND抗體檢測(cè)，結(jié)果為其中26只雞ND抗體高于11log2，抗體水平異常升高，結(jié)合臨床癥狀、剖檢變化和病毒分離鑒定，提示該雞場(chǎng)的雞可能感染新城疫強(qiáng)毒。

四、雞新城疫抗體檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用

1.雛雞首免。雛雞體內(nèi)母源抗體在接近消失或者剛消失時(shí)進(jìn)行首次免疫，可以取得良好的效果。一般情況下，雛雞出殼1天后即采集雛雞血液，測(cè)試雛雞HI效價(jià)，在中、大型雞場(chǎng)，采用抽樣測(cè)試的方式，抽樣率不得小于0.1%；否則，不具備參考價(jià)值。若是小型雞場(chǎng)，則抽樣率不低于2%；否則，不具備參考價(jià)值。抽樣測(cè)試后計(jì)算雞群的平均HI效價(jià)，然后根據(jù)計(jì)算公式得出雛雞首免日齡，計(jì)算公式如下：首免日齡＝4.5×（1日齡雞群平均HI效價(jià)－4）＋5。該養(yǎng)殖場(chǎng)經(jīng)抽樣測(cè)試后得出的雞群HI平均效價(jià)是7.5log2，則雛雞首免日齡即為4.5×（6.5－4）＋5＝11.75日齡，即在雛雞12日齡進(jìn)行首次免疫接種可以獲得最好的免疫效果。

2.定期抽檢。雛雞進(jìn)行首次免疫接種后，需要定期對(duì)其進(jìn)行抽檢，評(píng)估免疫效果，若免疫抗體滴度70%以上達(dá)到5log2及以上，說(shuō)明免疫效果良好，正常飼養(yǎng)即可；若免疫抗體滴度下降或者無(wú)效，要及時(shí)進(jìn)行二次免疫接種。一般在首次免疫接種后15～20天采血抽檢。對(duì)于大中型雞場(chǎng)，抽樣率不得小于0.1%；否則不具備參考價(jià)值。小型雞養(yǎng)殖場(chǎng)則需要增加抽樣率，建議不低于2%；否則，不具備參考價(jià)值。抽檢后，按照上述公式計(jì)算雞群HI抗體平均效價(jià)，如果平均值低于4log2，則需要對(duì)雞群進(jìn)行二次免疫接種；若平均值在4log2以上，則正常飼養(yǎng)。首次免疫接種后第15～20天再次進(jìn)行采血抽檢，并計(jì)算雞群HI抗體平均效價(jià)，如果平均值低于5log2，則需要對(duì)雞群進(jìn)行二次免疫接種，若平均值在5log2以上，則正常飼養(yǎng)。此后可延長(zhǎng)抽檢間隔時(shí)間，需要注意的是同日齡種雞的HI抗體效價(jià)要高于其他雞至少1log2，若低于1log2，則認(rèn)為免疫失敗，需要再次進(jìn)行免疫接種。

3.其他情況。若雞場(chǎng)不具備進(jìn)行ND抗體檢測(cè)的條件，則可以嘗試提高免疫接種質(zhì)量與密度，使雞群保持持續(xù)、穩(wěn)定的抗體，一般7～10日齡的雛雞可以選擇IV系或者NDII系疫苗進(jìn)行首次免疫接種；20～25日齡雞群可以選擇II系疫苗進(jìn)行免疫接種，同時(shí)肌內(nèi)注射或者皮下注射規(guī)格為0.3毫升/只的ND油乳劑滅活苗；60日齡雞群建議選擇聯(lián)苗或者弱毒苗接種；120日齡雞群建議選擇聯(lián)苗或者油苗接種；10月齡以上的種雞群除首次免疫接種外，還需要進(jìn)行1次油苗接種。通過(guò)上述方式能取得良好的免疫效果，降低雞群發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，在新城疫抗體技術(shù)檢測(cè)過(guò)程中，需要嚴(yán)格按照規(guī)定進(jìn)行操作，雞新城疫會(huì)嚴(yán)重影響?zhàn)B殖業(yè)發(fā)展，需要做好實(shí)驗(yàn)室診斷，并且在診斷過(guò)程中應(yīng)用好抗體檢測(cè)技術(shù)，有效降低發(fā)病率，促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。