炎癥反應(yīng)與子癇前期發(fā)病的關(guān)系

郭惠萍，沈麗丹

張家港市第一人民醫(yī)院產(chǎn)科，江蘇張家港215600

子癇前期是妊娠期婦女特有的一種綜合征，其發(fā)生率為3%～5%，以水腫、高血壓和蛋白尿為主要特征，對妊娠結(jié)局影響較大［1］。子癇前期在妊娠早期一般是由胎盤發(fā)育不良導(dǎo)致的，在妊娠中后期多是由系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)引起的［2］。已有研究證實，在子癇前期發(fā)生、發(fā)展過程中炎癥因子發(fā)揮了重要作用，C反應(yīng)蛋白（CRP）、IL-6等炎癥因子與子癇前期的臨床表現(xiàn)密切相關(guān)［3］。本研究觀察了子癇前期孕婦血清CRP、IL-6水平以及胎盤組織炎癥細胞浸潤情況，并探討了炎癥反應(yīng)與子癇前期發(fā)病的關(guān)系?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2020年9月—2021年5月在張家港市第一人民醫(yī)院產(chǎn)科接受剖宮產(chǎn)分娩的子癇前期孕婦30例（觀察組），年齡18～35歲，BMI 25～32 kg/m2，孕周33～39周。所有孕婦符合《婦產(chǎn)科學(xué)》（第8版）中子癇前期的診斷標準［4］。排除合并急慢性感染、慢性高血壓、糖尿病、自身免疫性疾病者［5］以及早產(chǎn)或胎膜早破者。同期選擇在張家港市第一人民醫(yī)院產(chǎn)科接受剖宮產(chǎn)分娩的正常孕婦30例（對照組），年齡20～36歲，BMI 25～31 kg/m2，孕周34～38周。兩組年齡、BMI、孕周具有可比性。本研究經(jīng)張家港市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，所有研究對象知情同意并簽屬知情同意書。

1.2 血清CRP、IL-6檢測 所有研究對象剖宮產(chǎn)前，采集清晨空腹肘靜脈血10 mL，置于含枸櫞酸鈉的抗凝管中，3 000 r/min離心15 min，留取上層血清。采用免疫比濁法檢測血清CRP，采用化學(xué)發(fā)光法檢測血清IL-6。

1.3 胎盤組織病理學(xué)檢測 剖宮產(chǎn)后留取新鮮胎盤組織，避開胎盤出血區(qū)、鈣化區(qū)、壞死區(qū)，在靠近母體面和臍帶區(qū)各取一塊胎盤組織，體積約1 cm×1 cm×1 cm。10%甲醛固定過夜，常規(guī)石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，HE染色，中性樹膠封固。顯微鏡下觀察胎盤組織中性粒細胞浸潤情況，并進行中性粒細胞計數(shù)。另取新鮮胎盤組織，采用ELISA法檢測中性粒細胞趨化因子IL-8、IL-1β。

1.4 子宮蛻膜組織CD14+、CD14+CD16+巨噬細胞檢測 取胎盤附著處子宮蛻膜組織，洗凈后剪碎，置于試管中，依次加入CD14-FITC、CD16-PE各10μL，再提取單個核細胞層懸液50μL，混勻后靜置30 min，加入PBS 400μL。混懸后，采用流式細胞儀檢測CD14+、CD14+CD16+巨噬細胞比例。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件。符合正態(tài)分布的計量資料以±s表示，結(jié)果比較采用獨立樣本t檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson直線相關(guān)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清CRP、IL-6水平比較 觀察組與對照組血清CRP水平分別為（8.7±2.4）、（5.1±1.6）mg/L，血清IL-6水平分別為（2.9±0.9）、（1.1±0.3）pg/mL。觀察組血清CRP、IL-6水平均高于對照組（t分別為4.303、2.776，P均<0.05）。

2.2 兩組胎盤組織中性粒細胞浸潤情況以及相關(guān)因子水平比較 顯微鏡下觀察，觀察組滋養(yǎng)細胞增生，蛻膜細小動脈內(nèi)膜纖維性增厚，管腔狹窄，管壁纖維樣壞死及炎癥浸潤，發(fā)生急性動脈粥樣變化，可見中性粒細胞、淋巴細胞浸潤以及胎盤出血性梗死。對照組滋養(yǎng)細胞正常，胎盤無出血性梗死。見圖1。兩組胎盤組織中性粒細胞計數(shù)及IL-1β、IL-8水平比較見表1。

圖1 兩組胎盤組織中病理變化（HE染色）

表1 兩組胎盤組織中性粒細胞計數(shù)及IL-1β、IL-8水平比較（±s）

表1 兩組胎盤組織中性粒細胞計數(shù)及IL-1β、IL-8水平比較（±s）

組別觀察組對照組tP n 30 30中性粒細胞計數(shù)（×109/L）7.39±2.18 6.67±1.49 3.746<0.01 IL-1β（pg/mL）0.160±0.004 0.100±0.003 7.692<0.01 IL-8（ng/mL）0.51±0.13 0.33±0.07 4.621<0.01

2.3 子癇前期孕婦血清炎癥因子與胎盤組織中性粒細胞浸潤的關(guān)系 Pearson直線相關(guān)分析顯示，子癇前期孕婦血清CRP、IL-6水平與胎盤組織中性粒細胞計數(shù)呈正相關(guān)關(guān)系（r分別為0.928、0.883，P均<0.01）。

2.4 兩組子宮蛻膜組織CD14+、CD14+CD16+巨噬細胞比例比較 觀察組與對照組子宮脫膜組織CD14+巨噬細胞比例分別為（35.49±5.59）%、（22.26±4.87）%，CD14+CD16+巨噬細胞比例分別為（8.84±3.76）%、（7.86±2.26）%。觀察組子宮脫膜組織CD14+巨噬細胞比例高于對照組（t=7.962，P<0.05），而兩組子宮脫膜組織CD14+CD16+巨噬細胞比例比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=-1.883，P>0.05）。

3 討論

子癇前期是妊娠期常見的并發(fā)癥之一［5］。目前，盡管增加了對孕婦產(chǎn)前并發(fā)癥的檢測和早期干預(yù)，子癇前期孕婦的病死率已經(jīng)顯著降低，但子癇前期導(dǎo)致孕婦分娩后遺癥的發(fā)生率仍有增加趨勢［6］。研究表明，既往發(fā)生子癇前期孕婦未來發(fā)生腦血管疾病和癡呆的風(fēng)險有所增加［7］。因此，加大對孕婦子癇前期的早期診斷和前期干預(yù)，最大限度地改善子癇前期孕婦癥狀，對最終改變孕婦和胎兒的臨床結(jié)局十分必要。合胞體是凋亡或活化的滋養(yǎng)細胞脫落的異源納米微囊泡，富含可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1和內(nèi)皮糖蛋白，在正常孕婦肺和血漿中的數(shù)量顯著增加。合胞體滋養(yǎng)細胞微囊泡和外泌體可引起炎癥反應(yīng)［8］。體外研究顯示，合胞體滋養(yǎng)細胞微囊泡激活外周血單核細胞可導(dǎo)致促炎癥細胞因子釋放增多；當微囊泡暴露于孕婦外周血單核細胞時，促炎癥細胞因子釋放增多。從某種意義上來說，子癇前期是一種過度炎癥反應(yīng)，誘發(fā)因素為抗炎癥細胞因子和促炎癥細胞因子失衡。研究表明，子癇前期的發(fā)生及其臨床表現(xiàn)與一些炎癥細胞因子水平變化密切相關(guān)［9］。CRP是固有免疫系統(tǒng)的重要組成成分，為非特異性抑炎因子。當機體發(fā)生感染時，受TNF-α、IL-6等炎癥因子刺激，血清CRP水平會在1～2天達到高峰；當感染消退時，血清CRP水平會降至正常［10］。研究發(fā)現(xiàn)，與正常孕婦相比，子癇前期孕婦血清IL-10、CRP水平顯著升高，證實子癇前期的發(fā)病有免疫反應(yīng)的參與，其中炎癥細胞因子起到至關(guān)重要的作用。與非孕婦比較，孕晚期正常孕婦Th1細胞數(shù)量及Th1/Th2降低，而孕晚期子癇前期孕婦Th1細胞數(shù)量及Th1/Th2升高［11］。本研究結(jié)果顯示，子癇前期孕婦血清CRP、IL-6水平高于對照組，且胎盤組織炎癥細胞浸潤更明顯，表明炎癥因子IL-6、CRP在子癇前期的發(fā)病中扮演重要角色。

近年來，被確定為子癇前期檢測指標的血清標志物較多，如血漿胎盤蛋白13、可溶性酪氨酸激酶1、胎盤生長因子等，但這些標志物預(yù)測子癇前期的效能有待進一步驗證。中性粒細胞/單核細胞和淋巴細胞/單核細胞是反映全身炎癥反應(yīng)程度和免疫平衡的有效指標，可用于多種疾病的早期診斷、預(yù)后評估和療效評價［12］。由于胎盤細胞（基質(zhì)細胞和滋養(yǎng)細胞）過度產(chǎn)生的炎癥因子可以激活中性粒細胞和單核細胞，這兩種細胞的生物學(xué)功能具有多樣性，在子癇前期發(fā)病過程中其多樣性表現(xiàn)更為顯著［13］。本研究結(jié)果顯示，觀察組胎盤組織IL-1β、IL-8表達均高于對照組，表明炎癥因子IL-1β、IL-8亦參與子癇前期的發(fā)病過程。

在妊娠期間，母體先天性免疫系統(tǒng)顯著激活，主要體現(xiàn)在外周血單核細胞數(shù)量增加。巨噬細胞來源于血液中的單核細胞，并執(zhí)行重要的免疫功能，如吞噬、抗原呈遞、細胞因子分泌以及免疫應(yīng)答編配［14］。在妊娠期間，巨噬細胞調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細胞凋亡，在著床、胎盤形成和分娩中發(fā)揮關(guān)鍵作用。然而，子癇前期孕婦的母胎界面巨噬細胞數(shù)量是否發(fā)生變化仍存在爭議。先兆子癇的特征是螺旋動脈生理轉(zhuǎn)化失敗和滋養(yǎng)層淺層浸潤、母體內(nèi)皮細胞功能障礙和炎癥反應(yīng)。有研究認為，巨噬細胞誘導(dǎo)的細胞凋亡限制了子癇前期孕婦血管內(nèi)滋養(yǎng)細胞侵襲。母胎界面的蛻膜內(nèi)巨噬細胞于母體對胎兒抗原的耐受性以及宿主對子宮內(nèi)感染的防御都極為重要［15］。分娩與急性炎癥反應(yīng)以及巨噬細胞向子宮內(nèi)膜和子宮頸的流入和活化有關(guān)，結(jié)果表明這些細胞在整個妊娠和分娩過程中具有重要作用。單核細胞新的分類方法基于CD14、CD16表達［16-17］。本研究標記巨噬細胞采用CD14、CD16，觀察組子宮蛻膜組織CD14+巨噬細胞比例增多，呈現(xiàn)出單核細胞向巨噬細胞轉(zhuǎn)化，表明巨噬細胞能夠發(fā)揮促炎作用。既往研究表明，若巨噬細胞呈現(xiàn)CD16+，必然伴隨CD14+［18］。本研究觀察組子宮脫膜組織CD14+巨噬細胞比例高于對照組，但兩組子宮脫膜組織CD14+CD16+巨噬細胞比例比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，與以往研究［18］結(jié)果不符，其原因有待于進一步探索。

綜上所述，子癇前期孕婦血清CRP、IL-6水平以及胎盤組織中性粒細胞、巨噬細胞水平明顯升高；無論全身炎癥反應(yīng)還是胎盤局部炎癥反應(yīng)在子癇前期孕婦中普遍存在。因此，炎癥反應(yīng)與子癇前期發(fā)病密切相關(guān)。